6.病原微生物实验室消毒灭菌题库2009.12沈 伟

病原微生物实验室的消毒与灭菌上海市疾病预防控制中心沈伟一、基本概念（一）定义1、消毒（disinfection）：杀灭或清除传播媒介上病原微生物，使其达到无害化的处理。

2、灭菌（sterilization）：杀灭或清除传播媒介上一切微生物的处理。

3、消毒剂（disinfectant）：用于杀灭传播媒介上的微生物使其达消毒或灭菌要求的制剂。

4、灭菌剂（sterilant）：可杀灭一切微生物（包括细菌芽孢）使其达到灭菌要求的制剂。

5、有效氯（available chlorine）：有效氯是衡量含氯消毒剂氧化能力的标志，是指与含氯消毒剂氧化能力相当的氯量（非指消毒剂所含氯量），其含量用mg/L 或%浓度表示。

有效碘及有效溴的定义和表示法与有效氯对应。

（二）消毒灭菌的一般原则1、及时彻底的原则：发现污染和实验完毕及时清理与消毒，做到彻底不留死角；二、三级实验室的物品应消毒后才能带出，带出的外包装也需消毒；实验人员工作结束以及离开实验室前应清洗消毒双手。

2、有效的原则（1）使用符合卫生部规定的消毒剂、消毒器械：绝大部分消毒剂、消毒器械必须具有卫生部卫生许可批件，使用前仔细阅读产品使用说明书，严格按照经批准的使用说明书进行操作。

如有疑问，可上卫生部网站查询消毒产品批件（含产品性能、适用范围与使用说明）。

75%酒精、紫外线杀菌灯、压力蒸汽灭菌器应经省级卫生行政部门备案；部分次氯酸钠消毒剂和戊二醛消毒剂应当分别符合卫生部《次氯酸钠类消毒剂卫生质量技术规范》和《戊二醛类消毒剂卫生质量技术规范》并经省级以上卫生行政部门认定的消毒检测机构的卫生安全评价。

（2）根据物品上污染微生物的种类、数量和危害性选择消毒灭菌的方法：①对受到细菌芽孢、真菌孢子、分枝杆菌和经血传播病原体（乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、艾滋病病毒等）污染的物品，选用高水平消毒方法或灭菌的方法。

②对受到真菌、亲水病毒、螺旋体、支原体、衣原体等污染的物品，选用中水平以上的消毒方法。

③对受到一般细菌和亲脂病毒等污染的物品，选用中水平或低水平消毒法。

④被消毒物品上微生物污染特别严重或存在较多有机物时，应加大消毒药剂的使用剂量和/或延长消毒作用时间。

（3）根据消毒物品的性质选择消毒方法：①耐高温、耐湿度的物品和器材，应首选压力蒸汽灭菌；耐高温的玻璃器材、油剂类和干粉类等可选用干热灭菌。

②光滑表面可选择紫外线消毒器近距离照射，或液体消毒剂擦拭；多孔材料表面可采用喷雾消毒法。

（4）消毒或灭菌设备与消毒剂应定期用物理、化学与生物方法进行监测。

3、避免二次污染的原则：4、减少对人体伤害的原则：配制消毒液和实施消毒时做好必要的个人防护。

5、减少对被消毒灭菌物品损害的原则：不耐热、不耐湿以及贵重物品选择环氧乙烷等低温消毒或灭菌方法，器械浸泡选择对金属基本无腐蚀性的消毒剂。

二、常用消毒和灭菌方法（一）压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌的操作与监测应遵循《医院消毒供应中心第二部分：清洗消毒及灭菌技术操作规范》（WS 310.2-2009）和《医院消毒供应中心第三部分：清洗消毒及灭菌效果监测标准》（WS 310.3-2009）。

1、性能特点：是最可靠、首选的灭菌方法。

2、适用范围：适用于耐湿热物品的灭菌；不适用于粉剂、油剂的灭菌。

3、常见类型：①下排气式压力蒸汽灭菌器。

②预真空与脉动真空压力蒸汽灭菌器：不适用于液体的灭菌。

4、灭菌参数：5、注意事项：①应由经培训合格的人员进行操作和维护；②物品应放在能渗透热蒸汽的容器中进行灭菌，装载要松散以利蒸汽穿透；③新使用的包装材料在使用前应先用生物指示剂进行验证；④液体灭菌时应采用慢排方式；⑤应在关闭主蒸汽阀并待温度降至80℃以下时打开柜门，开门时戴适当的手套和面罩。

（二）干热灭菌1、性能特点：可杀灭各种微生物达到灭菌。

2、适用范围：适用于耐高温物品（油剂、粉末、金属、玻璃等）的灭菌。

3、灭菌参数：注：有机物品灭菌时，温度应不超过170℃。

4、注意事项：①灭菌前须洗净以防碳化；②灭菌时勿与底与壁接触，物品包装不宜过大，高度不超过2/3，物品之间留有空隙；③粉剂与油脂的厚度不超过1.3cm；④灭菌后温度降至40℃以下再打开门，开门时应戴适当的手套和面罩。

（三）紫外线消毒1、性能特点：可达高水平消毒，使用方便；但由于对人皮肤黏膜有刺激作用，并产生臭氧，在有人情况下使用受到限制。

2、适用范围：室内空气消毒、能直接照射到的光滑物体表面的消毒。

3、常见类型：①普通直管紫外线消毒灯；②高强度紫外线消毒灯；③低臭氧紫外线消毒灯；④高臭氧紫外线消毒灯；⑤循环风紫外线消毒器。

4、使用方法：可采用悬挂式或移动式紫外线杀菌灯。

①室内空气消毒：安装紫外线杀菌灯的数量为每立方米体积不少于1.5W，照射时间不少于30分钟。

②物体表面消毒：被消毒物体表面离紫外线杀菌灯的垂直距离应控制在1米以内，照射时间不得少于30分钟。

5、注意事项：①不得使紫外线光源照射到人，以免引起损伤，为此开关应安装在室外并有专人管理。

消毒后应开窗通风，驱散残留臭氧后人方可进入室内。

②应保持紫外线灯表面清洁、无尘，每周用酒精棉球擦拭灯管，发现灯管表面有灰尘、油污时应随时擦拭，以免影响消毒效果。

③消毒时，应保持室内清洁干燥，减少尘埃和水雾，当存在有机物与悬浮粒子、温度低于20℃或高于40℃、相对湿度大于60% 时，应适当延长照射时间。

④由于紫外线穿透力较弱，用紫外线消毒物品表面时，应使被消毒部位充分暴露，以直接受到紫外线照射且达到足够的照射剂量。

⑤紫外线灯的辐射强度降至标准值以下应及时更换；一般紫外线杀菌灯的使用寿命为1000小时。

（四）高效过滤除菌1、性能特点：过滤除菌是空气净化的最佳方式，高效过滤除菌技术，对空气中≤0.3μm颗粒与微生物的阻留率能达到99.97 %以上。

2、适用范围：主要用于生物安全柜与生物安全实验室的空气净化除菌。

3、注意事项：必须定期更换高效过滤器（HEPA），更换前应先用甲醛或过氧乙酸进行熏蒸消毒，更换时严格做好工作人员防护（穿戴防护服、口罩、护目镜、手套、鞋套等）；换下的过滤装置装入密封袋内由具有资质的单位焚烧处理。

（五）含氯消毒剂1、性能特点：常用含氯消毒剂有漂白粉、次氯酸钙（漂粉精）、次氯酸钠、二氯异氰尿酸钠（优氯净）、三氯异氰尿酸等，剂型有粉剂、片剂、液体。

含氯消毒剂有强的刺激性，对金属有腐蚀性，对织物有漂白作用，能杀灭细菌繁殖体、真菌、病毒、结核杆菌（分枝杆菌）与细菌芽孢而达到高水平消毒。

2、适用范围：适用于环境、物体表面、污水污物的消毒。

3、使用方法：液体可采用喷雾、浸泡、擦拭等方法，干粉用于排泄物、呕吐物等消毒。

4、注意事项：保存在密闭容器内，放置阴凉、干燥、通风处；使用液不稳定，应每天更换，浸泡消毒时加盖；用于含有大量有机物的血液、体液、分泌物、培养物等消毒时应提高浓度和延长作用时间；操作时应做好个人防护，消毒后用清水去除残留。

（六）过氧乙酸1、性能特点：过氧乙酸为酸性透明液体，易挥发易分解（尤其有重金属离子或遇热时），有强的挥发性气味和腐蚀性。

过氧乙酸性能不稳定，多采用A液、B液二元包装，使用前按使用说明书将A液、B液按一定比例混合后在室温下放置24h～48h，待原液浓度达到16%～20%方可使用。

过氧乙酸可杀灭各种微生物达到高水平消毒和灭菌。

2、适用范围：适用于耐腐蚀物品、环境、物体表面与空气等的消毒。

3、使用方法：可采用喷雾、浸泡、擦拭、熏蒸等方法。

用过氧乙酸薰蒸消毒，应在密闭条件下进行，每立方米用16%～20 %的过氧乙酸5ml～7ml（1g/m3），放置瓷或玻璃容器中，加热薰蒸1～2h。

4、注意事项：过氧乙酸性质不稳定，应于用前配制，配制的稀溶液应盛于有盖塑料容器中，避免接触金属离子；对多种金属和织物有强烈的腐蚀和漂白作用，使用时应注意；操作时应做好个人防护，消毒完成后用清水去除残留。

（七）二氧化氯1、性能特点：二氧化氯在常温下为黄绿色气体，有强刺激性和腐蚀性，性质极不稳定，常在临用前产生；市售二氧化氯剂型有粉剂、片剂、液体，临用前须进行活化。

二氧化氯可杀灭细菌繁殖体、真菌、病毒、结核杆菌（分枝杆菌）和细菌芽孢，达到高水平消毒。

2、适用范围：适用于环境、物体表面和水的消毒。

3、使用方法：常用浸泡、擦拭、喷雾等方法。

4、注意事项：二氧化氯活化液和稀释液不稳定，应现配现用；对金属有腐蚀性，对织物有漂白作用；操作时应做好个人防护，消毒完成后用清水去除残留。

（八）碘伏1、性能特点：碘伏为棕红色液体，是碘与表面活性剂的不定型结合物，可杀灭细菌繁殖体、真菌、病毒、结核杆菌（分枝杆菌），不能杀灭细菌芽孢。

2、适用范围：适用于手、皮肤、粘膜等消毒。

3、使用方法：常用浸泡、擦拭、冲洗等方法。

4、注意事项：应于阴凉处避光、防潮、密封保存，宜在使用前配制；避免接触银、铝和二价合金；用于敏感者与敏感组织需慎重；消毒时若存在有机物，应提高药物浓度或延长消毒时间。

（九）乙醇1、性能特点：乙醇别名酒精，为无色透明液体，易挥发，易燃烧。

消毒酒精浓度为75%(ml/ml)，可快速杀灭细菌繁殖体、真菌、病毒、结核杆菌（分枝杆菌），但不能杀灭细菌芽孢，在短时间内对肠道病毒（如手足口病病原体）的效果不佳。

2、适用范围：适用于手、皮肤消毒以及小面积物体表面与医疗器械的紧急快速消毒。

3、使用方法：常用浸泡和擦拭方法。

手与皮肤消毒用75 %乙醇溶液浸泡或擦拭1min；物体表面消毒用75%乙醇溶液浸泡或擦拭，作用10min以上。

4、注意事项：易燃，忌明火；醇可使蛋白质变性凝固形成保护层，影响杀菌效果，消毒前应将物品表面的有机物清除，不宜用于被血、脓、粪便等污染表面的消毒；乙醇能破坏仪器的胶粘物质与镜头，可使橡胶与某些塑料变硬膨胀。

（十）戊二醛1、性能特点：戊二醛为无色或淡黄色液体，在酸性条件下相对稳定，在中到碱性条件下杀菌效果较好并对金属腐蚀性较小；使用液的浓度多为2%，pH多为7.5～8.5。

戊二醛可杀灭各种微生物达到高水平消毒和灭菌。

2、适用范围：适用于不耐热不耐腐蚀医疗器械与精密仪器等的消毒或灭菌。

3、使用方法：多用浸泡方法，对大型仪器设备用擦拭法。

严格按产品使用说明操作，灭菌须作用10h，消毒一般作用30min～45min，消毒完毕用合适的水充分去残留。

4、注意事项：①戊二醛对手术刀片等碳钢制品有腐蚀性，使用前应先加入0.5%亚硝酸钠防锈；②温度对戊二醛的杀菌作用有明显影响，20℃以下杀菌作用显著降低；③使用过程中应加强戊二醛浓度检测，以便及时更换；④戊二醛对皮肤粘膜有刺激性，在通风良好的环境下使用，容器加盖，接触戊二醛溶液时应做好个人防护，防止接触皮肤、溅入眼内或吸入体内，消毒后物品要充分去残留；⑤不宜用于环境物体表面消毒。

（十一）甲醛1、性能特点：甲醛具有强烈的刺激性，常见消毒剂为福尔马林（即含36%～40%甲醛的水溶液）与白色粉末状的多聚甲醛，可杀灭各种微生物达到高水平消毒和灭菌。