叶绿素-a测定
叶绿素a测定实验报告
叶绿素a测定实验报告（一）实验目的及意义水体富营养化可以通过跟踪监测水中叶绿素的含量来实现，其中叶绿素a是所有叶绿素中含量最高的，因此叶绿素a的测定能示踪水体的富营养化程度。
（二）水样的采集与保存1.确定具体采样点的位置2.在采样点将采样瓶及瓶盖用待测水体的水冲洗3-5遍3.将采样瓶下放到距水面0.5-1m处采集水样2.5L4.在采样瓶中加保存试剂，每升水样中加1%碳酸镁悬浊液1mL5.将采样瓶拧上并编号6.用GPS同步定位采样点的位置（三）仪器及试剂仪器：1.分光光度计2.比色池：10mm3.过滤装置：过滤器、微孔滤膜（孔径0.45μm，直径60mm）4.研钵5.常用实验设备试剂：1.碳酸镁悬浮液：1%。
称取1.0g细粉末碳酸镁悬浮于100mL蒸馏水中。
每次使用时要充分摇匀2.乙醇溶液（四）实验原理将一定量的试样用微孔滤膜过滤，叶绿素会留在滤膜上，可用乙醇溶液提取。
将提取液离心分离后，测定750、663、645、630mm的吸光度，计算叶绿素的浓度。
（五）实验步骤1.浓缩：在一定量的试样中添加0.2mL碳酸镁悬浮液，充分搅匀后，用直径60mm 的微孔滤膜吸滤.过滤器内无水分后,还要继续抽吸几分钟.如果要延时提取,可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。
2. 提取：将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中，加入7mL乙醇溶液至滤纸浸湿的程度,把滤膜研碎,再少量地加乙醇溶液，把滤膜完全研碎，然后用乙醇溶液将已磨碎的滤膜和乙醇溶液洗入带刻度的带塞离心管中，使离心管内提取液的总体积不超过10mL，盖上管塞，置于的暗处浸泡24h。
3.离心：将离心管放入离心机中，以4000r/min速度离心分离20min。
将上清液移入标定过的10mL具塞刻度管中，加少量乙醇于原提取液的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心，合并上清液。
此操作重复2-3次，直至沉淀不含色素为止，最后将上清液定容至10mL。
4.测定：取上清液于10mm的比色池中，以乙醇溶液为对照溶液，读取波长750,663,645和630mm的吸光度。
叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想
叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想叶绿素a法是一种常用的方法，用于测定富营养化湖泊中的藻类数量。
藻类是湖泊生态系统中不可或缺的一部分，它们是湖泊中的初级生产者，对水体性质的改变和生态系统的稳定起着重要作用。
通过测量叶绿素a的含量，我们可以快速、准确地评估湖泊中的藻量，为湖泊生态环境的恢复和管理提供科学依据。
在实际操作中，叶绿素a法主要是通过光谱测量的原理来确定叶绿素a 的浓度。
叶绿素a是藻类中最常见的一种叶绿素，其含量与藻类生物量呈正相关关系。
通过测定叶绿素a的浓度可以间接反映湖泊中藻类的数量。
叶绿素a法的测量过程相对简单，操作方便。
需要从湖水中取样，然后将样品过滤，提取出其中的叶绿素a。
接下来，使用光谱仪或叶绿素荧光仪对提取液的吸光度进行测量，并根据已有的标准曲线，计算出叶绿素a的浓度。
根据叶绿素a的浓度，结合湖泊的水量，可以计算出湖泊中的藻类数量。
通过叶绿素a法测定富营养化湖泊中的藻量，我们可以对湖泊生态系统的变化进行准确监测和评估。
在富营养化的湖泊中，藻类数量往往过多，导致水体浑浊，水质恶化，甚至引起水华等严重问题。
通过及时测定藻类数量，我们可以对湖泊中的富营养化程度进行评估，并针对性地采取相应的措施来改善湖泊生态环境。
然而，在使用叶绿素a法进行藻量测定时，也存在一些问题和限制。
叶绿素a法只能测定叶绿素a的浓度，而不能提供其他藻类的信息。
不同种类的藻类在湖泊中有不同的生态功能和生态作用，因此仅仅通过叶绿素a的浓度无法全面了解湖泊中藻类的组成和结构。
叶绿素a 法只能在湖泊表层水体中进行测定，无法对湖泊底泥和深层水体中的藻类进行评估。
在一些深水湖泊中，底泥中的藻类可能对湖泊生态系统的健康产生重要影响，但使用叶绿素a法无法直接获取这些信息。
叶绿素a法是一种快速、准确测定富营养化湖泊中藻量的有效方法。
它为湖泊生态环境的管理和恢复提供了重要的技术支持。
然而，我们也需要意识到叶绿素a法的局限性，进一步研究和探索其他方法，以便更全面地了解湖泊中藻类的数量和组成。
水质 叶绿素a 的测定 荧光分光光度法
标题：水质中叶绿素a的测定——荧光分光光度法一、概述水是生命之源，保持水质清洁对人类健康和生态环境至关重要。
叶绿素a是植物和浮游生物体内的主要叶绿素成分，它对于水体中的生物和化学过程具有重要影响。
对水体中叶绿素a的测定具有重要意义。
在众多叶绿素测定方法中，荧光分光光度法以其快速、灵敏、准确的特点而受到广泛关注。
二、荧光分光光度法原理及优势1. 荧光分光光度法原理荧光分光光度法是通过叶绿素a在特定激发光波长下产生荧光信号，并测定荧光光谱的强度来间接测定叶绿素a的浓度的一种方法。
其原理是叶绿素a在特定波长范围内吸收光线后发生激发态转变为基态过程中发射荧光。
通过检测叶绿素a的荧光强度，可以推断水体中叶绿素a的浓度。
2. 荧光分光光度法优势a. 灵敏度高：荧光分光光度法对叶绿素a含量的检测具有高灵敏度，能够在较低浓度范围内进行准确测定。
b. 非破坏性：该方法无需对样品进行破坏性处理，不影响样品原有特性，适用于连续监测和长期调查。
c. 快速准确：荧光分光光度法测定简单快速，结果准确可靠。
三、荧光分光光度法测定叶绿素a的步骤1. 样品采集样品来源于自然水体或实验室模拟水体。
应在样品收集后尽快进行实验分析，或进行样品的冷冻保存。
2. 仪器调试根据仪器操作手册调试荧光分光光度仪，确定最佳激发波长和检测波长。
3. 样品处理将样品进行预处理，如滤过滤膜去除颗粒物，或使用溶解剂提取叶绿素a。
4. 校准仪器利用标准叶绿素a溶液校准荧光分光光度仪，确定荧光强度和叶绿素a浓度的线性关系。
5. 测定样品放置校准后的仪器测定样品荧光强度，根据标准曲线计算叶绿素a 的浓度。
四、荧光分光光度法在水质监测中的应用荧光分光光度法在水质监测中具有广泛的应用价值，主要体现在以下几个方面：1. 监测水体富营养化程度：叶绿素a是水体富营养化的重要指标之一，荧光分光光度法可以快速准确地测定水体中叶绿素a的含量，从而评估水体富营养化程度。
2. 生态环境评估：荧光分光光度法可对水体中微生物的活性和生态环境进行评估，对水体生物多样性和生态平衡的研究具有重要意义。
叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想
叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想一、前言在环境科学研究领域，对于湖泊水质的监测和评估一直是一个重要课题。
其中，富营养化湖泊中藻量的测定是其中的关键环节之一。
在现有的测定方法中，叶绿素a法作为一种常用的测定手段，被广泛运用于湖泊水质监测中。
本文将针对叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的相关概念和方法进行深入探讨，以期能够从多个角度全面理解这一测定方法的意义和应用。
二、叶绿素a法测定藻量的原理和方法1. 叶绿素a的作用和意义叶绿素a是植物和藻类进行光合作用的关键色素之一，其含量可以反映藻类的生物量和分布情况。
通过测定叶绿素a的含量，可以间接推算出藻类的生物量，从而评估湖泊水体中藻类的丰富程度和富营养化程度。
叶绿素a法成为了一种常用的测定富营养化湖泊中藻量的手段。
2. 叶绿素a法的测定步骤叶绿素a法的具体测定步骤主要包括样品采集、叶绿素提取、叶绿素含量的测定和数据处理等过程。
通过精确的实验操作和数据处理，可以获得准确的叶绿素含量数据，从而推算出藻类的生物量，进而对湖泊水质进行评估和监测。
三、叶绿素a法在富营养化湖泊中的应用1. 优势和局限性叶绿素a法作为测定湖泊藻量的常用方法，具有操作简便、成本低廉、结果快速等优点，因而在一定程度上适用于大规模的水质监测工作。
但叶绿素a法也存在一定的局限性，例如受光照和水体透明度影响大等。
2. 感想和展望通过对叶绿素a法的研究和实践，我深切感受到这一方法的重要性和局限性。
在今后的工作中，我愿意进一步探索和改进叶绿素a法，在提高测定精度的也能够更好地适用于不同类型的湖泊和藻类群落。
四、总结通过本文的探讨，我们全面了解了叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的原理、方法和应用。
也对这一方法的优势、局限性以及未来的发展方向有了更深入的认识。
在今后的工作中，希望能够结合实际情况，不断优化和改进叶绿素a法，并且结合其他测定方法，以期能更准确地评估湖泊的水质和生态环境。
（以上内容仅供参考，具体文章内容仍需根据实际情况进行撰写）：五、叶绿素a法的优势和局限性叶绿素a法作为一种常用的测定湖泊中藻量的方法，具有诸多优势。
叶绿素a测定
实验三富营养化湖中藻量的测定（叶绿素a法）一、实验目的富营养化湖由于水体受到污染，尤以氮磷为甚，致使其中的藻类旺盛生长。
此类水体中代表藻类的叶绿素a浓度常大于10微克/升。
本实验通过测定不同水体中藻类叶绿素a浓度，以考查其富营养化情况。
二、器材与用品1、分光光度计（波长选择大于750nm，精度为0.5－2nm）。
2、比色杯（1cm；4cm）。
3、台式离心机（3500r/min）4、离心管（15ml具刻度和塞子）；冰箱5、匀浆器或小研钵。
6、蔡氏滤器；滤膜（0.45微克，直径47mm）。
7、真空泵（最大压力不超过300kpa）。
8、MgCO3悬液：lg MgCO3细粉悬于100ml蒸馏水中。
9、90％的丙酮溶液：90份丙酮＋10份蒸馏水。
10、水样：两种不同污染程度的湖水水样各2L.三、方法和步骤1、按浮游植物采样方法，湖泊、水库采样500ml，池塘300ml。
采样点及采水时间同“浮游植物”。
2、清洗玻璃仪器：整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤剂清洗干净，尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素a分解。
3、过滤水样；在蔡氏滤器上装好滤膜，每种测定水样取50－500ml减压过滤。
待水样剩余若干毫升之前加入0.2ml MgCO3悬液、摇匀直至抽干水样。
加入MgCO3可增进藻细胞滞留在滤膜上，同时还可防止提取过程中叶绿素a被分解。
如过滤后的载藻滤膜不能马上进行提取处理，应将其置于干燥器内，放冷（4℃）暗处保存，放置时间最多不能超过48小时。
4、提取；将滤膜放于匀浆器或小研钵内，加2－3ml90％的丙酮溶液，匀浆，以破碎藻细胞。
然后用移液管将匀浆液移入刻度离心管中，用5ml90％丙酮冲洗2次，最后向离心管中补加90％丙酮，使管内总体积为10ml。
塞紧塞子并在管子外部罩上遮光物，充分振荡，放冰箱避光提取18－24小时。
5、离心：提取完毕后，置离心管于台式离心机上3500r/min，离心10min，取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管中，塞上塞子，3500r/min在离心10min。
叶绿素a监测法
任务一 叶绿素a的测定
三、测定方法和步骤
❖1.水样的采集与保存
湖泊、水库：采样500mL；池塘：300mL ❖2. 浓缩水样 抽滤 ❖3.取出滤膜→在冰箱内低温干燥6～8h→研磨器（加入少 量碳酸镁粉末及2～3mL 90%的丙酮），充分研磨→离心 （3000～4000转/分）10分钟→上清液倒入容量瓶 ❖再 研 磨 离 心 ， 上 清 液 再 转 入 容 量 瓶 中 ， 重 复 l ～ 2 次 ， 用 90%的丙酮定容
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测定意义 测定原理 测定方法和步骤 计算方法 环境标准
项目二 水体初级生产力的测定
水体初级生产力：指水生植物（主要 是浮游植物）进行光合作用的强度。
任务一 叶绿素a的测定
一、测定意义
1.是水中浮游植物生物量的指标 2.直接反映水体富营养化的程度
二、测定原理
叶绿素a是有机物，不溶于水，但能溶于有机溶剂。先用醋 酸纤维滤膜抽滤水样，然后破碎细胞，用90%丙硐提取叶 绿素a，再用分光光度计测叶绿素a的吸光度，最后利用公 式计算叶绿素a的含量。
❖4. 将上清液在分光光度计上，用1cm光程的比色皿，分别读 取 750nm、663nm、645nm、630nm波长的吸光度，并以90% 的丙酮作空白吸光度测定
任务一 叶绿素a的测定
四、计算方法
叶绿素a=
[11.64(D663
D750 )
2.16(D645 V
D750 )
•
0.10(D630
D750 )] V1
总P(mg/L)
BOD(mg/L )
水色
< 0.001 <1
蓝绿色
中营养
0.1～0.3 0.001～
0.01 1～10
叶绿素a与叶绿素b含量的测定
实验目的和意义
叶绿素a与叶绿素b是高等植物叶绿体色素的重 要组分，约占到叶绿体色素总量的75%左右。 叶绿素在光合作用中起到吸收光能、传递光能 的作用(少量的叶绿素a还具有光能转换的作用)， 因此叶绿素的含量与植物的光合速率密切相关， 在一定范围内，光合速率随叶绿素含量的增加 而升高。另外，叶绿素的含量是植物生长状态 的一个反映，一些环境因素如干旱、盐渍、低 温、大气污染、元素缺乏都可以影响叶绿素的 含量与组成，并因之影响植物的光合速率。因 此叶绿素含量a与叶绿素b含量的测定对植物的 光合生理与逆境生理具有重要意义。
将上式整理，可以得到下式： Ca=0.0127A663-0.00269A645 （3） Cb=0.0229A645-0.00468A663 （4） 将叶绿素的浓度改为mg/L，则上式变为： Ca=12.7A663-2.69A645 （5） Cb=22.9A645-4.68A663 （6） CT=Ca+Cb=8.02A663+20.21A645 （7） CT为叶绿素的总浓度
实验仪器及材料
实验材料 实验材料：
– 菠菜或其它绿色植物
实验仪器及试剂： 实验仪器及试剂
– UV-1700分光光度计；天平；剪刀；打孔器； 研钵；移液管；漏斗；量筒；培养皿；滤纸； 丙酮；石英砂；CaCO3；
实验步骤
1. 提取叶绿素
选取有代表性的菠菜叶片数张，于天平上称取0.5g， （也可用打孔器打取一定数量的叶圆片，计算总 的叶面积），剪碎后置于研体中，加入5ml 80%丙 酮，少许CaCO3和石英砂。仔细研磨成匀浆，用 滤斗过滤到10ml量筒中，注意在研钵中加入少量 80%丙酮将研钵洗净，一并转入研钵中过滤到量 筒内，并定容至10ml。将量筒内的提取液混匀， 用移液管小心抽取5ml转入25ml量筒中，再加入 80%丙酮定容至25ml（最终植物材料与提取液的 比例为W：V＝0.5：50＝1：100，叶色深的植物 材料比例要稀释到1：200）。
富营养化水体中藻类的测定叶绿素a法
（7）
CT为叶绿素的总浓度
（5） （6）
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实验仪器及材料
• 实验材料： • 富营养化水体中的藻类
• 实验仪器及试剂： • UV-1700分光光度计；天平；剪刀；打孔器；研钵；移液管；漏斗；量筒；培养皿；滤纸；丙酮；石 英砂；CaCO3；
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实验步骤
1. 提取叶绿素
于天平上称取0.5g藻体，（也可用打孔器打取一定数量的 叶圆片，计算总的叶面积），剪碎后置于研体中，加入 5ml 80%丙酮，少许CaCO3和石英砂。仔细研磨成匀 浆，用滤斗过滤到10ml量筒中，注意在研钵中加入少量 80%丙酮将研钵洗净，一并转入研钵中过滤到量筒内， 并定容至10ml。将量筒内的提取液混匀，用移液管小心 抽取5ml转入25ml量筒中，再加入80%丙酮定容至 25ml（最终植物材料与提取液的比例为W：V＝0.5： 50＝1：100，叶色深的植物材料比例要稀释到1： 200）。
在海岸或海湾中，引起“赤潮”的藻类主要是甲 Ceratium ）、环沟藻属
（Gymnodinium）、膝沟藻属（Gonyaulax
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水体富营养化
•评价水体富营养化的指标
❖ 测定水域中光合作用强度与呼吸作用强度之比
❖测定藻类生产潜在能力（AGP） ❖黑❖其它评价富营养化的方法
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水体富营养化
水体形成富营养化的指标是：水体中含氮量大于0.2-0.3 mg/L ，含磷 量大于0.01~0.02mg/L ，生化需氧量（BOD5 ）大于10mg/L。在pH值7~9 的淡水中细菌总数达到105个／ml，标志藻类生长的叶绿素a大于10g／L。
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湖塘水体叶绿素a测定实验
实验题目:湖塘水体叶绿素a测定1.实验概述1.1实验目的及要求⑴初步了解叶绿素a测定的原理和常规测定方法；⑵通过实验，掌握叶绿素a的测定方法及富营养化水样的前处理方法；⑶熟练掌握抽滤装置及分光光度计的使用。
1.2实验原理浮游植物的主要光合色素是叶绿素，常见的有叶绿素a、b和c.叶绿素a存在于所有的浮游植物中，大约占有机物干重的1~2%是估算浮游植物生物量的重要指标，因此浮游植物叶绿素a含量的测定成为浮游植物量的重要指标而被广泛应用。
浮游植物叶绿素a的测定方法有许多种，根据所使用的仪器可以分为高效液相色谱法（HPLC法）、荧光光度计法和分光光度计法等。
高效液相色谱法能够很精确地测定各种光合色素的含量，但由于仪器昂贵，分析操作步骤繁琐，一般不能用于野外大量样品的快速分析。
荧光光度计也能够精确地测定叶绿素a的含量，特别是能够测定叶绿素a含量较低的样品，但由于分析过程中容易受其他色素或色素衍生物的干扰，也不利于快速分析各类不同的野外样品。
因此，分光光度计法成为最常用的浮游植物叶绿素a含量的测定方法。
在所有分光光度计法中，根据所用的色素萃取液分为了丙酮法、甲醇法和乙醇法等，再根据比色所用的波长，又分为单色法和多色法（例如单色丙酮法和四色丙酮法）等。
主要的细胞破碎法有研磨、低温冻融、超声破碎等。
尽管丙酮现在仍广泛用于实际分析中，但由于丙酮的萃取效率比较差，特别是对蓝藻的叶绿素a的萃取效率比较低，使得甲醇和乙醇成为替代丙酮的色素萃取剂。
不过，甲醇对人体毒害性大，且在酸化过程中容易产生误差，于是，乙醇成为现在广泛应用的叶绿素a的萃取剂。
超声波破碎法因快速、提取效率高等特点也被研究者所青睐。
2.实验内容2.1实验方案设计叶绿素是植物光合作用中的重要光和色素，通过测定浮游植物叶绿素，可初步掌握水体质量，在水质监测中，可将叶绿素a作为湖泊富营养化的指标之一。
在叶绿素a含量测定试验中，根据需要进行分层采样或混合采样，采样量视浮游植物的分布量而定，若浮游植物分布较少，则可多采样。
叶绿素A的测定
叶绿素不属于芳香族化合物，不溶于 水，但溶于有机溶剂（通常采用丙 酮），叶绿素A呈蓝绿色，叶绿素B呈 黄绿色，二者同时被提取出来。在可 见光的范围，两者分别在663nm和 645nm处波长有最大吸收。
叶绿素A的测定方法
利用分光光度法，将所得的上清液在 分光光度计上，用1cm光程的比色皿， 分别读取在 750nm,663nm,645nm,630n m波长处的吸光度，并以90%的丙 酮作空白吸光度测定，对样品吸光度 进行校正。
叶绿素a的测定叶绿素a的测定方法叶绿素a的测定国标叶绿素a叶绿素a测定方法叶绿素a的测定标准叶绿素a的测定公式水体叶绿素a的测定叶绿素含量的测定叶绿素含量测定
目录
1 2 3 4
叶绿素A的测定原理
叶绿素A的测定方法
叶绿素A的测定步骤
叶绿素A的测定影响
叶绿素A的测定原理 有机溶剂直接提取浮游生物浓缩样中 的叶绿素，用分光光度计测定其吸光 度，根据叶绿素的特定波长.吸收，用 相关公式计算其含量。 叶绿素主要有叶绿素A和叶绿素B,前 者分子式为C55H72O5N4Mg,叶绿素 B分子式为C55H70O6N4Mg。
将所测的对应波长的吸光度，代入如 下公式计算： 叶绿素A=（1/V*L）*(11.64*（D663D750)-2.16*(D645-D750）+0.10*（D630D750)*V1
式中:D为所测的吸光度 V为水样体积 V1为提取液定容后的体积 L为比色皿光程
叶绿素A的测定步骤
测定叶绿素A时，样品应该尽快测定， 防止过长，叶绿素降解，尽可能在低温 弱光条件下进行。
控制好提取时间，使得提取更充分，保 证较高的提取效率。
这个实验叫做叶绿素A的测定方法探 讨，实验误差较大，最佳的方法还在 不断地深入研究中，有兴趣的同学可 以查阅相关资料，开动大脑马达，提 出自己的见解。
HJ897-2017水质-叶绿素a的测定验证报告
方法验证报告项目名称：水质叶绿素ａ的测定方法名称：《水质叶绿素ａ的测定分光光度法》HJ897-2017报告编写人：参加人员：审核人员：报告日期：1 实验室基本情况1.1 人员情况实验室检测人员已通过标准《水质叶绿素ａ的测定分光光度法》HJ897-2017的培训，熟知标准内容、检测方法及样品数据采集和处理等，考核合格，得到公司技术负责人授权上岗。
表1参加验证人员情况登记表1.2 检测仪器/设备情况表2主要仪器基本情况1.3 检测用试剂情况表3主要试剂及溶剂基本情况1.4 环境设施和条件情况实验室具有校准合格的温湿度计，环境可以控制在标准要求范围内，满足检测环境条件。
另外实验室配备了洗眼器、喷淋设施、护目镜、灭火器等的安全防护措施，符合实验室安全内务的要求。
2 实验室检测技术能力2.1方法原理将一定量样品用滤膜过滤截留藻类，研磨破碎藻类细胞，用丙酮溶液提取叶绿素，离心分离后分别于750nm、664nm、647nm、630nm波长处测定提取液的吸光度，根据公式计算水中叶绿素ａ的浓度。
2.2.样品的采集按照GB/T14581、HJ/T91和HJ494中的相关规定进行样品的采集。
样品的采集用有机玻璃采水器采集水面下0.5m样品，采样体积为1L，在样品中加入1ml碳酸镁悬浊液，以防止酸化引起色素溶解。
2.2.样品的保存样品采集后应在0℃-4℃避光保存、运输，24h内运送至检测实验室过滤（若样品24h 不能送达检测实验室，应现场过滤，滤膜避光冷冻运输）。
2.3试样的制备2.3.1过滤在过滤装置上装好玻璃纤维滤膜。
确定取样200ml（根据水体的营养状态确定取样体积富营养和中营养过滤体积为100-200ml，贫营养过滤体积为500-1000ml），用量筒量取200ml混匀的样品，进行过滤，最后用少量的蒸馏水冲洗滤器壁。
过滤时负压不超过50kpa，在样品刚刚完全通过滤膜时结束抽滤，用镊子将滤膜取出，将有样品的一面对折，用滤纸吸干滤膜水分。
叶绿素a的测定
叶绿素a的测定
叶绿素a是植物细胞中的主要叶绿素类型之一，它在光合作用中起着关键作用。
测定叶绿素a的含量可以揭示植物的光合作用活性和叶片的健康状态。
以下是一种常用的测定叶绿素a的方法：
1. 取少量新鲜的叶片样品。
2. 将叶片样品置于琼脂杯中，加入适量的乙醇。
3. 使用玻璃棒或研钵对叶片进行研磨，使叶绿素a溶解在乙醇中。
4. 将溶液转移到离心管中，使用超高速离心将样品离心，以去除残留的植物细胞。
5. 将上清液取出，加入一定体积的乙醇使溶液体积为10mL。
6. 使用光度计将溶液的吸光度测量在多个波长下，包括
663nm和645nm。
7. 使用下列公式计算叶绿素a的浓度：叶绿素a (mg/L) = (12.25 * A663 - 2.79 * A645) * V/M
其中，A663和A645分别为溶液在663nm和645nm处的吸光度，V为体积（mL），M为叶片的质量（g）。
8. 根据测定结果，可以计算叶绿素a的浓度或相对含量。
需要注意的是，以上方法是一种常见的叶绿素a测定方法，具体测定步骤和浓度计算公式可能会有所不同。
因此，在具体操作时，建议参考实验方法或使用商业化的叶绿素测定试剂盒，以确保准确性和可重复性。
叶绿素a测定原理
叶绿素a测定原理叶绿素a测定原理是一种用于测量植物叶片中叶绿素a含量的方法。
叶绿素a 是一种绿色植物色素，它在光合作用中起着重要的作用。
通过测定叶片中叶绿素a的含量，可以了解植物叶片的光合效率和生长状态，对研究植物生理和生态学过程具有重要意义。
测定叶绿素a的原理主要基于叶绿素a的光谱吸收特性。
叶绿素a对可见光波段具有很高的吸收能力，特别是对于蓝色和红色光有较高的吸收峰。
测定叶绿素a含量的方法主要基于两种原理：叶绿素a的吸收光谱特性和叶绿素a与其他光敏色素的色素比。
第一种方法是利用叶绿素a的吸收光谱特性进行测定。
吸收光谱是指物质对于不同波长的光的吸收程度。
叶绿素a在波长范围为400-700纳米的可见光区域内吸收光线，特别是在430-450纳米和660-680纳米的波长区域具有高峰吸收。
通过测定叶绿素a溶液或植物叶片对不同波长光线的吸收程度，可以建立叶绿素a的吸光度与其浓度之间的关系。
一般采用分光光度计或分光光度计对吸光度进行测量，通过测量的数据来计算叶绿素a的浓度。
第二种方法是采用叶绿素a与其他光敏色素的色素比进行测定。
在叶绿素a与其他光敏色素的比例固定的情况下，可以通过测定叶绿素a与其他光敏色素之间的比例来间接推断叶绿素a的含量。
其中，常用的方法是使用高效液相色谱法（HPLC）测定叶绿素a与叶绿素b的比例，从而推算出叶绿素a的含量。
该方法的优点是准确性较高，但需要使用昂贵的仪器设备和耗时的操作。
此外，还有一些其他的衍生方法可以用于叶绿素a的测定，例如光学方法、荧光分析、近红外光谱法等。
这些方法在测定叶绿素a含量方面具有一定的优势，可以根据实际需求选择适合的方法进行测定。
总之，叶绿素a测定方法的原理主要基于叶绿素a的光谱吸收特性和叶绿素a 与其他光敏色素的色素比。
通过选取合适的测定方法和仪器设备，可以准确地测定出植物叶片中叶绿素a的含量，为植物生理和生态学研究提供重要数据。
叶绿素a的测定
叶绿素a的测定叶绿素a是一种广泛存在于植物、藻类和某些细菌中的绿色色素。
它在光合作用中起着至关重要的作用，能够吸收光能并将其转化成化学能，为生物体提供能量。
因此，对叶绿素a的测定具有重要的科研和应用价值。
叶绿素a的测定方法有很多种，其中比较常用的包括光度法、荧光法和高效液相色谱法等。
下面我将分别介绍这几种测定方法的原理和步骤。
光度法是一种通过测量叶绿素a溶液对特定波长光线的吸光度来确定其浓度的方法。
具体步骤如下：首先，将待测叶绿素a溶液与一定体积的溶剂混合均匀，然后使用分光光度计测量溶液在特定波长下的吸光度。
根据比色法原理，吸光度与溶液中叶绿素a的浓度成正比，通过与标准曲线对比，可以得出待测溶液中叶绿素a的浓度。
荧光法是一种通过测量叶绿素a溶液在受到激发光后发射的荧光强度来确定其浓度的方法。
具体步骤如下：首先，将待测叶绿素a溶液置于荧光测量仪器中，通过激发光源激发溶液中的叶绿素a分子，叶绿素a分子吸收光能后会发出特定波长的荧光。
测量仪器会记录下荧光的强度，根据荧光强度与叶绿素a浓度之间的关系，可以确定待测溶液中叶绿素a的浓度。
高效液相色谱法是一种通过将待测叶绿素a溶液进行色谱分离并测定其峰面积来确定其浓度的方法。
具体步骤如下：首先，将待测叶绿素a溶液注入高效液相色谱仪中，通过色谱柱的分离作用，将溶液中的叶绿素a与其他组分分离开来。
然后，通过检测器检测叶绿素a的吸光度，并计算出其峰面积。
根据标准曲线可以得出待测溶液中叶绿素a的浓度。
除了上述几种常用的测定方法外，还有一些其他的测定方法，如超声波法、电化学法等。
这些方法在特定的研究领域或实际应用中具有一定的优势和适用性。
叶绿素a的测定是研究光合作用和植物生长发育等领域的基础工作。
不同的测定方法在原理和步骤上存在一定的差异，但都能够准确地测定叶绿素a的浓度。
科研工作者和应用人员可以根据实际需要选择合适的测定方法，并结合其他相关指标对叶绿素a进行综合分析和评估，为科学研究和实践应用提供有力的支撑。
水质 叶绿素 a 的测定 分光光度法
水质叶绿素 a 的测定分光光度法以水质叶绿素 a 的测定分光光度法为标题叶绿素是植物和藻类等光合生物中的一种重要色素，它在光合作用中起到接收和转换光能的作用。
因此，叶绿素的测定对于研究光合作用、水质监测以及环境保护等方面具有重要意义。
本文将介绍一种常用的测定叶绿素 a 含量的方法——分光光度法。
分光光度法是通过测量样品在不同波长下的吸光度来确定其中叶绿素 a 的含量。
首先，我们需要准备一定浓度的叶绿素 a 标准溶液作为参照物。
然后，将待测样品中的叶绿素 a 提取出来，通常采用酒精提取法或醚提取法。
提取后的溶液中，叶绿素 a 会表现出特定的吸光度谱，即在特定波长下吸收特定的光线。
接下来，我们需要使用分光光度计来测定叶绿素 a 的吸光度。
首先，调节分光光度计到叶绿素 a 吸收峰值波长，通常为665 nm。
然后，将标准溶液和待测样品溶液分别放入光度计的比色皿中，设置比色皿为空白。
在特定波长下测量样品的吸光度，并记录下数值。
在得到吸光度数值后，我们可以利用标准曲线来计算出样品中叶绿素 a 的浓度。
标准曲线是通过制备一系列已知浓度的叶绿素 a 标准溶液，并测定它们的吸光度得到的。
通过绘制标准曲线，我们可以根据待测样品的吸光度数值，在曲线上找到相应的浓度值。
需要注意的是，分光光度法测定叶绿素 a 的时候，样品中可能存在其他物质的干扰，这会导致测定结果的误差。
为了减小干扰，我们可以采用去色处理，即利用活性炭或其他吸附剂去除样品中的色素。
此外，为了保证测定结果的准确性，我们需要进行多次测定，并计算平均值。
总结起来，分光光度法是一种常用的测定叶绿素 a 含量的方法。
通过分光光度计测量样品在特定波长下的吸光度，并利用标准曲线计算出叶绿素 a 的浓度。
该方法简单、快速，并且具有较高的准确性和重复性。
在水质监测、环境保护和光合作用研究等领域，分光光度法都发挥着重要的作用。
通过准确测定叶绿素 a 的含量，我们可以更好地了解光合生物的生长状况和环境状况，为相关研究和应用提供可靠的数据基础。
叶绿素A测定复习试题
叶绿素a测定复习试题一、填空题1.叶绿素a的测定方法有和，环境监测(生物)技术规范中规定用。
答：分光光度法；荧光光度法；分光光度法；2.地表水环境质量标准(GHZB1-1999)中，对控制湖泊水库富营养化的特定项目之一叶绿素a作了明确规定：Ⅰ类水质的标准值为，Ⅱ类水质的标准值为，Ⅲ类水质的标准值为，Ⅳ类水质的标准值为，Ⅴ类水质的标准值为。
答：≤0.001mg/L；≤0.004mg/L；≤0.01mg/L；≤0.03mg/L；≤0.065mg/L。
3.进行生物样品污染物测定的样品处理可概括为二个过程：第一步是将样品、、；第二步是将前一步处理过的样品以消除干扰，提高被测组分的浓度。
答：分离；纯化；浓缩；分解消化或提取。
4.经丙酮浸取含有叶绿素a的溶液，以溶液为参比，在波长、、、下测定吸光度。
在波长测定丙酮溶液的空白值。
丙酮溶液空白值应不大于。
答：丙酮；663nm；645nm；630nm；750nm；0.05。
5.经离心后的样品上清液，在750nm处测定吸光度，用以校正提取液的，当测定用1cm比色皿，吸光度超过时，提取液应。
答：浊度；0.005；重新离心。
二、问答题1. 控制叶绿素a指标值的意义是什么？答：叶绿素a是反映水体富营养化的一个重要指标。
控制叶绿素a就在于控制富营养化和藻类生物量，从而揭示湖库富营养化发生的内在实质。
2. 叶绿素a的涵义是什么？答：指水中藻类具有光合色素的叶绿素。
3.什么叫富营养化？答：营养物质特别是含氮和磷的化合物，在淡水或盐水中的富集。
富营养化加速了藻类和较高等植物的生长。
4.评定水质富营养化的几种类型标准是什么？答：参照国际经济合作与发展组织(OECD)规定和关于评定湖泊富营养化状态的叶绿素a划分标准：以≥78μg/L为重富营养型；11—78μg/L为富营养型；3.0—11μg/L为中营养型；＜3.0μg/L为贫营养型。
5.用于叶绿素a测定的水样应如何保存？答：每升水样加1%碳酸镁悬浊液1ml，以防止酸化引起色素溶解。
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叶绿素-a的测定
方法原理（荧光分光光度法）
用丙酮溶液提取浮游植物色素进行荧光测定，根据提取液酸化前后的荧光值，可分别计算叶绿素-a及脱镁色素的含量。
试剂及其配置
1、丙酮溶液（9+1）：量取900ml丙酮与100ml水混合，保存在棕色试剂瓶中。
2、碳酸镁悬浮液（10g/L）:称取1g碳酸镁，加水至100ml，搅匀，盛试剂瓶中待用，用时需要再摇匀。
3、盐酸：=1.18g/ml
4、盐酸溶液（5+95）：在搅拌下，将5ml盐酸缓慢的加到95ml水中，混匀，保存于滴定瓶中。
5、硅胶
仪器及设备
1、荧光计
2、冰箱
3、离心机
4、电动吸引器
5、过滤装置
6、玻璃纤维滤膜：直径为25mm的WhatmanGF/C或孔径为0.45um的纤维素脂微孔滤膜
7、具塞离心管：容量10ml
8、干燥器
9、棕色试剂瓶：容量100ml，1000ml
10、量筒：容量100ml、200ml、1000ml
11、定量加液器：容量10ml
12、镊子
一般实验室常用设备
分析步骤
1、样品制备
量取一定体积海水（通常大洋水250ml-500ml，近岸或港湾水50-100ml），加2ml 碳酸镁悬浮液，混匀，用玻璃纤维滤膜或孔径为0.45um的纤维素脂微孔滤膜过滤，过滤负压不得2超过50KPa.
2、样品提取
将过滤了的样品的滤膜放入具塞离心管，加入10ml丙酮溶液，摇荡，放置冰箱冷藏室14-24h，提取叶绿素-a。
若虑得的样品不能及时提取，应该将滤膜抽干、对折，再套上一张滤纸置于含硅胶的干燥器内，贮存在低于1摄氏度的冰箱中。
3、样品离心
离心速度：（3000-4000）r/min
离心时间:10min
4、样品测定
荧光计激发波长为436nm,发射波长670nm
零点调节：用丙酮溶液调节，使荧光计指针指零。
将提取的上层提取液注入测定池。
选择相应量程，测定样品的荧光值R b。
加2滴盐酸溶液至测定池，摇匀，经30s后再测其荧光值Ra。
5、仪器校正
用标准叶绿素-a校正。
用分光光度计校正：取一定体积正处于指数增长期的单细胞藻类培养液，依上述方法提取其叶绿素-a，用分光光度法测定，计算该提取液的叶绿素-a浓度。
将它
），用荧光计最低灵敏度量程测定此稀释液稀释至荧光计可测范围的浓度（ρ
ch-a
酸化前后的荧光值，按式（7）和（8）计算该量程的换算因子和酸化因子：
F D= ρch-a /R b (7)
R=Ra/Rb (8)
式中：
F D————测定量程的换算因子；
ρch-a——————叶绿素-a稀释液的浓度，单位为微克每毫升（ug/ml）；R————酸化因子；
Rb
酸化前测定的荧光值；
————
酸化后测定的荧光值。
Ra
————
按此法依次稀释原提取液，在荧光计其他量程上分别测定，即可得到各量程换算因子（F D）。
仪器校正应定期进行。
6、记录与计算
将测得数据记入表A.23中，按式（9）分别计算叶绿素—a和脱镁色素的浓度：
ρ1= F D R/(R-1) (Rb- Ra)v/V和
ρ2= F D R/(R-1)（R* Ra- Rb）v/V (9)
式中：
ρ1————样品中叶绿素-a的浓度，单位为微克每升(ug/L)
ρ2————样品中脱镁色素浓度，单位为微克每升(ug/L)
F D————测定时所用量程的换算因子;
R————纯叶绿素-a的酸化因子；
Rb
样品酸化前的荧光值；
————
样品酸化后的荧光值；
Ra
————
v
丙酮提取液的体积，单位为毫升(mL)；
————
V
海水样品的实用体积，单位为升(L)。
————。