不同龋敏感人群变形链球菌分离株乳酸脱氢酶活性的初步研究
不同龋敏感儿童唾液中变异链球菌含量及钙离子浓度检测分析
不同龋敏感儿童唾液中变异链球菌含量及钙离子浓度检测分析丁良;张林;汪慧渊;肖刚;李之香;郭青玉【期刊名称】《兰州大学学报:医学版》【年(卷),期】2022(48)11【摘要】目的检测无龋儿童和不同程度患龋儿童唾液中变异链球菌含量及钙离子浓度,分析其差异,探索其与低龄儿童龋(ECC)发病率之间的联系,为后续评估龋病风险提供依据。
方法选取90名不同患龋程度的4~5岁儿童,进行龋病检查和非刺激性唾液样本收集,检测样本钙离子浓度;剩余唾液采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测变异链球菌的数量。
结果无龋组、轻度以及重度ECC组唾液钙离子浓度均值分别为0.81、0.92、0.99 mmol/L;变异链球菌的数量均值分别0.91×10^(5)、1.72×10^(5)、7.04×10^(5)C FU/mL。
结论变异链球菌的数量是唾液中预测低龄儿童患龋风险最重要的指标,2.00×10^(5)CFU/mL很可能是筛查重度ECC患儿的基线水平。
【总页数】5页(P86-89)【作者】丁良;张林;汪慧渊;肖刚;李之香;郭青玉【作者单位】西安交通大学口腔医院a陕西省颅颌面精准医学研究重点实验室;陕西省牙颌疾病临床研究中心;儿童牙颌疾病诊疗专科;河南科技大学第一附属医院口腔科;包头医学院口腔医学院【正文语种】中文【中图分类】R788.1【相关文献】1.不同龋敏感儿童菌斑中变异链球菌数量及菌群比例的定量分析2.不同龋敏感儿童口腔不同基因型变异链球菌临床分离株在不同pH条件下产生GTF能力的比较研究3.变异链球菌、乳酸杆菌、双岐杆菌在不同龋患指数儿童唾液中分布情况的比较观察4.维吾尔族和汉族不同龋敏感儿童变异链球菌和远缘链球菌的检测5.不同龋敏感性儿童口腔变异链球菌信号分子AI-2活性检测因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高致龋性变异链球菌临床分离株的初步筛选
高致龋性变异链球菌临床分离株的初步筛选作者：王成龙刘佼佼苏东华储冰峰李少华夏伟罗燕萍杨继勇丁红梅赵强邓斌席庆徐娟邵宁生来源：《华西口腔医学杂志》2013年第02期[摘要] 目的初步筛选高致龋性变异链球菌临床分离株。
方法通过检测41株变异链球菌临床分离株的产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力，初步筛选出高致龋性变异链球菌临床分离株。
结果不同的变异链球菌临床分离株体外致龋能力不同，其中3株产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力均较高，提示可能为高致龋性变异链球菌临床分离株，另外3株产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力均较低，提示可能为低致龋性变异链球菌临床分离株。
结论通过筛选可能获得了高致龋性变异链球菌临床分离株。
[关键词] 变异链球菌；产酸；耐酸；黏附；细胞外多糖；筛选[中图分类号] R 780.2 [文献标志码] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.02.006变异链球菌是人类口腔中的主要致龋菌。
研究[1]表明：从高龋患者口腔中分离获得的变异链球菌临床分离株比从无龋健康人口腔中获得的分离株具有更强的致龋能力，更易诱发龋病；也有研究[2]证实，不同龋指数患者口腔中的变异链球菌的体外致龋能力是不同的，提示不同个体龋易感性的差异可能与口腔中变异链球菌不同毒力株的致龋能力不同有关。
从临床上分离鉴定的变异链球菌临床分离株中筛选出具有较高致龋能力的菌株，对于研究龋病的发病机理是非常必要的。
在以前的研究[3]中，本课题组从临床上分离鉴定出41株变异链球菌临床分离株，本研究在此基础上，通过检测变异链球菌临床分离株的黏附能力、合成细胞外多糖的能力、产酸能力和耐酸能力，对变异链球菌临床分离株的致龋特性进行分析，希望从41株变异链球菌临床分离株中筛选出高致龋性变异链球菌株。
1 材料和方法1.1 实验菌株变异链球菌国际参考菌株Ingbritt（首都医科大学附属北京口腔医院口腔医学研究所）；41株变异链球菌临床分离株[3]（从临床上分离获得，41株菌株已通过基因分型鉴定为不同基因型，其中1～10号菌株来源于无龋健康人，11～41号菌株来源于高龋患者）。
差异致龋性变形链球菌细胞外蛋白质组学的初步研究
差异致龋性变形链球菌细胞外蛋白质组学的初步研究戴煦原;崔伟;杨光;王成龙【摘要】目的:分析不同致龋性变形链球菌之间细胞外蛋白质的差异性,研究变形链球菌的胞外蛋白在细菌致龋过程中的作用.方法:相同条件培养变形链球菌的不同致龋性的临床分离株,提取各菌株的细胞外蛋白,利用双向电泳和质谱分析进行蛋白组学的分析,重组表达并纯化在不同致龋性变形链球菌表达有差异的胞外蛋白.结果:获得在不同致龋性变形链球菌中构成与表达量有差异性的细胞外蛋白,并重组表达了这一组蛋白中的S1蛋白.结论:不同致龋性变形链球菌细胞外蛋白表达有差异,这些差异蛋白有可能在变形链球菌致龋过程中具有重要的生物学功能.【期刊名称】《中华老年口腔医学杂志》【年(卷),期】2019(017)004【总页数】5页(P193-197)【关键词】变形链球菌;蛋白组学;双向电泳;质谱分析【作者】戴煦原;崔伟;杨光;王成龙【作者单位】解放军总医院第一医学中心口腔科北京 100853;解放军总医院第一医学中心口腔科北京 100853;军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京 100850;解放军总医院第一医学中心口腔科北京100853【正文语种】中文【中图分类】R781龋病是一种牙体硬组织的慢性破坏性疾病，变形链球菌是导致龋病发生发展的主要致龋菌[1～3]。
对于变形链球菌致龋因子的结构和功能，包括葡糖基转移酶[4～6]、表面抗原AgI/II蛋白家族[7,8]、葡聚糖结合蛋白[9,10]以及群体感应密切相关LuxS蛋白和信号分子AI-2[11]等，学者们已经有了比较明确的认识。
但是基于变形链球菌致龋因子的龋病防治效果还不能令人满意[4,9,12,13]。
分泌蛋白质组(Secretome)是蛋白质组学研究的重要内容，是对细胞释放到胞外的全部蛋白质(细胞外蛋白)的研究。
病原菌的分泌蛋白质往往含有致病或毒性因子，与疾病发病机制密切相关，对疾病发病机理的研究等具有重要意义[14～18]。
蜂胶对不同龋敏感者变形链球菌临床分离株产酸影响的体外实验研究
低下 ， 各 种 疾病 症状 反应 不 如 年 青 人 敏 感 ， 往 在 吞 咽 障 碍 对 往 出现 多时 才 来 就 诊 等 因 素 有 关 。尽 管 现 代 医 学 检 查 手 段 方 法
此 ， 了提 高 老 年 食 管 癌 早 期 诊 断 率 ．单 钡 双 重 造 影 法 ” 作 为 “ 应 为常规检查 ． 同时 在 检 查 造 影 过 程 中 ， 多 时 相 透 视 观 察 与 多 要
西南军医
２０ 年 １ 月 第 ｌ 卷 第 ６ ０８ １ Ｏ 期
Ｊ ｒａ ｏ Ｍｉａ ｕｇｏ ｏｔ ｅ ｈ ａＮ ｖ ，０８ １（） ｏｎ ｌ ｆ ｌ ｒ Ｓｒｅｎｉ Ｓｕｈ ｓ Ｃ ｉ ｏ ．２０ ；０６ ｕ ｉ ｙ ｔ ｎ ｗｌ ｎ
了双 比衬 效果 ， 可 摄 片 ， 时 可 获得 较 好 的双 对 比造 影 片 ， 即 这 因
口吞 钡 法 、 水 双 对 比法 、 管 法 、 气 同 时 吸 人 法 等 双 对 比 食 钡 导 钡
管造 影 或 食 管 镜 检 比较 ， 者 不 用 口服 产 气 粉 而 避 免 了 呛 咳 、 前
口吐 白沫 、 口鼻 喷 出产 气 粉 和 水 、 心 呕 吐 、 气 打 嗝 等 口服 产 恶 暖 气 粉 带 来 的诸 多不 良反 应 ； 比 胃镜 检 查 更 是 方 便 易 行 、 痛 相 无 苦 ， 年 人 易 接 受 ， 且 容 易 配 合 。 此 方 法 对 于 早 期 食 管 癌 发 老 而 现率 较 高 ， 于 食 管 粘 膜 皱 襞 的 小 病 变 ， 小 于 ２ｍ 隆 起 性 病 对 如 ｃ 灶或 扁平 息 肉状 或 浅 溃 疡等 均 能 发 现 。“ 钡 双 重 造 影 法 ” 单 须 站 立 位 （ 半 斜 卧 位 ）连 续 吞服 ２～ 或 ３大 口钡 剂 是 关 键 所 在 ， 而
不同龋敏感儿童变异链球菌临床分离株合成胞外多糖能力的实验研究
Ｔ ｅａｉｔ ｙ ｔｅｉｅｗａ ｒ ｏｕ ｌ ａ ｄｉｓｌｂｅｇｕ ａｓｏ ｔ ｔｃ ｃｕ ｔ ｓｉ ｌ ｅ ｏ ｔｅｈ曲 ｃｒ ｈ ｂｌ ｔ ｓｎ ｓ ｔ － ｌ ｅｎ — ｏ ｌ ｌｃ ｆＳｒ ｏｏ ｃｓｍｕａ ｏａ ｄｆ ｍ ｉ ａ－ ｉ ｏ ｙ ｈ ｚ ｅｓ ｂ ｎ ｕ ｎ ｐ ｅ ｎ ｓ ｔ ｒ ｈ
《 海南医学） ０ ０ பைடு நூலகம் １ 年第 ２ 卷第 ２ 期 １ ４
Ｈ Ｉ Ａ Ｄ Ｃ ＬＪ Ｕ Ａ Ａ Ｎ Ｎ ＭＥ Ｉ Ａ Ｏ ＲＮ Ｌ
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论 著 ・
不 同龋 敏 感 儿 童 变异 链 球 菌 临床 分 离株 合成胞外 多糖 能力 的实验研究
ｇｕａ ｓ ｓ ａｕｅ ｄｃ ｍ ａｅ ｍｏ ｇｈ曲 ｃｒ ｓｓｓｅｔ ｌ ｇｏｐ ｍｉｄｅｃｒ ｓ ｕｃｐ ｂｅｇｏ ｐａｄｃｒ ｌｃ ｓｒｄａ ｏ ｐ ｒｄａ ｎ ｉ ａｉ － ｃｐｉ ｅ ｒｕ ， ｄ ｌ ａｉ － ｓｅ ｔ ｌ ｒｕ ａ ｎ ｗａ ｍｅ ｎ ｅ ｕ ｂ ｅｓ ｉ ｎ －
Ａｂ ｌｔ ｏ ｓ ｎ ｈ ｓ ｚ ｔ ｒ ｓ ｌ ｂ ｅ ａ ｄ ｉ ｓ ｌ ｂ ｅ ｇ ｕ ａ ｓｏ ｔ ｅ ｔ ｃ ｃ ｕ ｎ ｔ ｎ ｏ ａ ｅ ｒ ｍ ｈ ｌ ｒ ｎ ｗｉｈ ｉ ｙ ｔ ｙ ｔ ｅ ｉ ｅｗａ ｅ － ｏ ｕ ｌ ｎ － ｎ ｏ ｕ ｌ ｌ ｃ ｎ ｆＳ ｒ ｐ ｏ ｏ ｃ ｓＩ ｕ ａ ｓｉ ｌ ｔ ｄ ｆ ｏ ｃ ｉ ｅ ｔ ｉ ｓ ｄ
基金项 目： 四川省教育厅课题基金资助 （ 编号 ：０ ２ ０ ０ ２０Ａ ７ ）
ｉｓ ｆｅ ｏ ｐ ｉ ｒ ｅ ｍｄ ｔ ｅｃ ．ｅａ ｏ ｅｗｅ ｎ ｃ ｒｏ ｓｅ ｐ ｒｅ ｃ ｓａ ｄ ａ ｉ ｔ ｓｔ ｙ ｔ ｅ ｉｅ ｇｕ ａ ｓ Ｒｅ ｕ ｔ ｅ －ｒ ｅ ｇ ｕ ｎ ｏ ｄ ｒ ｏ ｆ ｏ ｌｔ ｎ ｂ ｔ ｅ ａ ｉ ｕ ｘ ｅ ｎ ｅ ｎ ｂ ｌ ｅ ｏ ｓ ｎ ｓｚ ｌ ｃ ｎ ． ｓ ｌ ｒ ｔ ｈ ｉ ｉ ｉ ｉ ｈ ｓ
不同龋敏感儿童口腔唾液内微生物群落组成分析的开题报告
不同龋敏感儿童口腔唾液内微生物群落组成分析的开题报
告
一、选题背景
口腔龋病等口腔疾病是常见病和慢性病，对人体健康产生极大的影响。
而口腔唾液内的微生物群落是控制口腔疾病发生的重要因素之一。
针对龋敏感儿童，从微生物群落组成的角度分析其唾液中微生物的类型和数量，为制定针对性的预防和治疗措施提供理论基础。
二、研究目的
本研究旨在分析不同龋敏感儿童口腔唾液内微生物群落组成，探究其与龋病发生的关系，为预防和治疗龋病提供科学依据。
三、研究内容
本研究将选择一定数量的龋敏感儿童作为研究对象，采集其口腔唾液样品，进行微生物群落组成的分析。
通过对比分析不同龋敏感儿童唾液中的微生物类型和数量，发现与龋敏感儿童父母和亲属微生物群落组成的差异，并进一步研究其与龋病发生的关系。
四、研究意义
1. 对深入理解微生物群落组成与龋病发生的关系有重要意义。
2. 为预防和治疗龋病提供科学依据。
3. 为合理制定龋病防治策略提供理论支持。
儿童口腔变形链球菌遗传多态性与乳牙龋关系的初步研究的开题报告
儿童口腔变形链球菌遗传多态性与乳牙龋关系的初步研究
的开题报告
一、研究背景
乳牙龋是一种常见的儿童口腔疾病，其发生与口腔中存在的细菌种类和数量有关。
而变形链球菌是一种常见的口腔细菌，是引起乳牙龋的主要致病菌之一。
虽然变形链
球菌在所有人的口腔中都能被检测到，但不同人中的变形链球菌种类和数量差异较大。
因此，探究变形链球菌的遗传多态性与乳牙龋之间的关系，具有重要的临床意义。
二、研究目的
本研究旨在探究儿童口腔中变形链球菌的遗传多态性与乳牙龋关系，并探究不同变形链球菌基因型与不同龋病度的相关性。
三、研究方法
本研究将选取100名6岁至10岁的儿童，分为乳牙龋组和对照组。
采集两组儿
童的口腔样本，进行变形链球菌的分离和鉴定，利用多重PCR法检测变形链球菌的合
成蛋白质基因型，同时进行龋病指数的评估和记录。
最后，利用SPSS统计软件进行数据分析。
四、预期结果
本研究预计得出不同变形链球菌基因型与不同龋病度的相关性，为预防和治疗儿童口腔疾病提供科学依据。
五、研究意义
本研究的结果将为进一步探究变形链球菌与乳牙龋的关系提供科学基础，为制定个性化的口腔保健方案提供参考。
同时，本研究的结果也将为临床医生提供更为准确
的口腔疾病诊断和治疗方案。
不同龋敏感儿童口腔变异链球菌临床分离株与HtrA关系的实验研究的开题报告
不同龋敏感儿童口腔变异链球菌临床分离株与HtrA关系的实验研究的开题报告一、研究背景和意义口腔变异链球菌（Streptococcus mutans）是一种常见的龋齿病原菌，它对人类口腔健康产生了不良影响。
龋敏感儿童口腔中Streptococcus mutans数量高，是导致儿童龋齿高发的关键菌种之一。
HtrA是一种广泛存在于细菌中的热休克蛋白，在重金属和氧化氮等外界压力条件下，能够保护菌体内的蛋白质结构稳定。
因此，本研究旨在探讨龋敏感儿童口腔变异链球菌临床分离株与HtrA的关系，为龋敏感儿童口腔防治提供理论参考。
二、研究内容及方法1.研究内容本研究将在50名龋敏感儿童中，分离变异链球菌，通过16S rRNA序列比对等方法鉴定系属，并针对不同儿童口腔中分离出的变异链球菌，测定HtrA基因和蛋白质表达水平，以分析变异链球菌的HtrA在不同儿童口腔中的相关性。
2.研究方法（1）龋敏感儿童口腔菌落的分离和鉴定从50名龋敏感儿童口腔采集菌样，经过细菌学分离和纯化后，通过16S rRNA序列比对等方法对其进行系统学鉴定。
（2）变异链球菌HtrA基因测定根据已知基因序列设计PCR引物，对不同龋敏感儿童口腔中分离出的变异链球菌进行HtrA基因扩增。
（3）变异链球菌HtrA蛋白质表达水平检测将不同龋敏感儿童口腔中分离出的变异链球菌进行筛选，提取细菌总蛋白，通过Western blot分析HtrA表达水平。
三、预期成果通过本研究，预计可以：（1）明确龋敏感儿童口腔变异链球菌HtrA基因的特征及变异规律。
（2）揭示不同儿童口腔中分离出的变异链球菌HtrA蛋白质表达水平的差异。
（3）为深入研究儿童龋齿病发病机制提供基础数据，为龋齿防治提供理论依据。
四、研究难点（1）菌种分离、纯化和鉴定的细节步骤。
（2）HtrA基因测定和蛋白质表达水平检测过程中的误差和抗干扰能力。
（3）体外实验结果与临床观察结果的差异处理与解释。
五、可行性分析（1）本研究选取龋敏感儿童作为研究对象，易获取样本并能够体现龋齿病发病机制的特点。
老年人龋坏组织中变形链球菌和乳酸杆菌的致龋特点
老年人龋坏组织中变形链球菌和乳酸杆菌的致龋特点作者：周建业张金婷肖云车团结何祥一【摘要】目的探讨老年人龋坏组织中变形链球菌（MS）和乳酸杆菌（LB）在致龋过程中的特点。
方法 136例龋坏组织样本按患者年龄、患牙龋坏程度和龋坏活跃性分组，利用选择性培养基对MS及LB 行分离、培养和鉴定。
统计两种细菌在不同组别中细菌菌落形成单位（CFU）计数及两种细菌致龋样本例数。
结果在老年龋组、严重龋组（中、深龋）和活动期龋组中，MS与LB的CFU计数均显著升高(均P ＜0.05)；MS与LB共同致龋样本数在老年龋组中显著升高(P＜0.05)，并随龋坏程度的加重而升高(P＜0.05)。
结论在老年龋病及中、深龋中，MS与LB为互生关系，有明显共同致龋作用。
【关键词】变形链球菌；乳酸杆菌；老年人；龋坏组织变形链球菌（MS）和乳酸杆菌（LB）与龋病的形成和发展密切相关。
MS是口腔主要致龋菌，对其在细菌毒力、致龋机制方面已有研究〔1〕，而有关LB的致龋作用颇有争议，有学者认为LB是龋坏的结果而不是龋坏的原因〔2〕；另有研究认为在致龋初期LB并不致龋，而在龋坏进入深层时，LB由于其较强的耐酸性而大量繁殖并产酸，协同MS 致龋〔3〕；有人指出LB有可能因抑制龋病病原菌的繁殖而抑制龋病的发展〔4～5〕。
本研究通过分离、培养及鉴定136例龋坏组织样本中的MS和LB，探讨MS与LB的致龋特点及老年龋病患者龋坏组织中的菌与龋病严重程度的关系。
1 材料与方法1.1 细菌培养基与鉴定方法细菌培养基采用改良轻唾琼脂培养基(MS)〔6〕与Rogasa培养基(LB)〔7〕，分别采用Dentocult SM 法和Dentocult LB法鉴别MS和LB致龋活跃性。
1.2 方法1.2.1 采样及样本分组龋坏组织样本，由同一操作者于2006年11月～2007年3月在本院、甘肃省第二人民医院及兰州军区总医院口腔科的90位患者（136颗患牙）采集，每患牙采集1例样本，共取样本136例。
不同龋敏感儿童牙菌斑相关致龋微生物的动态监测及群落分析中期报告
不同龋敏感儿童牙菌斑相关致龋微生物的动态监测及群落分析中期报告本研究以龋敏感儿童为对象，通过对其牙菌斑微生物的动态监测和群落分析，旨在探讨牙菌斑微生物与龋齿发生的关系。
样本收集：本研究在不同时间点收集了40名龋敏感儿童的口腔拭子样本。
样本收集时间分别为开始治疗前（T0）、开始治疗后第一个月（T1）、开始治疗后第二个月（T2）、开始治疗后第三个月（T3）。
DNA提取和PCR扩增：采用常规的菌落PCR方法，对DNA提取和PCR扩增进行处理。
扩增之后，通过琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物的大小和浓度。
DNA测序和群落分析：采用Illumina HiSeq平台进行高通量测序，并对测序数据进行初步处理和质控，得到清洁的测序数据。
通过基于序列相似性的分类方法将测序数据归属到不同的菌属和菌种。
通过计算不同患者的样本中不同菌属和菌种的相对丰度，并使用非参数Wilcoxon秩和检验和方差分析方法来检查这些相对丰度的变化是否具有统计学意义。
使用PCoA和NMDS方法来分析样本中不同微生物群落结构的差异。
初步结果：目前，我们已经测序了来自40名龋敏感儿童的口腔拭子样本。
经过初步的数据处理和质控，得到了清洁的测序数据。
基于这些测序数据，我们已经可以获得不同患者的样本中不同菌属和菌种的相对丰度。
在样本中，普通链球菌、放线菌、厌氧梭菌是占绝大部分的细菌。
在治疗前期，细菌丰度显示不同，然后在治疗后期有所减少。
在PCR扩增和DNA测序过程中可能会存在一些误差，需要继续对数据进行验证和完善。
结论：通过对龋敏感儿童口腔拭子样本的微生物群落分析，可了解牙菌斑中微生物相关致龋的变化趋势，并为口腔预防疾病提供有用的信息。
需要继续开展研究以完善数据。
不同基因型变异链球菌临床分离株的分离和鉴定
不同基因型变异链球菌临床分离株的分离和鉴定鉴定是进行龋病研究的基础。
细菌菌种的鉴定方式经历了由传统的表型、血清型方法到以分子生物学为基础的基因型方法的转变。
本文采用形态学、生物化学、自动微生物分析系统、扩增变异链球菌基因的特异性片段区域以及基因分型等方法对获得的变异链球菌临床分离株进行鉴定，为龋病临床和基础研究提供材料。
1 材料和方法1.1 实验菌株变异链球菌国际参考株Ingbritt（首都医科大学附属北京口腔医院口腔医学研究所提供），金黄色葡萄球菌临床分离株188号（军事医学科学院基础医学研究所生物化学与分子生物学研究室提供）。
1.2 病例选择纳入标准：高龋患者，龋失补牙（decayed-mis-sing-filled-tooth，DMFT）指数≥6；无龋健康人，DMFT指数=0。
排除标准：饮食结构异常，有嗜甜食（饮）及睡前进餐等不良饮食习惯者；接受放疗和化疗的患者；舍格伦综合征患者；严重全身系统性疾病者；近3个月内服用抗生素者；接受正畸治疗者；口腔状况不良者；牙齿结构异常者；涉及取样的牙体有牙髓病变、根面暴露或根面龋、未控制的牙周病变、冠或固定桥等修复体者。
根据纳入及排除标准，从临床初次就诊的患者中选取受试者，受试者的取样位点均为无龋损的釉质光滑面。
采集菌斑前，均向受试者及其陪同人员说明实验目的和过程，取得同意并签署知情同意书。
40例受试者参加实验，其中高龋患者26例（DMFT指数为7.40±2.07），无龋健康人14例。
1.3 菌斑采集与处理受试者清水漱口，去除食物残渣，棉卷隔湿并用无菌生理盐水冲洗收集区，更换棉卷，隔湿，用无菌刮匙刮取釉质光滑面菌斑后，立即将其置于预先消毒灭菌，盛有1 mL改良液体Cary-Blair运送培养基，上覆液体石蜡的Eppendorf管中密封。
标本在2 h内转送至实验室。
所取的菌斑样本经振荡器混匀1 min后，用无菌生理盐水做10倍系列稀释。
1.4 变异链球菌的分离1.4.1 细菌初代培养取原液、10-1、10-2、10-3稀释液各100 μL，接种于胰蛋白酶水解物-酵母提取物-半胱氨酸-蔗糖-杆菌肽琼脂（tryptone-yeast extract-cysteine with sucrose and bacitracin agar，TYCSB）培养平板内，置于厌氧环境（体积分数80%N2、10%H2、10%CO2）下37 ℃培养48 h，然后进行菌落形态的观察。
不同基因型变形链球菌临床分离株体外成膜能力研究_胡丹阳
基金项目：国家自然科学基金（81271191）第一作者：胡丹阳（1977-），女，辽宁本溪人，主治医师，硕士通信作者：王成龙，E-mail：wangchenglong9@ ·论著·不同基因型变形链球菌临床分离株体外成膜能力研究胡丹阳1，李新颖1，崔伟2，王成龙21.沈阳军区大连疗养院小平岛疗养区综合科，辽宁大连116023；2.解放军总医院口腔科，北京100853［摘要］目的探讨不同基因型变形链球菌菌株的致龋特性及其体外成膜规律。
方法采用微孔板培养法，对10株不同基因型菌株进行7个不同时间点成膜量的测定。
结果（1）课题小组前期分离获得的5株变链菌临床分离株，除2号菌株外，其余4株的成膜能力检测结果与前期进行的高、低致龋性的鉴定结果一致；（2）携带9号基因型菌株并不是2名儿童高发龋病的直接原因；（3）变形链球菌的体外成膜量在培养16 36h逐渐增加，36h达最大值，之后成膜量下降。
结论本研究验证了不同基因型变链菌临床分离株的致龋特性，为下一步研究提供了不同致龋特性的可靠菌株；分析携带有相同基因型菌株的2名儿童高发龋病的原因；分析变链菌体外成膜规律，为变链菌致龋特性的研究提供新的依据。
［关键词］变形链球菌；微孔板培养法；基因型；生物膜；龋病中图分类号：Ｒ781文献标志码：A doi：10．16680/j．1671-3826．2016．04．19文章编号：1671-3826（2016）04-0385-04A study of different genotypes of streptococcus mutans clinical isolates film-forming ability in vitroHU Dan-yang，LI Xin-ying，CUI Wei，WANG Cheng-long（Department of Polyclinic，Dalian Sanatorium of Shenyang Military Com-mand，Xiaoping Island Convalescence Area，Dalian116023，China）Abstract：Objective To explore the cariogenic ability and the rule of biofilm forming of streptococcus mutans strains of different gen-otypes．Methods The microporous plate culture method was adopted to detect the amount of biofilm forming for10streptococcus mu-tans strains of different genotypes in seven different periods．Ｒesults（1）In addition to strain2，the abilities of biofilm forming of the other4strains were in accordance with the highly or poorly cariogenic abilities．（2）Gene9which was carried by both of two children was not the direct reason for their high incidence of caries．（3）The vitro biofilm forming of streptococcus mutans gradually increased from16hours to36hours，reached the maximum at the36hours，then decreased afterwards．Conclusion Through biofilm formation assay，the cariogenic ability of9streptococcus mutans is identified clinical isolated strains，which offers reliable strains of different cari-ogenic abilities for further studies．The possible reason for the susceptibility of dental caries in two children who carries the same geno-type is analyzed the rule of biofilm forming of streptococcus mutans，which provides the foundation for further studies on the cariogenic ability of streptococcus mutans．Key words：Streptococcus mutans；The microporous plate culture method；Genotypes；Biofilm；Caries龋病是一种细菌感染性疾病，变形链球菌（以下简称变链菌）是目前公认的主要致龋菌。
不同龋敏感儿童口腔变异链球菌不同基因型临床分离株产酸力的实验研究
不同龋敏感儿童口腔变异链球菌不同基因型临床分离株产酸力的实验研究刘兴容;李静【期刊名称】《华西口腔医学杂志》【年(卷),期】2010(028)004【摘要】目的比较不同龋敏感儿童口腔变异链球菌不同基因型临床分离株对蔗糖进行酵解产生有机酸的能力.方法从不同龋敏感的3～5岁学龄前儿童口腔变异链球菌中选取66株变异链球菌临床分离株,用气相色谱法测定高龋、中龋和无龋儿童口腔变异链球菌不同基因型临床分离株产生各有机酸的量.结果不同龋敏感儿童不同基因型变异链球菌临床分离株产生有机酸的量的差异有统计学意义(P＜0.05),同一龋敏感儿童变异链球菌携带不同基因型菌株产酸量的差异也有统计学意义(P＜0.05),携带基因型数目越多的菌株其产酸量越多.变异链球菌临床分离株产生乳酸、乙酸、甲酸的量的差异有统计学意义(P＜0.05),乳酸多于乙酸和甲酸.结论不同龋敏感儿童口腔变异链球菌不同基因型菌株产酸力不司,携带基因型数目越多的菌株其产酸力越强.【总页数】4页(P404-407)【作者】刘兴容;李静【作者单位】泸州医学院附属口腔医院口腔内科,四川,泸州,646000;西安交通大学口腔医院,第一门诊部,陕西,西安,710048【正文语种】中文【中图分类】R781.1【相关文献】1.不同龋敏感儿童口腔变异链球菌临床分离株与 HtrA 关系的研究 [J], 杨江华;郭夕源;王光平;李明霞;刘兴容2.不同龋敏感儿童变形链球菌临床分离株产酸、耐酸能力的实验研究 [J], 曹元书;刘兴容3.不同龋敏感儿童口腔不同基因型变异链球菌临床分离株在不同pH条件下产生GTF能力的比较研究 [J], 施俊;王志刚;刘兴容4.不同龋敏感儿童变异链球菌临床分离株耐酸能力的实验研究 [J], 曹元书;刘兴容5.蜂胶对不同龋敏感者变形链球菌临床分离株产酸影响的体外实验研究 [J], 曾学宁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
不同龋敏感儿童变异链球菌临床分离株合成胞外多糖能力的实验研究
不同龋敏感儿童变异链球菌临床分离株合成胞外多糖能力的实验研究杨江华;曹元书;刘兴容【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2010(21)24【摘要】目的比较不同龋敏感儿童El腔中变异链球菌的临床分离株合成胞外多糖能力的差异.方法以高龋、中龋和无龋儿童口腔中分离得到的变异链球菌为实验菌株,常规复苏、增菌,配制相同浓度的菌悬液,按菌液与含1%蔗糖的BHI液体培养基1:10(v/v)比例接种细菌,37℃厌氧培养24h后,分别收集水溶性葡聚糖和水不溶性葡聚糖,用蒽酮法进行定量分析.结果儿童高、中龋患者口腔中分离出的变异链球菌临床分离株以及国际标准菌株合成胞外多糖能力明显高于无龋者口腔中分离出的变异链球菌,差异具有统计学意义(P<0.05).结论高龋儿童口腔中变异链球菌临床分离株具有高致龋性.【总页数】3页(P4-6)【作者】杨江华;曹元书;刘兴容【作者单位】泸州医学院附属口腔医院,四川,泸州,646000;泸州医学院附属口腔医院,四川,泸州,646000;泸州医学院附属口腔医院,四川,泸州,646000【正文语种】中文【中图分类】R788+.1【相关文献】1.不同龋敏感儿童口腔变异链球菌不同基因型临床分离株产酸力的实验研究 [J], 刘兴容;李静2.高龋及无龋者变形链球菌临床分离株致龋性研究rnⅡ 合成细胞外多糖能力的实验研究 [J], 黄晓晶;刘天佳;杨锦波;陈舟;刘建国3.不同龋敏感儿童变异链球菌临床分离株耐酸能力的实验研究 [J], 曹元书;刘兴容4.老年人高龋患者牙菌斑中变形链球菌临床分离株合成胞外多糖能力的研究 [J], 方会清;吴补领;苏凌云;林媛;赵红萍;屈铁军5.维吾尔族不同龋敏感儿童变链菌临床分离株生物膜状态合成胞外多糖能力的比较[J], 连冰洁;赵今;刘震华;努尔比亚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
老年人高龋患者牙菌斑变形链球菌临床分离株产酸能力的研究
老年人高龋患者牙菌斑变形链球菌临床分离株产酸能力的研究方会清;吴补领;苏凌云;林媛;赵红萍【期刊名称】《牙体牙髓牙周病学杂志》【年(卷),期】2006(16)1【摘要】目的:探讨老年人不同龋敏感者口腔中变形链球菌(血清C型)的临床分离株产酸能力的差异.方法:收集老年人高龋患者、无龋者牙菌斑变形链球菌临床分离株(血清C型),比较细菌产酸能力,并与国际参考菌株比较.结果:老年人高龋患者口腔中分离出的变形链球菌临床分离株产酸能力明显高于无龋者口腔中分离出的变形链球菌临床分离株,与国际参考菌株却无明显地统计学差异.同时我们研究也发现,在老年人高龋患者同一个体的口腔中变形链球菌的临床分离株产酸能力存在明显差异.结论:老年人高龋者口腔中变形链球菌(血清C型)临床分离株的高致龋性与其携带有产酸能力强的菌株有关.【总页数】3页(P21-23)【作者】方会清;吴补领;苏凌云;林媛;赵红萍【作者单位】第四军医大学口腔医学院,陕西,西安,710032;第四军医大学口腔医学院,陕西,西安,710032;第四军医大学口腔医学院,陕西,西安,710032;第四军医大学口腔医学院,陕西,西安,710032;第四军医大学口腔医学院,陕西,西安,710032【正文语种】中文【中图分类】R780.2【相关文献】1.高龋及无龋者变形链球菌临床分离株致龋性研究rnⅡ 合成细胞外多糖能力的实验研究 [J], 黄晓晶;刘天佳;杨锦波;陈舟;刘建国2.不同龋敏感儿童变形链球菌临床分离株产酸、耐酸能力的实验研究 [J], 曹元书;刘兴容3.老年人高龋患者牙菌斑中变形链球菌临床分离株耐酸能力的研究 [J], 方会清;吴补领;沈卫;邓爱停4.老年人高龋患者牙菌斑中变形链球菌临床分离株合成胞外多糖能力的研究 [J], 方会清;吴补领;苏凌云;林媛;赵红萍;屈铁军5.不同龋敏感者变形链球菌临床分离株产酸能力的研究 [J], 黄晓晶;刘天佳;蔡志宇;陈舟;杨锦波;刘建国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高龋及无龋者变形链球菌临床分离株致龋性研究rnⅡ 合成细胞外多糖能力的实验研究
高龋及无龋者变形链球菌临床分离株致龋性研究rnⅡ 合成细胞外多糖能力的实验研究黄晓晶;刘天佳;杨锦波;陈舟;刘建国【期刊名称】《华西口腔医学杂志》【年(卷),期】2000(18)6【摘要】目的:探讨来自不同龋敏感者的变形链球菌(血清型c)临床分离株合成细胞外多糖的能力。
方法:采用红外光谱分析对葡聚糖样本作定性分析,用蒽酮法分别定量测定水溶性和水不溶性葡聚糖含量。
结果:同一个体所带不同基因型变形链球菌菌株合成细胞外多糖能力具有差异;高龋组个体定植的合成水溶性及水不溶性葡聚糖能力强的菌株所占比例显著高于无龋组。
结论:高龋组变形链球菌(血清型c)临床菌株的高致龋力与其携带有合成细胞外多糖能力强的菌株密切相关。
【总页数】3页(P419-421)【作者】黄晓晶;刘天佳;杨锦波;陈舟;刘建国【作者单位】华西医科大学口腔医学院 610041;华西医科大学口腔医学院 610041;华西医科大学口腔医学院 610041;华西医科大学口腔医学院 610041;华西医科大学口腔医学院 610041;在遵义医学院【正文语种】中文【中图分类】R78【相关文献】1.高龋及无龋者变形链球菌临床分离株致龋性研究rnⅠ 对唾液包被羟磷灰石的粘附实验 [J], 黄晓晶;杨锦波;刘天佳;陈舟;詹玲2.老年人高龋患者牙菌斑中变形链球菌临床分离株耐酸能力的研究 [J], 方会清;吴补领;沈卫;邓爱停3.老年人高龋患者牙菌斑中变形链球菌临床分离株合成胞外多糖能力的研究 [J], 方会清;吴补领;苏凌云;林媛;赵红萍;屈铁军4.不同龋敏感儿童变异链球菌临床分离株合成胞外多糖能力的实验研究 [J], 杨江华;曹元书;刘兴容5.高龋及无龋儿童变形链球菌分离株的蔗糖粘附能力比较 [J], 马善奋;马瑞;姜云涛;梁景平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
随意引物PCR法鉴别口腔变形链球菌的初步研究
随意引物PCR法鉴别口腔变形链球菌的初步研究
王红杨;潘亚萍;孙开来
【期刊名称】《口腔医学》
【年(卷),期】2001(021)001
【摘要】目的:探讨口腔变形链球菌族细菌中各个种和血清型的关系.方法:采用随意引物PCR法对变形链球菌(血清型c,d,f)及与其同源性相近的血链球菌标准菌株进行PCR扩增,建立口腔变形链球菌基因图谱.结果:变形链球菌与血链球菌基因图谱差异较大;变形链球菌各个种基因图谱有差异;属于同一个种的变形链球菌不同血清型的菌株基因图谱虽相似但有差异.结论:运用随意引物PCR法可鉴别不同种或同一种中血清型不同的变形链球菌.提示:随意引物PCR法是一种鉴别口腔变形链球菌比较简便、准确的方法.
【总页数】2页(P16-17)
【作者】王红杨;潘亚萍;孙开来
【作者单位】沈阳市口腔医院口腔内科,110002;中国医科大学口腔医学院口腔内科,110002;中国医科大学分子遗传学教研室,110002
【正文语种】中文
【中图分类】R78
【相关文献】
1.全托儿童口腔变形链球菌水平传播的初步研究 [J], 邹静;尚冉;凌均棨;周学东
2.不同龋敏感儿童口腔变形链球菌基因型的初步研究 [J], 李伟;刘兴容;曹元书;李
艳萍
3.随意引物PCR用于口腔链球菌基因分型的初步研究 [J], 潘亚萍;王红杨
4.三种不同DNA提取法对血链球菌随意引物PCR鉴定影响的研究 [J], 张卫东;陈晖;余钟声
5.随机引物PCR法在变形链球菌基因分型中的初步应用 [J], 刘加荣;边专;樊明文;聂敏
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儿童口腔变形链球菌和乳杆菌检测及其与龋病发生风险的关系的开题报告
儿童口腔变形链球菌和乳杆菌检测及其与龋病发生
风险的关系的开题报告
一、研究背景
龋病是全球最常见的慢性疾病之一，影响着全世界许多儿童的口腔
健康。
在龋病的病因中，口腔微生物的作用至关重要，尤其是口腔中的
变形链球菌和乳杆菌。
变形链球菌和乳杆菌是导致龋病的最主要的两种
微生物。
因此，在儿童口腔疾病预防和治疗方面，对变形链球菌和乳杆
菌的检测以及它们与龋病发生风险的关系进行深入研究是非常有意义的。
二、研究目的
本研究旨在探讨儿童口腔中变形链球菌和乳杆菌的检测情况，并研
究它们与龋病发生风险之间的关系。
根据检测结果并结合临床资料，提
出针对龋病的预防和治疗方案，为儿童口腔健康事业的发展做出贡献。
三、研究方法
本研究拟选择一所市区小学的200名学生（男女各半，年龄8~10岁），以龋病表面硬度为参考标准将其分为龋坏组和对照组。
收集其口
腔标本，用PCR法对标本进行变形链球菌和乳杆菌的检测，比较龋坏组
和对照组两组检测结果之间的差异，通过统计学方法进行分析。
同时，
收集个人信息、饮食习惯、口腔卫生情况等资料，并运用SPSS软件进行多因素回归分析，探讨影响儿童龋病的因素。
四、研究意义
本研究可以对龋病预防和治疗做出一定的贡献。
一方面，通过针对
变形链球菌和乳杆菌的检测，可以更加准确地掌握儿童口腔微生物的情况，为临床治疗提供更精确的依据。
另一方面，通过多因素回归分析探
计影响龋病发生的因素，则能够为龋病的预防提供更有针对性的建议和
预防措施。
总之，本研究对提高儿童口腔卫生健康水平，具有重要的理论和实践意义。
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验，不同分 级 酶 活 性 在 不 同 龋 敏 感 菌 株 的 分 布 采 用
2
#
检验。
2 结果
2.l 蛋白定量标准 表 l 以不同浓度牛血清白蛋白作为标准，通过考
马斯亮蓝 G250 染色比色得出的定量值（A595 ），根据定 量结果，以不同牛血清白蛋白浓度为纵坐标（ y）、A595 为横坐标（ x ）作出蛋白定量标准曲线及回 归 方 程： y = l. 45l x - 0. 268，回归系数经 ANOVAb 显著性检验 证实此回归方程有意义，相关系数 r = 0.995。
0 . 35
0 . 453 1 0 . 0l0
0 . 40
0 . 467 1 0 . 040
0 . 45
0 . 494 1 0 . 020
0 . 50
0 . 5l6 1 0 . 0l0
2 . 2 S . mutans 临床分离株 LDH 活性相对定量 表 2、3 分别为高龋和无龋 S . mutans 不同基因型
糖）于 相 同 条 件 培 养 24 h 增 菌。菌 液 5 000 r/min、
4 C离心 l0 min，收集沉淀，0.l moI/L 磷酸钾缓冲液
洗涤菌细胞 2 次，以 2 mI 缓冲液混匀悬浮。冰浴下
瞬时 多 次 超 声 破 碎 菌 细 胞，l4 000 r/min、4 C 离 心
30 min，收集上清 4 C保存。
1.1 菌株和培养基 本课题组前期研究所获的 S . mutan（s 血清型 c）
不同 AP-PCR 基因型的临床分离株高龋和低龋各 50 株。Brain Heart Infusion 培养基（Difco 公司，美国）。 1.2 试剂
0 . 5 g/L 牛 血 清 白 蛋 白（ Sigma 公 司，美 国 ），
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华西口腔医学杂志 2005 年 4 月 第 23 卷 第 2 期 West China JournaI of StomatoIogy VoI . 23 No. 2 ApriI，2005
［文章编号］1000-118（2 2005）02-0116-03
不同龋敏感人群变形链球菌分离株 乳酸脱氢酶活性的初步研究
华西口腔医学杂志 2005 年 4 月 第 23 卷 第 2 期 West China JournaI of StomatoIogy VoI . 23 No. 2 ApriI，2005
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l mmoI/L还原性辅酶!烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原 酶（nicotinamide adenine dinucIeotide，NADH）溶液（Boe-
表 1 牛血清白蛋白定量测定值 Tab 1 (uantitative determination of bovine serum albumin
牛血清白蛋白（g/L）
A59（5 !x 1 s）
0 . 20
0 . 3l6 1 0 . 002
0 . 25
0 . 355 1 0 . 0l0
0 . 30
0 . 395 1 0 . 020
过统计分析计算标准曲线回归方程。测量菌细胞裂
解上清液的 A595 ，以回归方程求得蛋白浓度。 l . 6 LDH 活性分析
采用依赖 FDP 的还原性辅酶!（NADH）氧化法。
l mI 反 应 体 系 中：磷 酸 钾（ pH 6.2）l00 "moI，NADH 0.2 "moI，丙 酮 酸 钠 l0 "moI，菌 细 胞 裂 解 上 清 蛋 白 l8 "g。振荡混匀，l min 后加入 FDP 20 "moI 激活反 应，对照 管 不 加 FDP。混 匀 后 37 C 水 浴 l h，测 定
杨德琴1 ，刘天佳1 ，周学东1 ，何奎芳2 ，李 颂3 ，庄 姮4
（1. 口腔生物医学工程教育部重点实验室，四川大学，四川 成都 610041； 2. 温州医学院 口腔内科教研室，浙江 温州 325000；3. 安徽医科大学口腔医院 牙体牙髓科，安徽 合肥 230000；
4. 第四军医大学口腔医院 牙体牙髓科，陕西 西安 710032）
hringer 公司，德国 ），l00 mmoI/L I，6 - 二磷酸果糖（D-
fructose-l，6-diphosphate，FDP）溶液（中国上海伯奥）。
l.3 仪器和设备
Sinoprep l50 超 声 细 胞 破 碎 仪（SANYO 公 司，日
本），UV-265 型紫外分光光度计（日本岛津），R200D
［关键词］ 变形链球菌； 乳酸脱氢酶； 蛋白定量； 酶活性 ［中图分类号］ R 781 . 1 ［文献标识码］ A
Study on Lactate Dehydrogenase Activity of Streptococcus mutans Isolates Derived from Caries-active and Caries-free Individuals YANC De- gin1 ，LIU Tian- jia1 ，ZHOU Xue- dong1 ，HE Kui- fang2 ，LI Song3 ，ZHUANC Heng4 .（1 . Key Lab . of Oral Biomedical Engineering of Ministry of Education，Sichuan Uniuersity，Chengdu 610041，China；2 . Dept . of Oral Medicine， Wenzhou Medical College，Wenzhou 325000，China；3 . Dept . of Operatiue Dentistry and Endodontics，Stomatology College of Anhui Uniuersity of Medical Sciences，Hefei 230000，China；4 . Dept . of Operatiue Dentistry and Endodontics，The Fourth Military Medical Uniuersity，Xi' an 710032，China） ［Abstract］ Objective To preIiminariIy investigate the reIationship between the Lactate dehydrogenase（LDH）activity of Streptococcus mutan（s S . mutans）and dentaI caries initiation. Methods 100 S . mutans strains derived from caries-active and cariesfree individuaIs were cuItured in BHI medium suppIemented with gIucose. CeIIs were extracted and ruptured，and the extracted Iiguid protein was guantified with Coomassie briIIiant bIue G250 staining methods. LDH activity was assayed using the pyruvate-dependent oxidation of NADH-with and without FDP. Results LDH activity of the two groups strains had no difference（ P > 0.05），but the distribution of differ cIass enzyme activity strains in the two groups was different（ P < 0.05）. Conclusion LDH activity of S . mutans is correIated to the initiation of dentaI caries to some extent. The measurement methods in this study can be appIied in preIiminary guantitation of LDH activity and the screening of S . mutans strains. ［Key words］ Streptococcus mutans； Iactate dehydrogenase； protein guantitation； enzyme activity
变形链球菌（ Streptococcus mutans，S . mutans ）是 人类口腔中最主要的致龋菌，利用碳水化合物发酵产 乳酸是其致龋的重要特征［1，2］，是龋病发生的直接原 因。乳酸脱氢酶（Iactate dehydrogenase，LDH）是合成乳 酸的关键酶，其生物学作用是致龋的关键环节。研究 证实，缺乏 LDH 活性的 S . mutans 在限菌啮齿类动物 模型实验中体内致龋性显著降低［2 ~ 4］，不同龋敏感人
l.5 菌细胞裂解上清液蛋白质含量测定
采用考马斯亮蓝 G250 染色比色分析法。在标号
试管中各加入 0.5 g/L 牛血清白蛋白 40、50、60、70、
80、90、l00 "I，分别加不同体积生理盐水补足 l00 "I， 每管各加入 l mI 考马斯亮蓝 G250 染色液，室温振荡
混匀 2 min，每管作 3 个平行管。以生理盐水 l00 "I 加 l mI 染料作空白调零，在 595 nm 测吸光度 A595 ，通
340 nm波长下吸光度 A340 ，FDP 依赖反应管和 FDP 非 依赖对照管均作 3 个平行管求均值，对照管 A340 和反 应管 A340 的差值即为酶活性相对定量。 l.7 统计分析
SPSSll . 0 统计软件作回归分析，回归方程 ANOVAb 检验，不同龋敏感菌株分组酶活性均值作 t 检