LC_MS_MS快速测定人血浆中格列齐特
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cokinetics , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang 110016, China) ABSTRACT: OBJECTIVE To develop a LC MS/ MS method for the quantification of gliclazide in human plasma and to evaluate the phar macokinetics of gliclazide in healthy volunteers METHODS After a simple liquid liquid extraction, gliclazide and the internal standard glibenclamide were separated on a Zorbax SB C8 column and detected by tandem mass spectrometry The mobile phase consisted of acetonitrile water formic acid ( 90 10 0 5) An atmospher ic pressure chemical ionization interface was applied and operated in the positive ion mode Se lected reaction monitoring ( SR M ) mode was used with the trasitions of m/ z 324~ m/ z 127 for gliclazide and m/ z 494~ m/ z 369 for the in ternal standard, respectively RESULTS The linear calibration curve was obtained in the concentration range of 1 0~ 4 000 g L- 1 T he limit of quantification was 1 0 g Lin ! 5 1%
method was successfully applied in a pharmacokinetic study of glicalzide CONCLUSION The method is proved to be suitable for the clinical investigation of gliclazide pharmacokinetics, which offers the advantages of specificity , speed and greater sensitivity compared with the reported methods KEY WORDS: gliclazide; liquid chromatography tandem mass spectrometry; pharmacokinetics
格列齐特 ( gliclazide) 为第二代磺酰脲类口服降 糖药 , 临床用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病, 其作用 机制是通过促进胰岛素的分泌 , 改善糖尿病病人对 胰岛素 的敏感性而发 挥降糖作用 道, 采用 GC
[ 2] [ 1]
齐特 , 获得较高的灵敏度( 10 g L- 1 ) 。本试验拟建 立 LC MS/ MS, 测定人血浆中格列齐特的浓度 , 并应 用于缓释制剂的人体药动学研究。 1 材料与方法 1 1 仪器 TSQ 型液相色谱 质谱 / 质谱联用仪 , 配有大气 压化学电离源( APCI) 以及 Xcalibur 1 1 数据处理系 统( 美国 Thermo Finnigan 公司 ) ; LC- 10AD 高效液相 色谱输液泵 ( 日本岛津公司 ) 。 1 2 药品与试剂 格列齐特和内标格列本脲对照品 ( 中国药品生
LC MS/ MS 快速测定人血浆中格列齐特
宿静 , 陈笑艳, 段小涛 , 张逸凡 , 钟大放*
摘要 : 目的
( 沈阳药科大学药物代谢与药动学实验室 , 沈阳 110016)
建立测定人血浆中格列齐特的液相色谱 质谱/ 质谱联用法 , 并应用于人体药代动力学研究 。 方法
0 25 mL 血 浆
样品经液 液萃取后 , 以乙腈 水 甲酸 ( 90 10 0 5) 为流动相 , 采用 Zorbax SB C8柱分离 , 通过大气压化学电离四极杆串联质谱 , 以 选择离子反应监测 ( SRM) 方式进行检测 。 用于定量分析的离 子反应分 别为 m/ z 324~ m/ z 127( 格 列齐特 ) 和 m/ z 494 ( m/ z 369( 内标格列本脲 ) 。 结果 格列齐特血浆质量浓度线性范围 为 1 0~ 4 000 g L- 1 , 定量下限 为 1 0 g L- 1。 日内 和日间 精 密度( RSD) 均小于 4% , 准 确度( RE) 在 ! 5 1% 内 。 每个样品色 谱分析仅为 2 8 min, 应用此法 每天可以 测试 150 个样品 。 结 论 该法操作简便 、 快速 、 灵敏 , 适用于格列齐特的临床药 动学研究及制剂的生物等效性评价 。 关键词 : 格列齐特 ; 液相色谱 串联质谱法 ; 药动学 中图分类号 : R917; R969 文献标识 码 : A 文章编号 : 1001- 2494( 2006) 11- 0864- 04
- 1 - 1
试验前签署知情同意书并在医院接受全面的身体检 查 , 心电图、 血压及肝肾功能等各项指标均属正常。 单剂量试验受试者于试验前 1 d 晚餐后禁食, 试验 日清晨空腹口服 30 mg 格列齐特缓释片。于服药前 ( 0 h) 和 服 药 后 1 0, 2 0, 3 0, 4 0, 6 0, 8 0, 10 0, 12 0, 15 0, 24 0, 36 0, 48 0 和 72 0 h 取血 3 mL, 分 离血浆 , - 20 # 保存待测。多剂量试验连续服药 6 d, 于第 3, 4, 5 天早服药前取血测谷浓度 3 次, 在第 6 天按单剂量设计的时间点取血。临床试验经伦理委 员会批准在辽宁省人民医院进行。 2 结 果 2 1 质谱分析 试验中曾考察了格列齐特及内标格列本脲在不 同离子源 ( ESI 和 APCI) 、 不同检测方式 ( 正、 负离子 扫描 ) 的质谱响应, 结果发现待测物在 ( + ) APCI 源 的质谱响应及重现性优于其他检 测方式。在 ( + ) APCI 源的一级全扫描质谱图中, 获得的基峰离子为 准分子离 子 [ M+ H] + 峰, 分别 为 m / z 324 和 m/ z 494。选择性对[ M+ H] 进行产物离子扫描, 格列齐 特及内标格列本脲生成的主要碎片离子分别为 m/ z 127 和 m/ z 369, 均由酰胺键断裂生成, 见图 1。
。已有文 献报
或 HPLC
[ 3 7]
测定格列齐特血浆浓度 ,
- 1
用于药动学研究或制剂生物等效性评价, 但这些分 析方法由于检测灵敏度低 ( > 75 g L ) , 血浆样品 预处理复杂 , 测试时间长或工作曲线浓度范围窄等 原因, 不适于临床大批量样品测试或低剂量药动学 研究。最近, 也有文献
E mail: zhongdf@ china com 中国药学杂志 2006 年 6 月第 41 卷第 11 期
Chin Pharm J , 2006 June , Vol 41 N o 11
物制品检定所) ; 格列齐特缓释片( 批号 010366, 规格 30 mg, 山东绿叶制药有限公司) ; 乙腈、 甲醇为色谱 纯; 甲酸、 正己烷、 二 氯甲烷均为分析纯; 空 白血浆 ( 沈阳中心血站 ) ; 水为二次重蒸馏水。 1 3 色谱条件 色谱柱为 Zorbax SB C 8 柱 ( 4 6 mm ∀ 150 mm, 5 m, 美 国安 捷 伦 公 司 ) ; 预柱 为 C18 柱 ( 美国 Phe nomenex 公司 ) , 4 mm ∀ 3 0 mm; 流动相为乙腈 水 甲 酸( 90 10 0 5) ; 流 速为 0 7 mL min- 1; 柱温为 20 #。 1 4 质谱条件 离子源为大气压化学电离源 ( APCI 源) ; 电晕放 电电流 4 0 A; 加热毛细管温度 250 # ; 气化室温度 400 # ; 鞘气 ( N2 ) 压力 551 kPa; 辅助气 ( N 2 ) 压力 69 kPa; 碰撞气 ( Ar) 压力 0 19 Pa; 碰撞诱导解离 ( CID) 电压分别为 25 eV( 格列齐特 ) 和 20 eV( 格列本脲 ) ; 正离 子 方 式 检 测; 扫 描 方 式 为 选 择 性 反 应 监 测 ( SRM) , 用于定量分析的离子反应分别为 m / z 324 ~ m / z 127( 格列齐特 ) 和 m / z 494~ m/ z 369( 格列 本脲 ) ; 扫描时间为 0 3 s。 1 5 溶液配制 精密称取格列齐特对照品 10 0 mg, 置于 25 mL 量瓶中, 用甲醇溶解并定容, 获得 400 mg L- 1 的储备 液 ∃ ; 取 2 5 mL 储备液 ∃ , 置于 10 mL 量瓶中 , 用甲 醇 水( 50 50) 稀释并定容 , 获得 100 mg L- 1 的储备 液 %。继续以甲醇 水( 50 50) 稀释储备液 % 配制成 5 0, 12 5, 40 0, 100, 400, 2 000, 5 000, 10 000 和 20 000 g L - 1 格列齐特的标准系列溶液。精密称取 10 0 mg 格列本脲, 置于 25 mL 量瓶中, 用甲醇定容 , 获得 400 mg L- 1 的储备液, 继续以甲醇 水 ( 50 50) 稀释得 1 mg L- 1 的内标溶液。上述储备液、 标准系 列溶液及内标溶液均于分析实验开始前 1 d 配制 , 于 4 # 冰箱内保存备用。 1 6 血浆样品处理 向 0 25 mL 血浆中 加入 100 L 内标溶液 ( 1 0 mg L 格列本脲) 和 0 25 mol L
[ 8]
报道 , 采用液相色谱 质谱 /
质谱联用法 ( LC MS/ MS) 测定马血浆及尿样中格列
基金项目 : 国家 863 计划资助项目 ( 2003AA 2Z347C) 作者简介 : 宿静 , 女 , 硕士研究生 864
*ห้องสมุดไป่ตู้
通讯作者 : 钟大放 , 男 , 教授
Tel/ Fax: ( 021) 50800738
+
图 1 格列齐特和内 标格 列本 脲 [ M + H] + 的 产物离 子全 扫 描质谱图
A- 格列齐特; B- 格列本脲
磷酸溶液 100 L。
Fig 1
Full scan product ion spectra of [M + H] + of gliclazide and
1
The inter and intra day precision ( RSD) were less than 4% , and accuracy ( relative error) were with
Each plasma sample was chromatographed within 2 8 min More than 150 plasma samples were assayed within each day T he
Rapid Determination of Gliclazide in Human Plasma by Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry Method SU Jing, CHEN Xiao yan, DUAN Xiao tao, ZHANG Yi fan, ZHONG Da fang * ( Laboratory of Drug Metabolism and Pharma
method was successfully applied in a pharmacokinetic study of glicalzide CONCLUSION The method is proved to be suitable for the clinical investigation of gliclazide pharmacokinetics, which offers the advantages of specificity , speed and greater sensitivity compared with the reported methods KEY WORDS: gliclazide; liquid chromatography tandem mass spectrometry; pharmacokinetics
格列齐特 ( gliclazide) 为第二代磺酰脲类口服降 糖药 , 临床用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病, 其作用 机制是通过促进胰岛素的分泌 , 改善糖尿病病人对 胰岛素 的敏感性而发 挥降糖作用 道, 采用 GC
[ 2] [ 1]
齐特 , 获得较高的灵敏度( 10 g L- 1 ) 。本试验拟建 立 LC MS/ MS, 测定人血浆中格列齐特的浓度 , 并应 用于缓释制剂的人体药动学研究。 1 材料与方法 1 1 仪器 TSQ 型液相色谱 质谱 / 质谱联用仪 , 配有大气 压化学电离源( APCI) 以及 Xcalibur 1 1 数据处理系 统( 美国 Thermo Finnigan 公司 ) ; LC- 10AD 高效液相 色谱输液泵 ( 日本岛津公司 ) 。 1 2 药品与试剂 格列齐特和内标格列本脲对照品 ( 中国药品生
LC MS/ MS 快速测定人血浆中格列齐特
宿静 , 陈笑艳, 段小涛 , 张逸凡 , 钟大放*
摘要 : 目的
( 沈阳药科大学药物代谢与药动学实验室 , 沈阳 110016)
建立测定人血浆中格列齐特的液相色谱 质谱/ 质谱联用法 , 并应用于人体药代动力学研究 。 方法
0 25 mL 血 浆
样品经液 液萃取后 , 以乙腈 水 甲酸 ( 90 10 0 5) 为流动相 , 采用 Zorbax SB C8柱分离 , 通过大气压化学电离四极杆串联质谱 , 以 选择离子反应监测 ( SRM) 方式进行检测 。 用于定量分析的离 子反应分 别为 m/ z 324~ m/ z 127( 格 列齐特 ) 和 m/ z 494 ( m/ z 369( 内标格列本脲 ) 。 结果 格列齐特血浆质量浓度线性范围 为 1 0~ 4 000 g L- 1 , 定量下限 为 1 0 g L- 1。 日内 和日间 精 密度( RSD) 均小于 4% , 准 确度( RE) 在 ! 5 1% 内 。 每个样品色 谱分析仅为 2 8 min, 应用此法 每天可以 测试 150 个样品 。 结 论 该法操作简便 、 快速 、 灵敏 , 适用于格列齐特的临床药 动学研究及制剂的生物等效性评价 。 关键词 : 格列齐特 ; 液相色谱 串联质谱法 ; 药动学 中图分类号 : R917; R969 文献标识 码 : A 文章编号 : 1001- 2494( 2006) 11- 0864- 04
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试验前签署知情同意书并在医院接受全面的身体检 查 , 心电图、 血压及肝肾功能等各项指标均属正常。 单剂量试验受试者于试验前 1 d 晚餐后禁食, 试验 日清晨空腹口服 30 mg 格列齐特缓释片。于服药前 ( 0 h) 和 服 药 后 1 0, 2 0, 3 0, 4 0, 6 0, 8 0, 10 0, 12 0, 15 0, 24 0, 36 0, 48 0 和 72 0 h 取血 3 mL, 分 离血浆 , - 20 # 保存待测。多剂量试验连续服药 6 d, 于第 3, 4, 5 天早服药前取血测谷浓度 3 次, 在第 6 天按单剂量设计的时间点取血。临床试验经伦理委 员会批准在辽宁省人民医院进行。 2 结 果 2 1 质谱分析 试验中曾考察了格列齐特及内标格列本脲在不 同离子源 ( ESI 和 APCI) 、 不同检测方式 ( 正、 负离子 扫描 ) 的质谱响应, 结果发现待测物在 ( + ) APCI 源 的质谱响应及重现性优于其他检 测方式。在 ( + ) APCI 源的一级全扫描质谱图中, 获得的基峰离子为 准分子离 子 [ M+ H] + 峰, 分别 为 m / z 324 和 m/ z 494。选择性对[ M+ H] 进行产物离子扫描, 格列齐 特及内标格列本脲生成的主要碎片离子分别为 m/ z 127 和 m/ z 369, 均由酰胺键断裂生成, 见图 1。
。已有文 献报
或 HPLC
[ 3 7]
测定格列齐特血浆浓度 ,
- 1
用于药动学研究或制剂生物等效性评价, 但这些分 析方法由于检测灵敏度低 ( > 75 g L ) , 血浆样品 预处理复杂 , 测试时间长或工作曲线浓度范围窄等 原因, 不适于临床大批量样品测试或低剂量药动学 研究。最近, 也有文献
E mail: zhongdf@ china com 中国药学杂志 2006 年 6 月第 41 卷第 11 期
Chin Pharm J , 2006 June , Vol 41 N o 11
物制品检定所) ; 格列齐特缓释片( 批号 010366, 规格 30 mg, 山东绿叶制药有限公司) ; 乙腈、 甲醇为色谱 纯; 甲酸、 正己烷、 二 氯甲烷均为分析纯; 空 白血浆 ( 沈阳中心血站 ) ; 水为二次重蒸馏水。 1 3 色谱条件 色谱柱为 Zorbax SB C 8 柱 ( 4 6 mm ∀ 150 mm, 5 m, 美 国安 捷 伦 公 司 ) ; 预柱 为 C18 柱 ( 美国 Phe nomenex 公司 ) , 4 mm ∀ 3 0 mm; 流动相为乙腈 水 甲 酸( 90 10 0 5) ; 流 速为 0 7 mL min- 1; 柱温为 20 #。 1 4 质谱条件 离子源为大气压化学电离源 ( APCI 源) ; 电晕放 电电流 4 0 A; 加热毛细管温度 250 # ; 气化室温度 400 # ; 鞘气 ( N2 ) 压力 551 kPa; 辅助气 ( N 2 ) 压力 69 kPa; 碰撞气 ( Ar) 压力 0 19 Pa; 碰撞诱导解离 ( CID) 电压分别为 25 eV( 格列齐特 ) 和 20 eV( 格列本脲 ) ; 正离 子 方 式 检 测; 扫 描 方 式 为 选 择 性 反 应 监 测 ( SRM) , 用于定量分析的离子反应分别为 m / z 324 ~ m / z 127( 格列齐特 ) 和 m / z 494~ m/ z 369( 格列 本脲 ) ; 扫描时间为 0 3 s。 1 5 溶液配制 精密称取格列齐特对照品 10 0 mg, 置于 25 mL 量瓶中, 用甲醇溶解并定容, 获得 400 mg L- 1 的储备 液 ∃ ; 取 2 5 mL 储备液 ∃ , 置于 10 mL 量瓶中 , 用甲 醇 水( 50 50) 稀释并定容 , 获得 100 mg L- 1 的储备 液 %。继续以甲醇 水( 50 50) 稀释储备液 % 配制成 5 0, 12 5, 40 0, 100, 400, 2 000, 5 000, 10 000 和 20 000 g L - 1 格列齐特的标准系列溶液。精密称取 10 0 mg 格列本脲, 置于 25 mL 量瓶中, 用甲醇定容 , 获得 400 mg L- 1 的储备液, 继续以甲醇 水 ( 50 50) 稀释得 1 mg L- 1 的内标溶液。上述储备液、 标准系 列溶液及内标溶液均于分析实验开始前 1 d 配制 , 于 4 # 冰箱内保存备用。 1 6 血浆样品处理 向 0 25 mL 血浆中 加入 100 L 内标溶液 ( 1 0 mg L 格列本脲) 和 0 25 mol L
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报道 , 采用液相色谱 质谱 /
质谱联用法 ( LC MS/ MS) 测定马血浆及尿样中格列
基金项目 : 国家 863 计划资助项目 ( 2003AA 2Z347C) 作者简介 : 宿静 , 女 , 硕士研究生 864
*ห้องสมุดไป่ตู้
通讯作者 : 钟大放 , 男 , 教授
Tel/ Fax: ( 021) 50800738
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图 1 格列齐特和内 标格 列本 脲 [ M + H] + 的 产物离 子全 扫 描质谱图
A- 格列齐特; B- 格列本脲
磷酸溶液 100 L。
Fig 1
Full scan product ion spectra of [M + H] + of gliclazide and
1
The inter and intra day precision ( RSD) were less than 4% , and accuracy ( relative error) were with
Each plasma sample was chromatographed within 2 8 min More than 150 plasma samples were assayed within each day T he
Rapid Determination of Gliclazide in Human Plasma by Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry Method SU Jing, CHEN Xiao yan, DUAN Xiao tao, ZHANG Yi fan, ZHONG Da fang * ( Laboratory of Drug Metabolism and Pharma