紫外可见分光光度计原理及操作

合集下载
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
dT d lg T 0.434 bdc T
将上两式相比,并将 dT 和 dc 分别换为T 和 c,得
c 0.434T c T lg T
当相对误差 c/c 最小时,求得T=0.368 或 A=0.434。即当A=0.434 时,吸光度读数误差最小! 通常可通过调节溶液浓度或改变光程 b来控制A的读数在0.15~1.00范
类型
2.双光束分光光度计 经单色器分光后经反射镜分解为强度相等的两束光,一束通过参比 池,一束通过样品池。光度计能自动比较两束光的强度,此比值即为试 样的透射比,经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函数记录下来。 双光束分光光度计一般都能自动记录吸收光谱曲线。由于两束光同 时分别通过参比池和样品池,还能自动消除光源强度变化所引起的误差。
保养
二、工作台要求 1、可承受压力 35Kg+25Kg(PC) 2、最小尺寸 :长:1120mm,宽:710mm,高:520mm
三、电源要求
1、供电电压:100/120/220/230/240V 交流±5% 50/60Hz 2、功率消耗:约190VA
3、保险丝使用:100 - 120V供电,5A ;220 - 240V供电,3.15A
类型
3.比例双光束分光光度计
由同一单色器发出的光被分成两束,一束直接到达检测器,另一束 通过样品后到达另一个检测器。这种仪器的优点是可以监测光源变化带
来的误差,但是并不能消除参比造成的影响
UV-2550的特点
6 挡狭缝可选
PC 控制存储、调用方便 可采用复制、拷贝方法在电子表格和字处理软件中处理数据和打印报 告 可加载膜厚、动力学、多波长、色彩分析等软件 DDM(双闪耀波长双单色器)降低杂散光,提高长波长区的能量响应 (UV-2550)
A bc
比a更常用。越大,表示方法的灵敏度越高。与波长有关,因 此, 常以表示。
二、紫外-可见分光光度计 结构及类型
UV示意图
仪器结构
紫外 - 可见分光光度计仪器由光源、单色器、吸收池、检测器和数 据系统五部分组成。
一、光源
对光源基本要求:足够光强、稳定、连续辐射且强度随波长变化小。 1. 钨及碘钨灯:340~1500 nm,多用在可见光区;
去掉杂物重新初始化。 纠正样品室门,重新初始化 。
故障修理
2、扫描故障
1)扫描或数据杂乱(不在指定的范围内) 检查项目 狭缝宽度 处理方法 狭缝可能设置太窄。设置更宽狭缝,作新基线,重新扫描。
参比样品
参比吸收可能太高,检查这路光束的吸收值,如果大于 2.0Abs,动态范围限制可能引起扫描噪音。把参比样品放到 参比池固定架上,而把另一个参比样品放在样品光束上,以平 衡能量。
围内。
分析条件选择
二、反应条件选择 1.显色剂的选择原则: 使配合物吸收系数 最大、选择性好、组成恒定、配合物稳定、显 色剂吸收波长与配合物吸收波长相差大等。 2. 显色剂用量:
配位数与显色剂用量有关;在形成逐级配合物,其用量更要严格控
制。 3. 溶液酸度:配位数和水解等与 pH 有关。
4. 显色时间、温度、放置时间等。
分析条件选择
三、参比液选择 1.溶剂参比:试样组成简单、共存组份少(基体干扰少)、显色剂不吸
收时,直接采用溶剂(多为蒸馏水)为参比;
2.试剂参比:当显色剂或其它试剂在测定波长处有吸收时,采用试剂作 参比(不加待测物);
3.试样参比:如试样基体在测定波长处有吸收,但不与显色剂反应时,
可以试样作参比(不能加显色剂)。
2. 氢灯和氘灯:160~375nm,多用在紫外区。
二、单色器(Monochromator) 在UV-Vis光度计中,单色器通常置于吸收池的前面(可防止强光照
射引起吸收池中一些物质的分解)
仪器结构
三、吸收池(Cell,Container): 用于盛放样品。可用石英或玻璃两种材料制作,前者适于紫外区和 可见光区;后者只适于可见光区。有些透明有机玻璃亦可用作吸收池。 四、检测器: 硅光电池、PMT、PDA 五、数据系统
光源可能发生故障。检查是否是相对应的操作范围的光源配置 。如果需要请更换。 处理方法 交换样品重新进行基线的校正。 用“MEDIUM”或更低的扫描速度进行基线的校正。 用宽波长范围进行基线的校正。 一些可选样品室可能改变基线。附件装配好后重新执行基线 校正。
光源 2)基线不平 检查项目 高吸收样品 “FAST”扫描速度 波长范围可能太窄 可能使用了样品室可选 配件
wk.baidu.com该法只有在测定浓度范围内遵守 L-B定律,且cx与cs大致相当时, 才可得到准确结果。
2. 多组分定量方法
由于吸光度具有加合性,因此可以在同一试样中测定多个组份。
分析条件选择
一、仪器测量条件 由于光源不稳定性、读数不准等带来的误差。当分析高浓度的样品 时,误差更大。 由L-B定律: 微分后得:
A lg T bc
吸收光谱曲线,可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或
测定该物质的含量,这就是分光光度定性和定量分析的基础。 3)紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)。
朗伯-比耳定律是光吸收的基本定律,俗称光吸收定律,是分光光度法
定量分析的依据和基础。
朗伯-比耳定律
一、透射率T%
说明
检查光度计的ROM
3
4
RAM检查
滤光片电机初始化
检查随机储存器
检查杂散光切割滤光片位置
5
6 7 8 9 10 11 12 13 14
狭缝电机初始化
光源电机初始化 扫描电机2初始化 扫描电机1初始化 碘钨灯位置搜索 波长原点1搜索 碘钨灯能量搜索 氚灯最大位置搜索 氚灯能量搜索 波长原点2搜索
检查狭缝电机位置
分析条件选择
四、干扰消除
1. 控制酸度:
配合物稳定性与pH有关,可以通过控制酸度提高反应选择性,副反应减少,而
主反应进行完全。如在0.5MH2SO4介质中,双硫腙与Hg2+生成稳定有色配合物,而与 Pb2+、Cu2+、Ni3+、Cd2+等离子生成的有色物不稳定。 2. 选择掩蔽剂 3. 合适测量波长 4. 干扰物分离 5. 导数光谱及双波长技术
检查项目
处理方法
RS-232系列电缆 UV-2401/2501PC 确认已固定好光度计和电脑上的连接器端口.选择“Acquire( 导入)”菜单下的“Utilities(工具)”,通过选择“ON” 键建立与光度计的通信。初始化屏幕出现。
故障修理
步骤
1 2
检查项目
LSI 初始化 ROM 检查 参数初始化
紫外可见分光光度计原理及操作
潘睿睿
目录
紫外-可见分光光度计仪器原理
1
紫外-可见分光光度计结构及类型
2 3
UV-Vis分光光度法的应 用和分析条件的选择
4
UV-Vis分光光度计的保 养与故障处理
一、紫外-可见分光光 度计仪器原理
原理
波长 200 400 800 3200(nm)
g -X-射线
紫外
透射光 I
入射光I0
光程长b
I 透射率 T% = × 100% I0
朗伯-比耳定律
当入射光波长一定时,待测溶液的吸光度 A与其浓度和液层厚度
成正比,即
A kbc
k 为比例系数,与溶液性质、温度和入射波长有关。 当浓度以 g/L 表示时,称 k 为吸光系数,以 a 表示,即
A abc
当浓度以mol/L表示时,称 k 为摩尔吸光系数,以 表示,即
四、紫外-可见分光光度计的 保养与故障处理
保养
一、环境要求
1、使用工作温度:15-35℃,湿度:45-80%,如果温度高于30℃,则湿
度必须小于70% 2、避免日光直射
3、避免震动
4、避免强磁场,电场 5、远离腐蚀性气体,并避免置于任何可能导致紫外区吸收的含有机/无
机试剂气体的区域
6、避免脏污、多尘环境
故障修理
3)光度值不正常
检查项目 处理方法
在测量参数中误选了“自动调 零”(样品室中的样品设置为 0吸光度) 波长设定不对应 样品预处理不好 用不合适的池
移走样品,重新选择“自动调零”。
设定合适的波长 正确进行样品的预处理。 玻璃池在紫外区域不透光,应改用石英池。
谢 谢
的 KOH 溶液(0.05mol/L)的吸光度 A,调整光度计使其A 达到指定的
吸光度。
故障修理
1、光度计初始化失败 1)光度 度没电源(检查风扇是否转动),软件没有出现初始化屏幕。 (光度计状态窗口报告OFF。)
检查项目
电源线 保险丝 插入插座 更换新的
处理方法
2)光度计电源接通,但软件初始化屏幕没有出现,不能和光度计连接。 (光度计状态窗口处于OFF。)
8-13(UV-2401/2450 ) 1-14(UV-2501/2550 )
光源: 打开光源室罩看光源是否成套 。(不要直视氘灯过长时间, 长时间暴露在UV辐射下会对眼 睛有伤害)
样品室 检查是否有杂物阻挡光束。 样品室 确认样品室门已关严密,前板 盖安装正确。
关闭光度计和电脑,再次开 始启动过程。观察灯是否亮 ,如果不,则此灯应更换。 碘钨灯可使用2000小时,氘 灯可使用500小时间。 更换后重新启动。
以吸光度A为纵坐标,辐射波长为横坐标
作图,得到该物质的吸收光谱或吸收曲 线,据吸收曲线的特性(峰强度、位置及 数目等)研究分子结构。
应用
二、定量分析 1. 单组份定量方法 1)标准曲线法 2)标准对比法 该法是标准曲线法的简化,即只配制一个浓度为cs的标准溶液,并
测量其吸光度,求出吸收系数k,然后由Ax=kcx求出cx
它的作用是放大信号并以适当方式指示或记录下来。现在一般的紫
外可见分光光度计有计算机控制和主机单片机控制两种类型,功能基本 类似。
类型
紫外-可见分光光度计的类型很多,但可归纳为三种类 型,即单光束分光光度计、双光束分光光度计和比例双光束 分光光度计。
1.单光束分光光度计 经单色器分光后的一束平行光,轮流通过参比溶液和样品溶液,以 进行吸光度的测定。这种简易型分光光度计结构简单,操作方便,维修 容易,适用于常规分析。
保养
六、分光光度计的校正
当光度计使用一段时间后其波长和吸光度将出现漂移,因此需要对 其进行校正。
波长标度校正:
使用镨-钕玻璃(可见光区)和钬玻璃(紫外光区)进行校正。因为 二者均有其各自的特征吸收峰。
吸光度标度校正:
采用 K2CrO4 标准液校正(在15oC时,于不同波长处测定0.04000g/L
检查光源电机位置 检查波长扫描电机2位置(主单色器) 检查波长扫描电机1位置(前单色器) 卤素灯最大能量定位 检查波长源位置 检查卤素灯能量 氚灯最大能量定位 检查氚灯能量 检查0NM波长位置
15
待命
初始化完毕
故障修理
3)在初始化阶段出现的错误(红色标记出现) 初始化错误和相应的处理方法
初始化步骤 1-7(UV-2401/2450) 1-8(UV-2501/2550) 检查项目 处理方法 这些项目的初始化失败需要 通过岛津制作所或其指定代 理商来处理。
三、UV-Vis分光光度法的应用 及分析条件选择
应用
一、定性分析
不同物质结构不同或者说其分子能
级的能量 ( 各种能级能量总和 )或能量间
隔各异,因此不同物质将选择性地吸收 不同波长或能量的外来辐射,这是 UVVis定性分析的基础。 定性分析具体做法是让不同波长的 光通过待测物,经待测物吸收后,测量 其对不同波长光的吸收程度(吸光度A),
可见
红外
微波
无线电
真空紫外
近红外
核磁共振
波长越短,能量越高
原理
1)分子吸收光谱的形成过程:
运动的分子外层电子----吸收外来外来辐射----产生电子能级跃迁---分子 吸收谱。 2)由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构,其吸 收 光能量的情况也就不会相同。因此,每种物质就有其特有的、固定的
4、安装地点具备可靠的仪器接地端子
保养
四、清洁仪器外部和样品室
1、使用软布稍微蘸取水,或水溶液或者中性清洁剂溶液轻柔搽拭 外表面。避免蘸取过量而导致流入仪器内部。 2、清除样品室内残留液体样品,防止蒸发,避免腐蚀样品室。 五、波长准确度检查(每半年一次) 利用氘灯的两个特征波长峰486.0nm和656.1nm来检查波长的 精确度。
相关文档
最新文档