凝集反应(肥达反应、血型鉴定)

O抗体
↑ ↑ ― ―
H抗体
↑ ― ↑ ―
ABO血型鉴定

根据红细胞膜表面有无A抗原和（或）B抗原，将血型分 为A，B，AB，O型4种。
实验材料

载玻片、刺血针、消毒牙签、A型和B型标准 血清、生理盐水、酒精棉球。
实验步骤

1．取一块清洁玻片，在其左右端分别用A、B做好标记。 2．在玻片一端滴加A型标准血清（抗B）一滴，在另一端
和希氏沙门菌的H抗原的诊断菌液与病人血清做凝集试验，
测定受检血清中有无相应的抗体以及抗体的效价，用于伤 寒副伤寒的辅助诊断或流行病学调查。
材料

伤寒沙门菌O、H菌液，甲型副伤寒沙门菌H菌液和肖氏 沙门菌H菌液。

生理盐水和患者血清（1:10稀释），试管，1ml吸管，试
管架，52℃水浴箱
方法


上液半混浊，细菌部分凝集。 上清液混浊，仅有小部分细菌凝集。 不凝集，液体呈乳状与对照管相同。
效价判定：以能出现“++”凝集现象的血清最高稀释度为 该血清的凝集效价。

血清的凝集效价（滴度）：指能与一定量的抗原发生肉眼 可见的明显凝集（即“++”凝集）的血清最高稀释倍数。
血清效价代表血清中抗体的含量，血清效价越高，所含抗
直接凝集反应

颗粒性抗原与相应抗体直接结合所产生的凝集现象。
间接凝集反应

将可溶性抗原吸附于载体颗粒(如乳胶颗粒、红细胞等)的 表面，称之为致敏颗粒。当致敏颗粒与相应抗体结合，即 可出现凝集现象。
协同凝集实验

金黄色葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白(SPA)能与人及多 种哺乳动物IgG类抗体的Fc段结合。IgG的Fc段与SPA结 合后，两个Fab段暴露在葡萄球菌表面，仍保持其抗体活
体的量愈多。一般认为，伤寒沙门菌“O”抗体凝集效价 在1:80以上，“H”抗体凝集效价在1:160以上，引起副伤 寒的沙门菌H凝集效价在1:80以上才有诊断价值。
O与H抗体的诊断意义

O抗体：IgM H抗体：IgG 诊断
肠热症 感染早期或与伤寒沙门菌O抗原有交 叉反应的其他沙门菌感染 预防接种或非特异性回忆反应 患病可能性小
凝集反应
实验目的
掌握凝集反应原理 熟悉肥达试验的方法、凝集效价的判定及 临床意义


抗原与相应抗体特异性结合，在电解质参与下形成肉眼可
见的凝集物，称之为凝集反应。

直接凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体直接结合所产生的
凝集现象。

间接凝集反应：将可溶性抗原吸附于载体颗粒(如乳胶颗 粒、红细胞等)的表面，称之为致敏颗粒。当致敏颗粒与 相应抗体结合，即可出现凝集现象。
性和特异性，当其与特异性抗原相遇时，出现凝集现象。
称为协同凝集反应。
金黄色葡萄 球菌
抗体
可溶性抗原
凝集
直接凝集反应

试管凝集试验——肥达反应 玻片凝集试验——ABO血型鉴定
肥达反应

肥达反应(widal reaction)是用已知的伤寒沙门菌的H抗原 (鞭毛)和O抗原(菌体)以及甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌
弃去0.5ml
7 阴性对照 0.5 ——
生理盐水 受检血清 稀释度
诊断菌液
稀释度 血清最终 稀释度
0.5
1:4 1:40
0.5
1:8 1:80
0.5
1:16 1:160
0.5
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0.5
1:64 1:640
0.5
1:128 1:1280
0.5
结果

凝集程度：以“+”多少表示 。
（++++）上清液澄清，细菌全部凝集沉淀于管底。 （+++） 上清液轻度混浊，细菌大部分凝集沉淀于管底。 （++） （+） （-）
滴加B型标准血清（抗A）。

3．穿刺手指取血，玻片的两端标准血清各加一小滴血，用 牙签搅拌，使每侧抗血清和血液混和。每边用一支牙签， 切勿混用。

室温下静置，观察有无凝集现象，
结果判断 血型 A B O AB 抗A试剂 + + 抗B试剂 + +
呈现均匀的淡红色时，表明不凝集，用“一”号表示。
出现细沙状凝集颗粒，表明凝集，用“十”号表示。

取洁净试管28支，分成4排，每排7支，依次编号。 于每个试管内加入生理盐水0.5ml。 在每排第一管各加患者血清0.5ml，进行倍比稀释。 ml 1 0.5 0.5 1:2 2 0.5 0.5 1:4 3 0.5 0.5 1:8 4 0.5 0.5 1:16 5 0.5 0.5 1:32 6 0.5 0.5 1:64