HPLC同时测定关节炎大鼠血清色氨酸和犬尿氨酸
微透析_高效液相色谱法测定大鼠脑脊液中4种氨基酸的含量测定
本实验采用微透析技术 将透析 探针埋 入动物 的脑中, 透 析探针可除去分子量大 于 30 000 的 分子 [ 4, 5] , 对周围 组织损 伤 很小, 取 样 量少, 并 且 多位 点 多时 点采 样 进行 动态 监 测。 样品不经预处理, 灌流速度稳定在 31 0 L L /m in可使回收率提 高。
雄性 SD大鼠以水合氯醛 ( 400 m g/kg)腹 腔麻醉, 固定在 立体 定 位 仪 上, 将 透 析 套 管 定 位 于 右 侧 纹 状 体 (前 囟 前 01 2 mm, 旁开 315 mm, 皮层下 512 mm )并 用小螺钉 固定。开 启透析灌流系统, 调节恒 流泵控制液流速 310 LL# m in- 1, 透 析探针与人工脑脊液灌 流系统 直接相 接。灌流平 衡 120 m in 后, 每 15 m in收 集 1管, 每管 30 LL, 共收 集 8管透 析液。收 集的透析液立即放 入 - 20 e 冰箱保存。 6 OPA 柱前衍生
的含量。结果: 该体系可在 30 m in内对脑脊液 中 4种氨 基酸实现良 好的分离, 4种 氨基酸在 01625- 10 Lmol/L浓
度范围内与色谱峰面积线性关系良好, 保留时间分别是天门冬氨酸 41392 m in、谷氨酸 51592 m in、牛磺酸 131 625 m in、
C - 氨基丁酸 141833 m in。结论: 本方法准确、灵敏、方便、重复性好, 可用于微透析样品中氨基酸的含量测定。
液相分析采 用梯 度洗 脱, 缩短 分析 时间, 改 善峰 形 和提 高样品的检测灵敏 度。选用 KH 2 PO4 缓 冲液 配制流 动相, 其 浓度为 01 1 m ol/L, 如果浓度 过高会 破坏键 合相的 稳定性, 对 色谱柱的损 害较 大。另外, 缓 冲液 一 定要 用低 浓度 的, 临用 前现 配, 并 用 01 22 Lm 滤 膜 过 滤。水 用 超 纯 水 系 统 去 除 杂质。
高效液相色谱法同时测定血清中的犬尿氨酸和色氨酸
一
王 瑞 ， 唐 爱 国
中南 大学 湘雅二医 院检验科 ，湖南 长沙 ４ ０ １ ） １０ １
摘要： 建立 了一种能 同时检测血 清 中的犬尿 氨酸 （ ｙ ｕｅ ｉｅ Ｋ ｎ 和色氨 酸 （ｒｐｏ ｈ ｎ Ｔｐ） ｋ ｎ ｒｎｎ ， ｙ ） ｔｙ ｔｐ ａ ， ｒ 的高 效液相 色谱－
ａ ｅｏ ｉ ｉ （ Ｈ ， ｃ ｔｎ ｔ ｌ ｐ ３ ６）ａ ｌ ｗ ａ ｅ ｏ ． ／ ｎ．Ｔ ｅ ｕ ｔａ ｉ ｌｔｄ ｔ ｃ ｏ ｓ ｏ ｅ ａ ｅ ｔ ｒｅ ｔａ ｆ ｏ ｒ ｔ ｆ１ ０ ｍＬ ｍｉ ｈ ｌ ｖ ｏｅ ｅｅ ｔ ｒ ｗａ ｐ ｒ ｔ ｄ ａ ｒ
￣ｍ ｏ／Ｌ． Ｔｈｅ ｒ ｃ ｅ ｅ ｐ ｅ ｅ ｆｏｍ ５ ５１ ｌ ｅ ｏｖ ｒ ｓ ｏｆＴｒ ｗ ｒ ｉ ｒ ９ ． ％ ｔ ８＋ ７ ． ｔ ｎｔａ ｙ ａ ｎ ｅ ｄ ｙ ｖａ ａ ｏ９ ６ ％ ｈｅ ｉ ｒ ｄａ ｎｄ ｉ ｔ ｒ ａ ｒ － ｉ ｔｏｎ ｅ ｅ １ ５ ｉ ｓ ｗ ｒ ． ０％ ａ ｄ ２． ％ ，ｒ ｓ ｃ ｉ ｌ ． Ｔｈｅ ｍ ｅ ｈｏ ｓ ｓｍ ｐｌ ｎ ６５ ｅ ｐｅ ｔｖｅ ｙ ｔ ｄ ｉ ｉ ｅ，ｆ ｓ ，ａ ｃ ａ ｅ，ａ ｄ ｓ ｉａ ｅ ａ ｔ ｃ ｕｒ ｔ ｎ ｕ ｔ ｂｌ ｆ ｒ ｒ ｕｔ ｅ ａｎ ｙ ｉ ． ｏ ｏ ｉ ａｌｓ ｓ ｎ
（ Ｌ － Ｖ） ｔｅ ｌｙ ｄａＳ ｍｍｅｒ ｈｅｄＲ － ８ｃ ｌｍｎ （５ ＨＰ Ｃ Ｕ ＋Ｉ ｍｐｏ ｅ ｙ ｔ Ｓ ｉｌ Ｐ Ｃ１ ｏｕ ｙ １ ０ｍｍ ． ｘ３ ９ｍｍ ｄ ， ｍ ） ｉ ． ５ｉ ． ｘ ａ ｄａｍｏ ｉ ｈ ｓ ｆ１ ｎ ｂｌ ｐ ａｅ ｏ ｍｍｏ／ ｏ ｉｍ ｃ ｔｔ－ｃ ｔ ｃｄ ｓ ｌｔ ｎ ｃ ｎａｎｎ ， ％（ ／ ） ｅ ５ ｌＬ ｓ ｄｕ ａ ｅａｅａ ｅｉ ａ ｉ ｏｕｉ ｏ ｔｉｉｇ ２ ７ ｖ ｖ ｃ ｏ
高效液相色谱紫外法测定血清犬尿氨酸及色氨酸及其临床应用
ａｎｄ
ＫＴ ｒａｔｉｏ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ｈｅａｌｔｈｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｋｙｎｕｒｅｎｉｎｅ
ｐｅｒｓｏｎｓ，ａｎｄ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ
ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ
ｃｈｒｏｎｉｃ
ｒｅｎａｌ
ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ
ｍｍｏｌ／Ｌ
ｔｈｅ
ｓｏｄｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ－ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ
ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ａｔ
ａ
２．７％（ｖ／ｖ）ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ ａｓ
ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ １．０ ｍｌ／ｍｉｎ．Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ｗｏｒｋｅｄ ａｔ
２２５ｎｍ．Ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ａｓｓａｙ ｔｉｍｅ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｗａｓ ｗｉｔｈｉｎ １ ０ ｍｉｎｕｔｅｓ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ
ｓｅｒｕｍ ｂｙ
ｒｅｖｅｒｓｅ
ｋｙｎｕｒｅｎｉｎｅ（ＫＶＮ）ａｎｄ ｔｒｙｔｏｐｈａｎ（ｎ冲）ｉｎ
２．Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｈｅ ＫＹＮ
ｐｈａｓｅ ｈｉｇｈ
ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（ＨＰＬＣ．ＵＶｌ． ａｎｄ
量显著升高、ＴＲＰ含量显著降低，且ＣＲＹ组血清ＫＹＮ和ＴＲＰ含量
与肾功能状态、某些血液学参数有一定相关性；尿毒症患者血液透析 治疗后血清ＫＹＮ含量显著降低，ＴＲＰ无明显变化。 结论： １．本文建立的ＨＰＬＣ－－ＵＶ法可同时测定血清ＫＹＮ和
ＴＲＰ，方法简单、快速、灵敏、特异、准确，适宜于临床与科研工作。 所建立的血清ＫＹＮ含量和ＫＴ比值范围可为相关疾病和基础研究工 作提供参考依据。 ２．ＣＲＦ患者外周血存在较为严重的犬尿氨酸代谢紊乱，且与肾功
高效液相色谱法同时测定血清色氨酸和犬尿氨酸浓度的方法建立及应用
ｍ ｉ ｏ ｐ ｎｆ ｒＴｒ ．Ｔｈ ｉｅ ｒｒ ｎ ｅ ｆｔｅ ｍｅｈ ｄ ｗｅｅ ｆｏ ０ ０ ３ ｔ １￣ ｌＬ ｆ ｒＫｙ ｎ ． ５ ｏ ｅｌ ａ ａ ｇ ｓｏ ｈ ｔ ｏ ｒ ｒｍ ． ８ ｏ ２ ｔ ／ ｏ ｎ ａ ｄ ２ ６ ０ ｔ ｎ ｍｏ ６ ８ ０ ０ ￣ ｌＬ ｆｒＴｒ ７ ． ０ ｔ ／ ｏ ｐ，ｔ ｅｄ ｔｃ ｉｎｌ ｔ ｒ ． ２ ｔ ｌＬ ｆｒＫｙ ｎ ． ５ ｔ ｌＬ ｆｒＴｒ ｍｏ ｈ ｅｅ ｔ ｉ ｓｗｅ ｅ０ ０ ８￣ ｏ ｍｉ ｍｏ／ ｏ ｎａ ｄ０ ０ ３￣ ｍｏ／ ｏ ｐ，
文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ６ ３４ ３ （ ０ ７ ０ — ０ — ３ １ ７ — １ ０ ２ ０ ） ２ １ ３０
【 键 词 】 色 谱 法 ， 压 液 相 ； 色 氨 酸 ； 犬 尿 氨 酸 关 高
中 图 分 类 号 ： ４ ６ １２ Ｒ ４ ． １
Ｓｉ ｕｌａ ｏ ｓ ｄ ｔ ｒ ｉ ｔｏ ｆｔｙｐ ｏ ｍ ｔ ｎｅ ｕ ｅ ｅ ｍ ｎａ ｉ ｎ ｏ ｒ ｔ ｐｈａ ａ ｙ ｎ ｎｄ ｋ ｎｕｒ ｎｉｅ ｉ ｅ ｕ ｙ ｈ ｇ ｅ ｆ ｒ ｎｃ ｉ ｉ ｈｒ ｍ ａ ｅ ｎ ｎ ｓ ｒ ｍ ｂ ｉ ｈ ｐ ｒ ｏ ｍａ ｅ ｌｑｕｄ ｃ ｏ —
ｍｍ ，５ｕ ｍ） ａ ｄ ｄ ｔｃｅ ｔ３ ０ ｎ ｆｒＫｙ ｎ ７ ｍ ｏ ｐ ｎ ｅｅ ｔｄ ａ ６ ｍ ｏ ｎ ａ ｄ ２ ８ｎ ｆｒＴｒ ．Ｔｈ ｌｗ ａｅ ｗａ ． ／ ｉ ｎ ｅｆ ｏ ｒ ｔ ｓ０ ８ｍｌｍ ｎａ ｄ
ｔ ｅ ｃ ｌ ｍｎ ｔ ｍｐ ｒ ｔ ｒ ｓｋ ｐ ｔ２ ｈ ｏ ｕ ｅ ｅ ａ ｕ ｅｗａ ｅ ｔａ ５℃ ． ｓ ｌ Ｔｈ ｅ ｅ ｔ ｎ ｔ ｓｗｅ ｅ ３ ３ ｒ ｉ ｏ ｎ ａ ｄ ５ ２ Ｒｅ ｕ ｔ ｓ ｅ ｒ ｔ ｎ ｉ ｉ ｒ ． ｎ ｆ ｒＫｙ ｎ ． ｏ ｍｅ ａ
不同组织中犬尿氨酸测定方法的建立及验证
关键词：犬尿氨酸；血清；脑；肠；测定
中图分类号：Ｒ９６５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６３７６５（２０１８）１００５１３３００８９０３
ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＶｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＫｙｎｕｒｅｎｉｎｅＡｓｓａｙｉｎＤｉｆｆｅｒｅｎｔＴｉｓｓｕｅｓ
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａＬＣＭＳｍｅｔｈｏｄｆｏｒｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｋｙｎｕｒｅｎｉｎｅｉｎｓｅｒｕｍ，ｂｒａｉｎａｎｄｉｎ ｔｅｓｔｉｎａｌｔｉｓｓｕｅｓｏｆｍｏｕｓｅＭＥＴＨＯＤＳ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｐｒｅｃｉｐｉｔａｅｄｗｉｔｈｐｅｒｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄ，ａｎｄｔｈｅｎｓｅｐａ ｒａｔｅｄｏｎＳｕｎＦｉｒｅＴＭ Ｃ８ｃｏｌｕｍｎｕｓｉｎｇａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅｓｏｄｉｕｍａｃｅｔａｔｅ（１０∶９０）ａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅＲＥＳＵＬＴＳ Ｔｈｅｓｐｅｃｉ ｆｉｃｉｔｙａｎｄｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅｇｏｏｄＴｈｅｉｎｔｒａｄａｙａｎｄｉｎｔｅｒｄａｙｐｒｅｃｉｓｉｏｎＲＳＤｖａｌｕｅｓｗｅｒｅａｌｌｂｅｌｏｗ１０％， ａｎｄｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｗａｓｆｒｏｍ９６５０％ ｔｏ９９２２％ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ Ａｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄａｎｄａｃｃｕｒａｔｅＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｋｙｎｕｒｅｎｉｎｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｓｅｒｕｍ，ｂｒａｉｎａｎｄｓｍａｌｌｉｎｔｅｓｔｉｎｅｏｆｍｏｕｓｅｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ＫＥＹＷＯＲＤＳ：Ｋｙｎｕｒｅｎｉｎｅ；Ｓｅｒｕｍ；Ｂｒａｉｎ；Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ；Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
高效液相色谱法同时测定血清中的犬尿氨酸和色氨酸
! 第"期
王 ! 瑞， 等： 高效液相色谱法同时测定血清中的犬尿氨酸和色氨酸
・ )#)・
相关， !"# 与 $%& 在 血 清 中 的 含 量 之 比 是 反 映 人 体 内免疫状态的敏 感 指 标。 因 此， 定量分析血清中的 !"# 和 $%& 可为相关疾患的诊断治疗和基础研究 提 供重要依据。 ! ! 目前， 国内外科 研 人 员 主 要 应 用 高 效 液 相 色 谱 法检测 !"# 和 $%& 。由 于 !"# 本身 不能 产 生 荧 光， （ ()*+’,*- ） 一般采用 高效液 相 色 谱 ’ 荧 光 检 测 法 柱后衍生 法
=.’O6140"84 ，MPD ） 的催 化 下 合 成 重 要 的 中 间 代 谢 。当机体处于细 产物犬尿氨 酸 （ 9602#40.04 ，:60 ） 胞免疫激活状态时， 3 细 胞 释 放 的 !+ 干 扰 素 可 活 化 多种细胞中的 MPD 。研 究 表 明， :60 、 3#; 与 肾 脏 疾 病、 神经精神疾病、 异常妊娠等［ & ’ $ ］的发 生发 展密切
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谱
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高效液相色谱法同时测定血清中的犬尿氨酸和色氨酸
王 ) 瑞， ) 唐爱国
（ 中南大学湘雅二医院检验科，湖南 长沙 %&""&& ） 摘要： 建立了一种能同时检测 血 清 中 的 犬 尿 氨 酸 （ 9602#40.04 ， :60 ） 和色氨酸 （ 5#6;5’;%"0 ， 3#; ） 的 高 效 液 相 色 谱+ 紫外检测法。采用的色谱柱为 <6--45#6 <%.4(= >?+7&- 柱 （ &(" -- . $/ * -- ./ =/ ， ( !-） ， 流动相为 &( --’( @ A 乙酸钠 + 乙酸溶液 （ 含 !/ + B 乙腈， ;C $/ # ） ， 流速为 &/ " -A @ -.0 ， 紫外检测波长为 !!( 0- 。血清标本经 (/ " B （ 体积 :60 保 留 时 间 为 $/ ( -.0 ， 线性范围 分数） 高氯酸溶液去除蛋白质后取上清液直接进样 分 析 测 定。研 究 结 果 表 明， 为 "/ "*- ’ %* ! -’( @ A ， 最低检出浓度为 "/ "! ! -’( @ A ， 回 收 率 为 *"/ -! B ’ *$/ %( B ； 3#; 保 留 时 间 为 -/ & -.0 ， 线性 最低检出浓度为 "/ !" ! -’( @ A ， 回收率为 *(/ (& B ’ *-/ #+ B 。 :60 和 3#; 日内、 日间 测 定 范围为 %/ * ’ %*" ! -’( @ A ， 的相对标准偏差均小于 % B ， 苯丙氨酸、 酪氨酸、 ( + 羟色胺和犬尿喹啉酸等物质对该法均无干扰。该方法简便、 快 速、 稳定、 可行， 可应用于临床和科研工作。 关键词： 高效液相色谱法； 紫外检测； 色氨酸； 犬尿氨酸； 血清 中图分类号： D#(-) ) 文献标识码： E ) ) 文章编号： &""" +-+&$ （ !""# ） "! +"&%" +"%) ) 栏目类别： 研究论文
基于HPLC的标准加入法同时测定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸
加入法定 量。选川 Ｔ ｈ ｅ ｒ ｎ １ ｏ Ｈｙ ｐ ｅ ｒ ｓ ｉ １ （ Ｉ Ｉ ） 色谱柱 （ ２ ５ ０ ｉ ｉ ｌ ｌ ｉ ｌ ×４ ． ６ ｍｉ ｌ ｌ ， ５［ ｉ Ｉ ｌ １ ） 分离 ， 流 动 相 为 乙腈 醋 酸 钠 （ １ ５ ｍｍｏ ｌ ／ Ｉ ， 冰醋酸调 ｐ Ｈ至 ４ ． ０ ） ， 流速 １ ． １ ｍＩ ／ ｍｉ ｎ ， 柱温 ３ （ ） ℃， 犬尿氨酸和色氨酸的紫外检测波长分别为 ３ ６ ｔ ） Ｒ ｉ ｌ ｌ
ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｓ ｉ ｍｕ ｌ ｔ ａ ｎ ｅ ｏ ｕｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｋ ｙ ｎｕ ｒ ｅ ｎ ｉ ｎ ｅ ａ ｎ ｄ ｔ ｒ ｙ ｐ ｔ ｏ ｐ ｈ ａ ｎ ｉ ｎ ｔ ｈｅ ｓ ｅ ｒ ｕ ｎ ｌ ｏ ｆ ｍｉ ｃ ｅ ， ｗｈｉ ｃ ｈ ｗａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｅ Ｉ ＤＯ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｖ ｉ ｗ ｏ ｉ ｎ ｍｉ ｃ ｅ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ Ｉ ＤＯ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ｓ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ Ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｗａ ｓ
和２ ８ （ ） ｎ Ｉ ｌ ｌ 。结 果
犬 尿 氨 酸 保 留时 间 为 ６ ． １ ０ ｍｉ ｎ ， 线性范围为 ０ ． ２ ５ ～１ ０ ｖ ｍｏ ｌ ／ Ｉ ， 检测 限为 ０ ． ０ ９ ｆ 』 ｏｏ ｔ ｌ ／ Ｉ ： 色 氨
峻保 留时问 １ ０ ． １ ２ ａｉ ｒ ｎ ， 线 忭 范 围为 ２ ５ ～１ ０ ０ ０ ｌ ｍｍｌ ／ Ｉ ， 检测限为 ０ ． ２ ５ ｖ ｍｏ ｌ ／ Ｉ 。精密度、 【 巳 ＿ Ｉ 收 率 及 稳 定 性 等 均 符 合 生 物 样 品 定 量 分 析 方 法 验 证指 导 原 ！ Ｊ ！ ｌ 』 的要求 ， 并成功应 用于 ６ ２只 小 鼠血 清 犬 尿 氨 酸 和 色 氮 酸 浓 度 的 洲 定 。 结论 建 了一 种 简 、 快速 、 准 确 的 ＨＰ Ｉ ｃ分 析 疗 法 ， 采用标准加 入定量方式 ， 可 同时 测 定 小 鼠血 清 中 犬 尿 氨 酸雨 １ 色氨 酸 血 药 浓 度 并 成功 应 用 于 实 际生 物 样 本 的测 定 。
一种用高效液相色谱-荧光法同时测定色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸的方法[发明专利]
![一种用高效液相色谱-荧光法同时测定色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/4ab71ec42f60ddccdb38a0cb.png)
专利名称：一种用高效液相色谱-荧光法同时测定色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸的方法
专利类型：发明专利
发明人：唐爱国,项忠元,罗昔波,肖乐东,皮兰敢,周前选,任亚萍
申请号：CN201010300361.X
申请日：20100115
公开号：CN101776662A
公开日：
20100714
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种用高效液相色谱-荧光法同时测定色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸的方法。
步骤包括：a、采用Hypersil C18 250mm×4.6mm i.d，7μm色谱柱；b、每升流动相中含醋酸锌0.2mol、醋酸8.3mmol和2.5v/v％的乙腈；c、流速为1.5ml/min，进样量：20μl，柱温25℃；d、可调波长的设定为：0-11min激发光波长365nm，发射光波长为480nm；11-15.5min激发光波长344nm，发射光波长为404nm；15.5-20min激发光波长254nm，发射光波长为404nm条件下检测。
方法操作简单，分离快速，无需柱前柱后衍生，灵敏度高，结果真实准确，能同时测定色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸。
申请人：中南大学湘雅二医院
地址：410011 湖南省长沙市人民中路139号
国籍：CN
代理机构：长沙市融智专利事务所
代理人：颜勇
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液相色谱-质谱联用法同时测定大鼠血浆中色氨酸和犬尿氨酸
化学分析计量CHEMICAL ANALYSIS AND METERAGE第29卷，第4期2020年7月V ol. 29，No. 4Jul. 202067doi ：10.3969／j.issn.1008–6145.2020.04.015液相色谱–质谱联用法同时测定大鼠血浆中色氨酸和犬尿氨酸周资凯1，2，郑柳2，鲍益帆2，杨丽2，章志远2（1.南昌大学环境资源与化工学院，南昌 330031； 2.台州市台环环境检测科技有限公司，浙江台州 318020）摘要 建立液相色谱–质谱联用法同时测定大鼠血浆中色氨酸和犬尿氨酸的方法。
先利用活性碳吸附去除复杂基质，再以高氯酸、甲酸酸化沉淀，简单快速去除大量蛋白，然后以液相色谱–质谱联用法进行测定。
总分析时间小于4.00 min ，色氨酸和犬尿氨酸的质量浓度在0.500~1.000×104 μg ／L 范围内与色谱峰面积线性关系良好，检出限分别为0.147，0.148 μg ／L ，测定结果的相对标准偏差不大于4.7%（n =5），方样品加标回收率为99.2%～102.0%。
样品经–80℃冻融循环和室温放置120 h 内稳定性良好。
该方法优化了净化提纯前处理方式，与已报道的方法相比更加灵敏，绿色环保，可保持样本稳定，为需分析高通量生物基质样本的药物动力学相关工作提供一参考。
关键词 色氨酸；犬尿氨酸；代谢途径；液相色谱–质谱联用法；活性碳中图分类号：O657 文献标识码：A 文章编号：1008–6145(2020)04–0067–05Determination of tryptophan and kynurenine in rat plasma by liquid chromatography-mass spectrometryZHOU Zikai 1，2，ZHENG Liu 2，BAO Yifan 2，YANG Li 2，ZHANG Zhiyuan 2(1. School of resources environmental & chemical engineering, Nanchang University, Nanchang 330031, China ；2. Taizhou TaiHuan Environmental detection technology Co., Ltd., Taizhou 318020, China ）Abstract A method for simultaneous determination of tryptophan and kynurenine in rat plasma by liquid chromatography mass spectrometry was established. Firstly, the complex matrix was removed by activated carbon adsorption, then precipitated by perchloric acid and formic acid, then a large number of proteins were simply and rapidly removed, and then determined by liquid chromatography–mass spectrometry. The total analysis time was less than 4.00 min. The mass concentration of tryptophan and kynurenine was in the range of 0.500–1.000×104 μg ／L, which had a good linear relationship with the peak area, and the detection limits were 0.147, 0.148 μg ／L, respectively. The relative standard deviation was not more than 4.7% (n =5), the absolute recoveries were 99.2%–102.0%, The sample had good stability in –80℃ freeze–thaw cycle and room temperature for 120 h. Compared with the reported methods, this method is more sensitive, green and environmental friendly, and can keep the sample stable ，which provides a reference for the pharmacokinetics related to the analysis of a large number of biological matrix samples.Keywords tryptophan; kynurenine; metabolic pathway; liquid chromatography–mass spectrometry; activated charcoal通讯作者 周资凯，硕士，工程师，从事环境化学、分析化学、药物化学和纯化分离技术工作，E–mail:*****************收稿日期 2020–04–13引用格式 周资凯，郑柳，鲍益帆，等.液相色谱–质谱联用法同时测定大鼠血浆中色氨酸和犬尿氨酸［J ］.化学分析计量，2020，29(4): 67–71.ZHOU Z K ，ZHENG L ，BAO Y F, et al. Determination of tryptophan and kynurenine in rat plasma by liquid chromatography-mass spectrometry ［J ］. Chemical analysis and meterage ，2020，29(4): 67–71.人体中的色氨酸和犬尿氨酸代谢途径已被证实与许多疾病和失调有相关联性，如人类免疫缺陷病毒的感染、亨廷顿病、阿尔茨海默病和精神分裂症［1–2］。
高效液相色谱法测定细胞培养液中色氨酸和犬尿氨酸含量研究报告
高效液相色谱法测定细胞培养液中色氨酸和犬尿氨酸含量研究
报告
黄文娟;刁娟娟
【期刊名称】《新疆中医药》
【年(卷),期】2015(033)003
【摘要】目的建立色氨酸和犬尿氨酸含量测定的方法.方法采用高效液相色谱-紫1外法同时测定细胞培养液中的色氨酸和犬尿氨酸含量.结果及结论经测定,犬尿氨酸在2.01～31.52mol/L范围内线性关系良好(Y=18.175X-27.361 r=0.998 3),色氨酸在2.44～97.5 1mol/范围内线性关系良好(Y=13.923X-5.3782 r=0.999 5),方法学考察专属性、回收率、精密度、稳定性良好,可用于色氨酸和犬尿氨酸的测定.【总页数】3页(P39-41)
【作者】黄文娟;刁娟娟
【作者单位】新疆医科大学附属中医医院,新疆乌鲁木齐830000;新疆医科大学药学院,新疆乌鲁木齐830011
【正文语种】中文
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1.高效液相色谱法同时测定血清中的犬尿氨酸和色氨酸 [J], 王瑞;唐爱国
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3.LC-MS/MS法测定小鼠肿瘤中犬尿氨酸和色氨酸的含量 [J], 王湛博;刘健;程亚楠;段晓辉;杨勇;尤淋君
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5.瘤胃保护性色氨酸饲粮中添加亚叶酸钙对绵羊血浆色氨酸、犬尿氨酸和褪黑素含量的影响 [J], 王根;陈晖;赵芳;高超;赵国栋;李晓斌;马晨;杨开伦
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柱前衍生HPLC-UV法测定类风湿性关节炎大鼠尿样中16种氨基酸含量
柱前衍生HPLC-UV法测定类风湿性关节炎大鼠尿样中16种氨基酸含量马桂芝;陈雪珊;蒋思思;段霞【摘要】目的建立柱前衍生-高效液相色谱-紫外分光光度(柱前衍生-HPLC-UV)测定类风湿性关节炎大鼠尿样中16种氨基酸含量的方法.方法将大鼠尿样样品与异硫氰酸苯酯(PITC)衍生,衍生样品采用Agilent ZORBAX SB C18色谱柱进行分离,以乙腈-甲醇-水(6∶2∶2)和醋酸钠缓冲液为流动相进行梯度洗脱,柱温35℃,检测波长254 nm,流速1.0 mL/min,进样量10 μL.结果 16种氨基酸在线性范围内线性关系良好,相对回收率均在85％～115％,日内RSD均＜15％,检出限在3.1～45.3 ng/mL范围内.16种氨基酸在大鼠尿液中的含量在2.164～565.966 μg/mL范围内.结论本方法操作简便、灵敏度高,适合于类风湿性关节炎大鼠尿样中氨基酸的含量测定.【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2018(041)008【总页数】5页(P1001-1005)【关键词】类风湿性关节炎;大鼠尿样;氨基酸;柱前衍生;高效液相色谱法【作者】马桂芝;陈雪珊;蒋思思;段霞【作者单位】新疆医科大学药学院;新疆医科大学科学技术处,乌鲁木齐830011;新疆医科大学第一附属医院,乌鲁木齐830054;新疆维吾尔自治区第一济困医院药剂科,乌鲁木齐830017【正文语种】中文【中图分类】R914类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种原因未明且多发的全身自身免疫性疾病，其基本病理改变是滑膜慢性炎症及关节软骨和骨质的破坏，临床特征为关节结构的炎症和肿胀、慢性进行性病程，并可致多个关节完全强直，最终导致功能的丧失。
RA具有发病率、致残率高的特点，是严重危害人类健康的主要疾病之一[1]。
近年来，代谢组学在类风湿性关节炎疾病的诊断和小分子生物标记物研究应用方面日趋广泛[2-3]，根据代谢组学方法和动物疾病模型相结合的研究思路，重点采用相关检测技术考察类风湿性关节炎形成过程中的内源性小分子代谢物，有助于寻找可能的类风湿性关节炎标志物，诠释疾病发病可能的机制[4-5]。
基于HPLC的标准加入法同时测定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸
基于HPLC的标准加入法同时测定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸陈月;康宏艳;胡楠;杨青;郁韵秋【摘要】目的建立一种同时测定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸浓度的高效液相色谱(HPLC)法,用于评价小鼠给予IDO抑制剂后体内IDO活性.方法血清用6％高氯酸沉淀蛋白法处理,离心后取上清进样,采用标准加入法定量.选用ThermoHypersil GOLD色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,流动相为乙腈-醋酸钠(15mmol/L,冰醋酸调pH至4.0),流速1.1 mL/min,柱温30℃,犬尿氨酸和色氨酸的紫外检测波长分别为360 nm和280 nm.结果犬尿氨酸保留时间为6.10 min,线性范围为0.25～10 μ mol/L,检测限为0.09 μmol/L;色氨酸保留时间10.12 min,线性范围为25～1 000 μmol/L,检测限为0.25μmol/L.精密度、回收率及稳定性等均符合生物样品定量分析方法验证指导原则的要求,并成功应用于62只小鼠血清犬尿氨酸和色氨酸浓度的测定.结论建立了一种简单、快速、准确的HPLC分析方法,采用标准加入定量方式,可同时测定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸血药浓度,并成功应用于实际生物样本的测定.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2016(043)006【总页数】6页(P704-709)【关键词】犬尿氨酸;色氨酸;HPLC;血清;标准加入法;小鼠【作者】陈月;康宏艳;胡楠;杨青;郁韵秋【作者单位】复旦大学药学院药物分析教研室上海201203;复旦大学药学院药物分析教研室上海201203;复旦大学生命科学学院生物化学与分子生物学系上海200438;复旦大学生命科学学院生物化学与分子生物学系上海200438;复旦大学药学院药物分析教研室上海201203【正文语种】中文【中图分类】R917色氨酸(tryptophan,Trp)是哺乳类动物合成必需的氨基酸之一,也是构成蛋白质的重要成分,还可以在肝、肾等组织中代谢成为生物活性分子。
前处理方法对大鼠血浆中犬尿氨酸含量的测定
前处理方法对大鼠血浆中犬尿氨酸含量的测定汤俊梅;张青【摘要】分别采用三氯乙酸和甲醇两种前处理方法处理大鼠血浆样品,比较测定结果发现,用三氯乙酸处理后的血浆样品中犬尿氨酸的含量高于甲醇处理的血浆样品,由此推断三氯乙酸能够促进色氨酸转化成犬尿氨酸,提高犬尿氨酸的含量.同时,在测定过程中标准曲线需要配制在缓冲盐中,为避免基质效应的产生,需要将待测样品用缓冲盐稀释至少10倍.【期刊名称】《安徽化工》【年(卷),期】2018(044)005【总页数】3页(P95-97)【关键词】犬尿氨酸;前处理;三氯乙酸;甲醇【作者】汤俊梅;张青【作者单位】苏州健雄职业技术学院医药科技学院,江苏太仓215411;苏州健雄职业技术学院医药科技学院,江苏太仓215411【正文语种】中文【中图分类】R446.1犬尿氨酸（kynurenine，Kyn）是色氨酸（tryptophan，Trp）的重要代谢产物之一。
哺乳动物摄入体内的Trp绝大多数经犬尿酸原途径代谢，即Trp在色氨酸-2，3-双加氧酶（L-tryptophan-2，3-dioxygenase，TDO）或吲哚胺-2，3- 双加氧酶（indoleamine-2，3-dioxygenase，IDO）的作用下生成甲酰犬尿氨酸，后者迅速在犬尿氨酸甲酰胺酶的作用下生成Kyn[1]。
研究表明，Kyn与神经精神疾病、肾脏疾病、类风湿性关节炎、糖尿病等多种疾病的发生、发展有关，因此，定量测定机体中Kyn含量对相关疾病的诊断治疗具有非常重要的价值。
文献报道，目前国内外研究主要采用高效液相色谱法（HPLC）、液质联用（LC-MS或LC-MS/MS）等测定Kyn，如陈凤英等[2]采用高效液相色谱紫外检测法（HPLC-UV）测定Kyn；罗昔波等[3]用醋酸锌衍生Kyn后，采用高效液相色谱荧光检测法（HPLC-FLD）进行测定；徐开成等[4]采用液相-二级质谱联用（LC-MS/MS）同时测定Trp和Kyn的含量。
高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液中的酪氨酸和色氨酸含量
高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液中的酪氨酸和色氨酸含量【摘要】本文采用高校液相测定了复方氨基酸注射液中酪氨酸和色氨酸的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），甲醇-乙腈-0.1%醋酸钠水溶液（3：5：92）为流动相，检测波长为280nm；色氨酸在50～150μg·mL-1范围内呈良好的线性关系；酪氨酸在100～900μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
色氨酸和酪氨酸的平均回收率分别为99.5%、99.5%，RSD为0.63%（n=6）、0.56%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于复方氨基酸注射液中色氨酸和酪氨酸的含量测定。
【关键词】复方氨基酸注射液；色氨酸；酪氨酸复方氨基酸注射液是一种透明、无色或微黄色的澄明液体，可提供完全、平衡的18种必需和非必需氨基酸，改善氮平衡。
复方氨基酸注射液具有促进人体蛋白质代谢正常，纠正负氮平衡，补充蛋白质，加快伤口愈合的作用。
复方氨基酸注射液用于大面积烧伤、创伤及严重感染等应激状态下肌肉分解代谢亢进、消化系统功能障碍、营养恶化及免疫功能下降的病人的营养支持。
复方氨基酸注射液含有L-脯氨酸（C5H9NO2）、L-组氨酸（C6H9N3O2）、L-色氨酸（C11H12N2O2）、L-丝氨酸（C3H7NO3）、L-丙氨酸（C3H7NO2）、L-精氨酸（C6H14N4O2）、L-缬氨酸等。
本文采用高校液相测定了复方氨基酸注射液中酪氨酸和色氨酸的含量。
1.仪器与试药WP-UP-Ⅱ-30分析型实验室专用超纯水机（四川沃特尔水处理设备有限公司）；FL2200-2高效液相色谱仪（浙江福立分析仪器有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（武汉恒信世纪科技有限公司）；B8510E-DTH超声波清洗机（必能信超声（上海）有限公司）；320 XT 电子分析天平（上海精科天美贸易有限公司）；U-1901 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。
高效液相色谱-串联质谱法同时测定人体尿液中的酪氨酸和色氨酸
高效液相色谱-串联质谱法同时测定人体尿液中的酪氨酸和色氨酸支小平;崔盼盼;柳英霞【摘要】建立了高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS／MS）同时测定人体尿液中游离酪氨酸和色氨酸分析新方法。
采用乙腈－0．1％甲酸溶液（10：90，V：V）为流动相，流速为0．3 mL·min－1。
在全扫描模式下，将m／z为182．2、205．2的离子分别确定为酪氨酸和色氨酸的母离子，m／z136．1与188．0分别为定量子离子。
在质谱的多反应监测正离子模式下进行分析，酪氨酸和色氨酸的检测限分别为0．10和0．25 ng·mL－1。
在已优化的色谱和质谱条件下，待测样品经过简单的离心、过滤后即可直接进样检测。
在3个不同添加水平的回收实验中，酪氨酸和色氨酸的平均回收率为74．0％～124．0％，RSD值小于7．97％，表明该方法可满足实际样品检测要求。
该方法操作简单、快速、灵敏度高，可用于人体尿液中游离酪氨酸和色氨酸的同时测定。
%A new method for the simultaneous determination of free tyrosine and tryptophan in human urine samples by HPLC-MS/MS was developed.The chromatographic separation was achieved on an Agilent XDB-C18 column(4.6×50mm,1.8μm),the column temperature was 25 ℃,the mobile phase wasCH3CN-0.1%HCOOH(10:90,v/v),the flow rate was 0.3 mL·min-1 .In the full scan mode,the m/z 182.2 and m/z 205.2 were identified as the precursor ions of tyrosine and tryptophan,the m/z 136.1 and m/z 188 were quantitative product ion,respectively.The analysis was realized by multiple reaction-monitoring modes.Under optimal conditions,the linear ranges of tyrosine and tryptophan were 0.001-2.00μg · mL-1 ,and the limits ofdetection were 0.10 and 0.25 ng·mL-1 ,respectively.The average recoveries for tyrosine and tryptophan(spiked at three different levels)ranged from 74.0 to 124.0%,the RSD was below 7.97%.The method is simple,rapid and sensitive,and suitable for the simultaneous determination of free tyrosine and tryptophan in human urine.【期刊名称】《南昌大学学报（理科版）》【年(卷),期】2016(040)004【总页数】5页(P341-345)【关键词】高效液相色谱-串联质谱;人体尿液;酪氨酸;色氨酸【作者】支小平;崔盼盼;柳英霞【作者单位】南昌师范高等专科学校，江西南昌330103;南昌大学分析测试中心，江西南昌 330047;南昌大学分析测试中心，江西南昌 330047【正文语种】中文【中图分类】O657氨基酸不但是构建生物体的基本物质，而且在生物机体的生命活动中扮演着重要角色，它是生物化学、蛋白质组学、临床医学等领域的重要研究内容[1-2]。
高效液相色谱法同时测定血清中的犬尿氨酸和色氨酸
高效液相色谱法同时测定血清中的犬尿氨酸和色氨酸王瑞;唐爱国【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2006(24)2【摘要】建立了一种能同时检测血清中的犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)和色氨酸(tryptophan,Trp)的高效液相色谱-紫外检测法.采用的色谱柱为Symmetry Shield RP-C18柱(150 mm×3.9 mm i.d.,5 μm),流动相为15 mmol/L乙酸钠-乙酸溶液(含2.7%乙腈,pH 3.6),流速为1.0 mL/min,紫外检测波长为225 nm.血清标本经5.0% (体积分数)高氯酸溶液去除蛋白质后取上清液直接进样分析测定.研究结果表明,Kyn保留时间为3.5 min,线性范围为0.098～49 μmol/L,最低检出浓度为0.02 μmol/L,回收率为90.82% ～93.45% ;Trp保留时间为8.1 min,线性范围为4.9～490 μmol/L,最低检出浓度为0.20 μmol/L,回收率为95.51% ～98.67% .Kyn和Trp日内、日间测定的相对标准偏差均小于4% ,苯丙氨酸、酪氨酸、5-羟色胺和犬尿喹啉酸等物质对该法均无干扰.该方法简便、快速、稳定、可行,可应用于临床和科研工作.【总页数】4页(P140-143)【作者】王瑞;唐爱国【作者单位】中南大学湘雅二医院检验科,湖南,长沙,410011;中南大学湘雅二医院检验科,湖南,长沙,410011【正文语种】中文【中图分类】O658【相关文献】1.高效液相色谱法测定细胞培养液中色氨酸和犬尿氨酸含量研究报告 [J], 黄文娟;刁娟娟2.高效液相色谱法同时测定血清色氨酸和犬尿氨酸浓度的方法建立及应用 [J], 张晓清;王猛;丁敏3.帕金森病患者血清中犬尿氨酸、犬尿喹啉酸及色氨酸的测定及临床意义 [J], 唐亚梅;张付峰;刘勇;常丹丹;任亚萍4.基于HPLC的标准加入法同时测定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸 [J], 陈月;康宏艳;胡楠;杨青;郁韵秋5.HPLC同时测定关节炎大鼠血清色氨酸和犬尿氨酸 [J], 韩萍; 杨雪枝; 赵英杰; 张冰洁; 李丝雨; 张斌斌; 常艳; 魏伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
在线衍生—高效液相色谱法同时测定血浆色氨酸及其代谢物
在线衍生—高效液相色谱法同时测定血浆色氨酸及其代谢物目的：1.建立一种在线衍生高效液相色谱紫外-荧光法同时测定血浆中色氨酸（tryptophan，Trp），犬尿氨酸（kynurenine，Kyn），5-羟吲哚乙酸(5-hydroxyindole acetic acid，5-Hiaa)和犬尿喹啉酸（kynurenic acid，Kyna)的浓度。
2.用所建立的方法测定正常孕妇，糖尿病患者，肝硬化患者和健康对照组血浆中Trp，Kyn，5-Hiaa和Kyna的含量，从而更全面地了解人体内不同生理和病理状态下Trp代谢情况。
方法：1.采用Hypersil C18柱（250mm×4.0mm；5μm）分离，以3-硝基酪氨酸（3-N-Tyr）为内标（IS）。
流动相为250mmol／L醋酸锌溶液（pH5.5）-乙腈（95:5，v／v）；流速0.8ml/min；柱温30℃；进样量：50μL；紫外检测波长程序：0.00~13.00min，360nm；13.01~17.00min，302nm。
荧光检测波长程序：0.00~10.00min，激发光波长（Ex）和发射光波长（Em）分别为278nm和343nm；10.01~14.00min，Ex和Em分别为244nm和400nm；14.01~17.00min，Ex和Em分别为302nm和400nm；分析时间18min。
2.利用该方法测定糖尿病患者（n=101），正常孕妇（n=70），肝硬化患者（n=68）和健康对照组血浆（n=54）中Trp，Kyn，5-Hiaa和Kyna的含量。
结果：1.5-Hiaa，Kyn，3-N-Tyr，Kyna和Trp保留时间分别为6.7，9.0，11.4，13.5，16.1min。
5-Hiaa，Kyn，Kyna和Trp线性范围分别为：3.27~104.60nmol ／L，0.32~15.36μmol／L，14.0~464.8nmol／L和2.5~320.0μmol／L，最低检测限分别为：1.22nmol／L，0.048μmol／L，1.29nmol／L和0.54μmol／L。
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过建立 AA 模型，检测正常和模型大鼠血清中 Trp 和 Kyn 含量变化，目前主要采用 高 效 液 相 色 谱 法 （ high performance liquid chromatography，HPLC） 检 测 Trp 和 Kyn 的含量［6 － 7］，在制备标准曲线等时对 使用的血清进行了透析，此法可在同时测定 Trp 和 Kyn 的条件下，减少干扰因素。
安徽医科大学学报 Acta Universitatis Medicinalis Anhui 2019 Aug； 54（ 8）
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网络出版时间： 2019 － 7 － 15 18： 07 网络出版地址： http： / / kns． cnki． net / kcms / detail /34． 1065． Ｒ． 20190715． 0922． 030． html
1 材料与方法
1． 1 样本 动物为健康雄性 SD 大鼠 20 只，合格 证号： ［SCXK（ 皖） 2017 － 001］，体质量（ 170 ± 20） g， 购自安徽医科大学实验动物中心。样本的收集 AA 大鼠成模后处死取血于 15 ml 离心管中，静置 2 h 后，2 000 r / min 离心 20 min，取上清液，并于 － 20 ℃ 保存。 1． 2 仪器 Agilent1200 高效液相色谱仪（ 美国安 捷伦公司） ； Sigma 3-30K 高速冷冻离心机 （ 上海纳 腾仪器有限公司） ； AA-200DS 电子分析天平（ 美国 Denver 仪 器 公 司） ； Amicon Uitra-0. 5 超 滤 离 心 机 （ 美国 Millipore 公司） 。 1． 3 试剂 L-Trp（ WXBC4097V） 、L-Kyn（ BCBT1074） 购自 德 国 SIGMA-ALOＲICH，纯 度 ≥ 98% ； 冰 醋 酸 （ 20170106 ） 、 醋 酸 钠 （ 20170320 ） 、 高 氯 酸 （ 20170204） 均为分析纯，购自中国医药集团化学试 剂有限公司。 1． 4 AA 大鼠模型的制备 将大鼠随机分为两组， 即对照组和模型组，每组 10 只。将 BCG 80 ℃ 水浴 灭活 1 h，与经过高压灭菌的石蜡充分研磨，制成 10 mg / ml 完 全 弗 氏 佐 剂 （ complete freund adjuvant， CFA） ，于 大 鼠 右 后 足 跖 皮 内 注 射 CFA 0. 1 ml 致 炎［8］，正常组用生理盐水同法注射。 1． 5 溶液的配制 1． 5． 1 储备液配制 精密称取 L-Trp 对照品 40. 90 mg，L-Kyn 对照品 2. 08 mg，用体积百分比为 2. 5% 的高氯 酸 溶 解，定 容 至 10 ml 容 量 瓶 中，得 浓 度 20 000 μmol / L、1 000 μmol / L 对照品储备液，4 ℃ 保 存，用时稀释。 1． 5． 2 流动相溶液配制 精密称取醋酸钠 4. 922 8
2019 － 01 － 24 接收 基金项目： 国家自然科学基金（ 编号： 81573443、81673444） ； 安徽省自
然科学杰出青年基金（ 编号： 170808J10 ） ； 2016 年高校优 秀青年人才支持计划重点项目 （ 编 号： gxyqZD2016043 ） ； 安徽医科大学第四批“青年拔尖人才支持计划” 作者单位： 安徽医科大学临床药理研究所，抗炎免疫药物教育部重点 实验 室，抗 炎 免 疫 药 物 安 徽 省 协 同 创 新 中 心，合 肥 230032 作者简介： 韩 萍，女，硕士研究生； 常 艳，女，副教授，硕士生导师，责任作者，E-mail： yychang@ ahmu． edu． cn； 魏 伟，男，教授，博士生导师，责任作者，E-mail： wwei@ ahmu． edu． cn
类风湿关节炎（ rheumatoid arthritis，ＲA） 是一种 复杂的自身免疫病，特征是慢性滑膜炎症和关节破 坏，发 病 机 制 尚 不 清 楚［1］。色 氨 酸 （ L-tryptophan， Trp） 是人体必需氨基酸，可以调节适应性免疫［2 － 3］， 多数 Trp 代谢是沿着犬尿氨酸（ L-kynurenine，Kyn） 途径代谢的，该途径产生 Kyn 及一系列代谢产物， 参与炎症免疫反应［4］。大鼠佐剂性关节炎（ adjuvant arthritis，AA） 模型在病理机制等方面与人的 ＲA 相 似，是研究 ＲA 较为理想的模型之一［5］。本实验通
◇技术与方法◇
HPLC 同时测定关节炎大鼠血清色氨酸和犬尿氨酸
韩 萍，效液相色谱法（ HPLC） ，检测佐剂性关节 炎（ AA） 大鼠血清中色氨酸（ Trp） 和犬尿氨酸（ Kyn） 。SD 大 鼠成模后取血清，用蛋白沉淀法处理，离心后取上清液进样。 考察该方法的专属性、标准曲线、精密度、回收率和稳定性等 能否用于 AA 大鼠 Trp 和 Kyn 含量测定。Trp 保留时间 9. 0 min，线性范围 25 ～ 1 000 μmol / L，检测限 0. 27 μmol / L； Kyn 保留时间 5. 6 min，线性范围 0. 5 ～ 10 μmol / L，检测限 0. 07 μmol / L； 平均回收率在 80% ～ 120% 范围之内； 日内、日间精 密度 ＲSD 均小于 15% ，符合生物样品定量分析方法要求，并 可应用于 AA 大鼠血清中 Trp 和 Kyn 测定。建立了一种灵 敏度高、快速的 HPLC 分析方法，适于测定 AA 大鼠血清中 Trp 和 Kyn 含量。 关键词 色氨酸； 犬尿氨酸； 高效液相色谱法； 血清； 大鼠； 佐 剂性关节炎 中图分类号 Ｒ 967 文献标志码 A 文章编号 1000 － 1492（ 2019） 08 － 1313 － 06 doi： 10． 19405 / j． cnki． issn1000 － 1492． 2019． 08． 030