生物化学实验

实验二、 、可溶性糖的薄层层析分离 与定量鉴定 五、实验注意事项
1、薄板制备过程中，一定要保证玻璃板干净、干 燥且无油渍
2、薄板制备过程中，加硼酸搅拌及研磨一定要快， 要研磨均匀，一般研磨到发出如脂肪光泽时，且 要有一定的流动性，立即涂匀为最好
3、铺好板后，要在水平台上自然晾干，用前于 110℃烘箱中活化一小时（时间计算从达110℃开 始），但活化时要在低温（60℃左右）时就将板 放进烘箱，防止因骤然升温导致硅胶板脱落。
实验二、 、可溶性糖的薄层层析分离 与定量鉴定 五、实验注意事项 4、在用毛细管点样时，毛细管应垂直于硅胶G板 的方向点样，而且毛细管接触G板的时间应尽量 短，点样斑点直径一般不宜超过3mm。
5、在确定点样位臵时，只需在板上轻轻一点， 决不能点得过深，且不能用油笔或钢笔点。样点 位臵一定要高于展层剂层面。
绪
1、
论—五
实验记录
实验记录与实验报告
实验前写好实验预习报告(钢笔和园珠笔)。 实验中应及时准确地记录所观察到的现象和测量 的数据。(直接填写到实验报告册的原始数据栏） 实验记录要注意有效数字，如吸光度值应为 “0.050”，而不能记成“0.05”。所有数据都应如 实记录，不得随意涂改。 实验中要详细记录实验条件，如使用的仪器型号、 编号、生产厂等；生物材料的来源、试剂的规格、 试剂的浓度等。
的乙醇提取出来，经除去杂质，即可获 得Байду номын сангаас纯的可溶性糖混合物。

实验二、 、可溶性糖的薄层层析分离 与定量鉴定 二、原理 2、薄层层析是层析法的一种，层析法是利用被 分离样品混合物中各组分的物理，化学差别，使 各组分以不同程度分布在两个“相”中，这两个 相通常使一个被固定在一定的支持物上的，称为 固定相；另一个是移动的，称为流动相； 当流动相流过固定相时，在移动过程中由于各组 分在两相中的分配情况不同，或吸附性质不同， 或电荷分布不同，或离子亲和力不同等，而以不 同速度前进，从而达到分离的目的。
实验二、 、可溶性糖的薄层层析分离 与定量鉴定
二、原理 5、 Rf计算公式： Rf( 值) = 溶质斑点中心到样点的距离 溶剂前沿到点样点的距离

实验二、 、可溶性糖的薄层层析分离 与定量鉴定 三、实验材料、仪器和试剂 1． 材料：苹果或其他植物材料 2． 仪器： （1）离心机及离心管 （2）天平 （3）研钵 （4） 量筒 25ml （5）移液管 10ml （6） 恒温水浴 （7）毛细管 （8） 层析缸 （9） 吹风机 （10） 玻璃板 ： 7×15cm （11）烘箱 （12） 喷雾器 （13） 烧杯 50ml,100ml 铅笔、尺子
实验一 激活剂和抑制剂对酶活力的影响
一、目的 了解激活剂和抑制剂对酶活力的影响，
掌握淀粉酶活性鉴定的方法。
实验一 激活剂和抑制剂对酶活力的影响
二、原理 酶的活性受某些物质的影响，有些物质能 增加酶的活性，称为激活剂；而另一些物 质则降低酶的活性，称为抑制剂。
Cl-是唾液淀粉酶的激活剂。而Cu+为抑制剂。 将淀粉与酶相混，作用一段时间后，淀粉 被水解，遇碘不显蓝色，酶活力强，需时 短，酶活力弱，需时长，故可用反应时间 表示酶活力的强弱。
绪
三、实验室规则
论
１、自觉遵守学习纪律，保持实验室肃静，不得 喧哗吵闹、迟到早退。 ２、爱护仪器，厉行节约。试剂、药品、蒸馏水 等应节约使用，不得浪费。如不慎损坏仪器，应 及时报告老师，说明原因；贵重、精密仪器，应 先熟悉使用方法，在老师的指导下，严格按操作 规程操作；发现故障，应立即报告老师，不得擅 自处理。仪器使用完毕后，一定要填写使用


实验二、 、可溶性糖的薄层层析分离 与定量鉴定 三、实验材料、仪器和试剂 3．试剂 （1） 无水酒精 （2）氯仿：冰醋酸：水，配比为30：35：5 （3）1％标准糖溶液（10mg/ml）：木糖、葡萄 糖、果糖、蔗糖等。 （4）苯胺－二苯胺－磷酸显色剂：2克二苯胺， 加2ml苯胺，10ml 85％磷酸，1ml浓HCl，100ml 丙酮，溶后摇匀。 （5）0.1M硼酸溶液
培养分析和解决问题能力以及严谨细致的科 学作风、创新能力等综合素质。
绪
论
二、通过生物化学实验应该做到
学习设计一个实验的基本思路，掌握各个实验的 基本原理，学会严密地组织自己的实验，合理地 安排实验步骤和时间。 训练实验的动手能力，学会熟练地使用各种生物 化学实验仪器。 学会准确翔实地记录实验现象和数据的技能，提 高实验报告的写作能力，能够整齐清洁地进行所 有的实验。 掌握生物化学的各种基本实验方法和实验技术， 尤其是各种电泳技术和层析枝术，为今后参加科 研工作打下坚实的基础。
实验二、 、可溶性糖的薄层层析分离 与定量鉴定 二、原理 4、糖为多羟基化合物，具有较强的极性，在硅胶 G薄板上展层时，糖与硅胶分子有一定的吸附力。 硅胶分子与糖的吸附能力大小取决于糖的分子量 和羟基数目，造成各种糖分子在展层过程中移动 的距离不同，从而将各种糖分离出来。 一般吸附力的大小为：三糖>双糖>己糖>戊糖。其 中各种糖移动的速率可用Rf值表示。通过与标准 糖的Rf值比较。即可鉴定出植物组织提取液中糖 的种类。
实验一 激活剂和抑制剂对酶活力的影响
四、实验器材
1、0.1%淀粉液:称取可溶性淀粉0.1克,先用少量水
加热调成糊状,再加热水稀释至100ml. 2、1%的氯化钠溶液:1gNaCl溶于100ml 蒸馏水 3、1%硫酸铜溶液:1gCuSo4溶于100ml 蒸馏水 4、稀碘液：于2%碘化钾溶液中加入碘至淡黄色。
实验二、 、可溶性糖的薄层层析分离 与定量鉴定 四、操作 3．板的制备：
3.1 玻璃板须表面平整、光滑、清洁。用洗涤液 浸泡，洗净，晾干，否则吸附剂容易剥落。
3.2 取硅胶G粉2克，加0.1M硼酸溶液4.5ml于研 钵中充分研磨成糊状时，倾倒在薄板上，然后用 手轻轻倾斜玻璃板，使糊状吸附剂在整块板上分 布均匀，表面平坦光滑。 3.3 将制好的薄板臵于水平台上自然晾干后，用 前于110℃烘箱中活化一小时使用。
实验一 激活剂和抑制剂对酶活力的影响
五、操作 取试管3支，按表1编号并加入试剂。加毕，摇匀， 同时置40℃ 水浴保温，每隔2min取液体1滴置白 瓷板上用碘液试之，哪支管液最先不呈现蓝色， 哪支管次之，说明原因。
试剂 管号 1
0.1%淀 粉液 /ml
1%的氯 化钠溶 液/ml
1%硫酸 铜溶液 /ml
四 、实验须知
绪
论
１、实验前应作好预习，认真阅读实验指导。明
确学习目标，能简述实验内容及主要的操作步骤。
２、实验过程中，应根据实验指导及老师的要求，
认真操作，细心观察，如实记录。严禁捏造实验
数据，提倡实事求是的科学态度，杜绝弄虚作假。 ３、实验结束后，将实验原始数据填写到实验报 告册中的原始数据栏，并当场交给老师批阅。回 去后要认真书写实验报告，及时交老师批阅。
杜绝一切抄袭和弄虚作假现象，一旦发现 后果自负。
绪
论—五
实验记录与实验报告
2、实验报告
实验预习报告包括如下内容： ①实验项目名称； ②详细实验目的、原理；③实验操作步骤； ④注
意事项。
实验报告包括如下内容：①实验项目名称；②简
写实验目的、原理；③实验结果； ④ 分析与讨
论；⑤注意事项等。
实验二、 、可溶性糖的薄层层析分离 与定量鉴定 四、操作
1.水果中可溶性糖提取液的制备
1.1 取洗净的苹果（或其他水果）削去果皮，称
8g果肉在研钵中研成匀浆后，倒在四层洗净的纱
布上。包起臵于漏斗，用干净玻璃棒将果汁压出。 1.2 取果汁2ml于离心管中，加无水乙醇6ml，充 分混匀后，在3000转／分下离心20分钟，上清夜 即为可溶性糖提取液。
记录。
绪
论
３、取用试剂时，应仔细辨明标签，以免取错。 取完试剂后，应及时将瓶盖盖好，放回原处，切 忌乱拿乱放。 ４、注意安全。对于有毒、腐蚀的试剂应避免其 直接接触人体及衣物；乙醚、丙酮等易燃试剂应 远离火源，以免发生意外。 ５、注意实验室卫生、整洁。废弃液体应倒入水 槽，实验用过的和棉花、废纸、沉淀废渣及其他 废弃物品等均应放入指定容器，不得随意乱扔。 实验结束后应将实验台整理好，并清扫、整理实 验室。关好水、电、门、窗，方可离开实验室。
实验二、可溶性糖的薄层层析分离 与定量鉴定
一、目的和要求
1. 了解并初步掌握吸附层析的原理。
2. 学习薄层层析的一般操作及定性与定量
鉴定的方法。
3. 学习提取植物材料中可溶性糖的一般方
法，并学会简易薄板的制作
实验二、可溶性糖的薄层层析分离 与定量鉴定
二、原理
1、植物组织中的可溶性糖可用一定浓度
浓度高一些。
实验三 离子交换柱层析分离氨基酸
一、目的 通过实验要求学会装柱、洗脱、收集等离
子交换层析技术
实验三 离子交换柱层析分离氨基酸
二、原理 树脂（惰性支持物）结合了阳离子或阴离子 后，可与阳离子或阴离子结合。改变溶液的 离子强度则这种离子结合又解离。
生物化学实验 （二）
绪
论
随着生物化学的发展和生物化学教学内容的不断
丰富，生物化学实验也在不断更新和提高。
本门课程在以往教学工作的基础上，结合生物化
学实验教学，力求使学生能够更加深刻地学习生
物化学课程。 本实验课实验项目覆盖了当今生物化学研究 中常用的技术和方法。
绪
一、实验目的
论
掌握蛋白质、酶、核酸、糖等重要物质的分 离、纯化和测定技术的原理及方法； 掌握生物化学的基本知识、基本理论及基本 实验技能；
实验二、 、可溶性糖的薄层层析分离 与定量鉴定
二、原理 3、薄层层析是一种快速而微量的层析方法， 它是将一种固定支持物均匀地涂在薄板上， 对物质进行层析的方法。
本实验只讨论吸附薄层层析，即所有支持 物是吸附剂（如硅胶粉），层析时，主要 是根据吸附剂对样品中各组分的吸附能力 不同，因此个组分的移动速度不同，从而 达到分离混合物的目的。
9、在用吹风机吹干时要注意用小风吹，或者将
吹风机离板较远点吹。
实验二、 、可溶性糖的薄层层析分离 与定量鉴定 五、实验注意事项
10、染色完成后，放臵于烘箱85℃烘时，若烘了
10min后有些点还是不显色，可以在记录已显色点
的颜色和距离后，继续烘，直至显色为止。
11、为了使实验现象明显，提取糖时，宜使糖的
6、点样时，要等前一次的样点干燥后，再点下 一次，一般每个样点点4次。
实验二、 、可溶性糖的薄层层析分离 与定量鉴定 五、实验注意事项 7、在进行展层前，要先在层析缸中加入一些层 析剂，使整个缸内充满层析剂，以使样品能在一 个稳定的环境中进行展层。 8、在展层好后，立即用尺量出溶剂前沿距离， 不要等到吹干后再量。



实验二、 、可溶性糖的薄层层析分离 与定量鉴定 四、操作 2.苹果提取液中可溶性糖的分离鉴定 2.1点样 取活化后的硅胶G板一块，距底边1.5厘 米水平线上确定4个点，相互间隔1厘米，其中3个 点，分别点上5％的木糖、葡萄糖、蔗糖标准溶液 数滴，另一点点上苹果提取液数滴，一般点4次。 2.2 展层 以氯仿：冰醋酸：水展层剂上行展层， 当展层前沿达距薄板顶端1.0厘米左右处，取出玻 板用吹风机吹干。 2.3 染色 以苯胺－二苯胺－磷酸显色剂喷雾，于 85℃烘箱中10分钟，各种糖即显示出不同色斑与 标准糖比较，观察各点的颜色。 2.4 计算 根据斑点颜色及Rf值即可初步鉴定出苹 果提取液中所存在的可溶性糖的种类。
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H2O/ml
1：30唾 液/ml
2.0
1.0
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1.0
2
2.0
2.0
1.0
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1.0
1.0
3
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1.0
实验一 激活剂和抑制剂对酶活力的影响
六、实验注意事项
1、实验过程中试剂取量一定要保证一致性， 同时一定要认真观察实验现象，不能漏过实 验颜色的变化点。
2、要正确找到反应终点，并记下相应反应时 间。 3、要在预热2min后加入唾液，并在加入唾液 后马上记时。