柱前衍生高效液相色谱法测定多糖类兽药中单糖组分的方法研究

柱前衍生化-高效液相色谱法分析木糖结晶母液的单糖组成

柱前衍生化-高效液相色谱法分析木糖结晶母液的单糖组成孟海波;高绍丰;张海燕;孟汉卿【摘要】The reversed - phase high performance liquid chromatographic ( HPLC) method of pre-column - derivatization with l-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (PMP) was developed to separate the traditional eight monosaccharides and detect the monosac-charide composition of crystallization solution of xylose. The results showed that crystallization solution of xylose consisted of mannose, rharanose, cellobiose, glucose, galactose, xylose, arabinose, fucose, and the dominant component monosaccharides were glucose, ga-lactose, xylose and arabinose. Peak height was used to quantify. The concentration of eight kinds of monosaccharide was liner with correspond peak area with correlation coefficients (r2) of 0.9897 -0.9994. The detection limit was 0.002 1 -0.003 1 mg/mL. The recovery was 98.4% - 101.0% , and relative standard deviation of detection results was 0.66% -0.21 % (n = 6). The HPLC method is simple, rapid, sensitive, convenient and can be applied to the quality control of crytallization solution of xylose.%采用1-苯基-甲基-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化-反相高效液相色谱(HPLC)法建立了8种常见单糖的分离模式,并用于木糖结晶母液单糖组成的定量分析.结果表明:木糖结晶母液至少由甘露糖、鼠李糖、纤维二糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖及岩藻糖8种单糖组成,其中以葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖为主.以峰高定量,8种单糖的浓度与相应的峰高呈良好的线性关系,相关系数r2在0.9897 -0.9994范围内,方法检出限为0.0021-0.0031 mg/mL,回收率为98.4% -101.0%,测定结果的相对标准偏差为0.66%-1.21%(n=6).该方法简单、快速、灵敏,可用于木糖结晶母液的质量控制.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2011(020)005【总页数】3页(P47-49)【关键词】木糖结晶母液;单糖组成;衍生化;高效液相色谱【作者】孟海波;高绍丰;张海燕;孟汉卿【作者单位】济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204【正文语种】中文木糖、阿拉伯糖作为一种良好的食品添加剂已被广泛应用于食品生产中。

柱前衍生化高效液相色谱法分析当归多糖的单糖组成

图 3 当归多糖经 TFA 水解的时间对各组成单糖的测定影响
F ig. 3 The e ffects of com ponent m onosacchar ides o f A ngelica polysaccha rides fo r different trifluoacetic ac id ( T FA ) hydro lysis tim e 1. 葡萄糖醛酸 ( glu cu ron ic acid) ; 2. 甘露糖 ( m annose) ; 3. 鼠李糖 ( rhamn ose); 4. 半乳糖醛酸 ( ga laduron ic acid ) ; 5. 半乳糖 ( galactose); 6. 葡萄糖 ( g lucose) ; 7. 阿拉伯糖 ( arabonose) 。
3 结果与讨论
3. 1 单糖对照品 PM P衍生物的 HPLC 分离为实现当归多糖各组成单糖的高效分离, 本实验对当归多糖可能包含的 G lc、A ra、M an、G al、Rha、
Xyl、G lcUA、GalUA 及内标 Fuc等 9种标准单糖 PMP 衍生物的高效液相色谱分离条件进行了优化。结果表明, 磷酸缓冲液 ( KH2 PO4-N aOH ) 的 pH 6. 9, 时间梯度为 0→ 10→ 30 m in 和相应浓度梯度为 0→ 8% → 20% 溶剂 B的梯度洗脱模式是分离此 9种单糖衍生物的较理想色谱分离条件。
1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 ( PM P) 柱前衍生化 H PLC 测定单糖含量的方法经过了不断地发展和完善 [ 3~ 7] , 并成功地用于毛细管电泳分析。 PMP 是还原性糖的最好衍生化试剂之一, 如 PM P 衍生物不易裂解, 分析时不产生异构峰, 且在 250 nm 处有强烈的紫外吸收。本研究采用 PMP 衍生化方法, 用常规的紫外检测器和 C18烷基键合柱, 建立适于当归多糖单糖组成测定的 HPLC 新方法, 达到灵敏、快速、准确、方便和可在线大批量分析的目标。

柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成

柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成马定远　陈　君　李　萍3胡卓逸(中国药科大学生药药用植物教研室,南京210038)(中国药科大学生化研究室,南京210009)摘　要　报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。

采用反向高效液相色谱250nm 紫外检测和使用梯度洗脱,6种还原单糖的12苯基232甲基252吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。

对单糖组成的定量测定进行了方法学考察,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。

关键词　单糖,多糖,衍生化,高效液相色谱　2001207204收稿;2002201209接受1　引言单糖的组成分析是糖分析中的一项重要内容。

已有的糖组成分析方法以气相色谱法和高效液相色谱法为主。

由于单糖分子的多样性,关于糖的分析方法仍在不断发展。

12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP )衍生化方法自运用以来,得到不断完善1～3。

Strydom 运用此法对中性、酸性和碱性醛糖进行了分析,可以使15种单糖得到很好的分离2。

本文首先建立了6种常见单糖(包括一种酸性糖)的分离模式,通过内标法对3种中性单糖的定量进行了方法学考察,并应用所建立的方法对多糖中的单糖进行了组成分析,为此法的更好运用提供了依据。

2　实验部分2.1　仪器与试剂HP1100型高效液相色谱系统,包括G 1312A 二元泵,G 1315A DAD 检测器,HP ChemStation 色谱工作站(Hewlett 2Packard )。

衍生化试剂12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP ,上海化学试剂采购供应站试剂厂),甲醇重结晶两次。

色谱用乙睛(T edia )、三氟乙酸(CP 级,上海化学试剂公司)。

单糖对照品:葡萄糖(G lc ,上海化学试剂公司)、甘露糖(Man ,Sigma 公司)、半乳糖(G al ,Sigma 公司)、鼠李糖(Rham 公司)、葡萄糖醛酸(G lcUA )和木糖(Xyl )(上海化学试剂二厂产品)。

微波辅助提取_柱前衍生高效液相色谱法分析板蓝根多糖的单糖组成

收稿日期：2011-06-21；修订日期：2011-10-10作者简介：周威（1982-），男（汉族），湖北鄂州人，现为复旦大学药学院博士研究生，主要从事药物质量分析和药物代谢动力学研究工作．*通讯作者简介：段更利（1955-），男（汉族），上海人，现任复旦大学药学院教授，博士研究生导师，硕士学位，主要从事新药质量标准研究和体内方法学研究工作．微波辅助提取-柱前衍生高效液相色谱法分析板蓝根多糖的单糖组成周威1，张晓燕1，2，段更利1*（1．复旦大学药学院，上海201203；2．武汉大学基础医学院，湖北武汉430071）摘要：目的建立了一种微波辅助提取柱前衍生高效液相色谱法测定板蓝根多糖的单糖组成。

方法采用了微波辅助提取，PMP 柱前衍生单糖，Dikma －C 18色谱柱，流动相为乙腈－磷酸盐缓冲液，检测波长为250nm 。

结果L －鼠李糖，D －葡萄糖和D －半乳糖在0．156 62．5μg /ml 浓度范围内线性关系良好（r ＞0．9995），板蓝根多糖主要由D －葡萄糖、L －鼠李糖和D －半乳糖组成。

结论该方法简便、快速、准确，适用于分析测定板蓝根多糖的单糖组成。

关键词：板蓝根多糖；单糖；微波辅助提取；柱前衍生；高效液相色谱DOI 标识：doi ：10．3969/j．issn．1008-0805．2012．01．105中图分类号：R284．2文献标识码：B 文章编号：1008-0805（2012）01-0236-02板蓝根为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort 的干燥根，具有清热解毒、凉血利咽之功效［1］，是传统的抗病毒中药之一，临床上常用于抗病毒、抗菌。

据报道板蓝根多糖具有多种生物活性，是一种免疫增强剂［2 4］。

板蓝根多糖所含组分的相对分子质量差别较大，成分结构复杂等因素给板蓝根多糖的进一步开发利用造成困难。

水煎煮法作为板蓝根多糖的传统提取方法，表现出耗时、费力等不足。

柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成

柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成王媛媛;张晖;杨俊松;宗智慧【摘要】Objective To establish a precolumnderivatization procedure with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone ( PMP )-high performance liquid chromatography ( HPLC ) method for the determination of the monosaccharide composition of nine polysaccharides.Methods The nine polysaccharides were hydrolyzed, derivatized by PMP and analyzed by HPLC with the Inertsil ODS-SP C18 column(260mm ×4.6mm,5μm).The mobile phase was the 20%triethylamine-buffer solution withKH2PO4(pH=6.9),and the flow rate was 1.0 ml/min.The UV absorbance was detected at a wavelength of 254 nm,and the injection volume was 10μl with the column temperature 30℃.Results The method was successful in the separation of the mixture monosac-charide standards.The calibration line of each monosaccharide had a good relationship.And the precision, stability and reproducibility were also good.The nine polysaccharides were composed of different monosac-charide and the contents had some difference.Conclusion The method was accurate and stable for the deter-mination of the monosaccharide composition and content of nine polysaccharides.%目的：建立1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（ PMP）柱前衍生化-高效液相色谱法（ HPLC）对甘草多糖等9种多糖的单糖组成成分进行分析。

柱前衍生化高效液相色谱等度洗脱分析单糖的方法建立_徐瑾

柱前衍生化高效液相色谱等度洗脱分析单糖的方法建立徐瑾¹常州工程职业技术学院摘要以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为柱前衍生化试剂,建立了高效液相色谱等度洗脱分离分析5种单糖的方法。

采用简化的衍生化方法,在流动相:乙腈-醋酸盐缓冲液(0.1mol/L,p H=5.5,V/V=22B78)的色谱分离条件下,5种单糖衍生物可以达到基线分离,检测限分别为0.54~0.90ng,也对方法的线性范围、精密度、稳定性进行了系统的考察。

关键词单糖1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化高效液相色谱等度洗脱1.前言近年来,糖类物质在生物学领域的作用已越来越被重视,人们将研究的重点放在糖类物质的定量、定性以及结构分析上,并对此做了大量的研究。

因为糖的种类较多,且结构近似,所以无论对哪种糖进行分析,首先必须将分析的对象与其它糖分离开来。

另一方面糖类物质几乎没有光学活性,对分离后的物质进行直接光学检测比较困难,结合灵敏度、选择性等方面的问题,人们多采用通过化学标记将糖类物质转变为具有光学活性的物质,然后再进行分离分析的方法。

衍生方法与高效液相色谱(HPLC)结合使用不但能提高检测的灵敏度,而且可以改善分离特性。

迄今为止,文献报道的用于糖类物质衍生的紫外衍生试剂种类很多[1-3],它们都各有优缺点。

近年来出现的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)是一种具有强紫外吸收的衍生试剂,Honda等[4]发现该试剂可以与还原性的糖在温和条件下反应,无需酸催化,不会引起脱甲硅基的作用,产物无立体异构体,在紫外245nm处有强烈的吸收。

该方法自应用以来,已得到了不断的完善[3-6]。

马定远等[7]在前人的基础上简化了其衍生化方法,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立的方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。

鉴于该物质的这些优点,本文采用它对单糖进行柱前衍生,结合HPLC技术,建立了5种常见单糖的等度洗脱分离模式,通过外标法对这5种单糖进行了定量研究。

柱前衍生高效液相色谱法分析纸张中的单糖

７０ｏＣ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｉｔｖｉｔｙａｎｄａｃｃｕｒａｃｙ，ａｎｄｐｏｖｒｉｄｅｄａｐｒａｃｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｅｓｔｉｎｇｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎ
第４３卷第１７期
２０１５年９月
广
州
化
工
Ｖｏ１．４３Ｎｏ．１７
Ｓｅｐ．２０１５
ＧｕａｎｇｚｈｏｕＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙ
柱前衍生高效液相色谱法分析纸张中的单糖木
ｅｔｈｙｈｃａｒｂａｚｏｌｅ，ｓｅｐａｒａｔｅｄｂｙｒｅｖｅｒｓｅＴｈｅｒｍｏＣ１８ｃｏｌｕｍｎ，ｕｓｉｎｇａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅａｎｄａｍｍｏｎｉｕｍａｃｅｔａｔｅａｑｕｅｏｕｓｓｏｌｕｔｉｏｎａｓ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｎｅｗｍｅｔｈｏｄｏｆａｎａｌｙｓｉｓｏｆｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎｐａｐｅｒｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙＨＰＬＣｗｉｔｈｐｒｅ—ｃｏｌｕｍｎｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎｕｓｉｎｇ３— －ａｍｉｎｏ— －９— －ｅｔｈｙｌｃａｒｂａｚｏｌｅ．Ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎｐａｐｅｒｗｅｒｅｄｅｒｉｖａ Байду номын сангаас ｉｚｅｄｕｓｉｎｇ３— — ａｍｉｎｏ— －９— －

单糖的柱前衍生化高效液相色谱及胶束电动毛细管色谱分析的对比研究

在多种毛细管电泳模式中进行糖类物质的分 $ % & ［］ " * ! # + 动毛细管色谱（( 、毛细管凝胶电泳 & ) $） # ! # # ，如采用毛细管区带电泳（析［］ " ’ ）、胶束电
（$ , & . & ) $ 析。/ ( / 衍生与 $ & 结合不仅可以分析简单的单糖和寡糖，而且已经应用于某些糖缀合物中的寡糖成分的检测。在 ( 糖类物质经 / & ) $ 中， ( / 衍生后，其疏水性提高，通过与强疏水的十二烷基硫酸钠（胶束发生疏水作用，可以达到很好的分 0 1 0）
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单糖的柱前衍生化高效液相色谱及胶束电动毛细管色谱分析的对比研究
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柱前衍生化高效液相色谱法测定当归酸性多糖单糖组成的新方法

⑥
２０１５Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈ．Ｅｎｇｒｇ．
医药卫生
柱前衍生化高效液相色谱法测定当归酸性多糖单糖组成的新方法
李卫燕李萍曹蔚
（第四军医大学药学系天然药物学教研室，西安７１００３２）
摘要首次建立柱前衍生化高效液相色谱法分析当归酸性多糖中糖醛酸、氨基糖和中性糖的方法。Ｄ－甘露糖、Ｄ・葡萄糖胺、Ｌ．鼠李糖、Ｄ．半乳糖胺、Ｄ．葡萄糖醛酸、Ｄ．半乳糖醛酸、Ｄ．葡萄糖、Ｄ．半乳糖、Ｌ．阿拉伯糖和Ｄ．岩藻糖等ｌ０种单糖经柱前衍
乳糖醛酸（ＧａｌＵＡ）、Ｄ－葡萄糖（Ｇｌｕ）、Ｄ一半乳糖（Ｇａ１）、Ｌ．阿拉伯糖（Ａｍ）和Ｄ．岩藻糖（Ｆｕｃ）均购自Ｓｉｇｍａ公司；乙腈和甲醇（色谱纯）购自韩国德山药
品公司。
生化法处理后作为标准品。色谱条件：ＨｙｐｅｒｓｉｌＢＤＳＣ８色谱柱（４．６ｍｉｌｌｉ．ｄ．×２５０ｍｍ，５ｍ），流动相由乙酸铵水溶液（１００
ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ＝５．０）、乙腈和四氢呋喃以８１：１７：２的体积比组成，流动相流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长２５０ａｍ，柱温２５℃。实验
１．３当归酸性多糖的提取和纯化
将当归药材粉碎，称ｌｋｇ置于圆底烧瓶中，加入５倍量的９５％乙醇回流提取三次，每次２ｈ。用纱布过滤，药渣晾干。干燥的药渣重新置于圆底烧瓶中，加人８倍量的１．０ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ溶液，回流提取两次，每次１ｈ。提取完成后再次用纱布过滤，收集滤液，４０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，５５ｏＣ用旋转蒸

PMP柱前衍生化HPLC法测定地参多糖的单糖组成

PMP柱前衍生化HPLC法测定地参多糖的单糖组成一、本文概述Overview of this article本文旨在介绍一种采用PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）柱前衍生化结合高效液相色谱法（HPLC）测定地参多糖中单糖组成的方法。

地参作为一种具有丰富营养价值和药用价值的植物，其多糖成分具有显著的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。

因此，对地参多糖中单糖组成的准确分析对于揭示其生物活性机制、优化提取工艺以及质量控制具有重要意义。

This article aims to introduce a method for determining the monosaccharide composition in ginseng polysaccharides using PMP (1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone) pre column derivatization combined with high-performance liquid chromatography (HPLC). As a plant with rich nutritional and medicinal value, the polysaccharide components of ground ginseng have significant biological activities, such as antioxidant, anti-inflammatory, and anti-tumor effects. Therefore, accurate analysis of monosaccharide composition inginseng polysaccharides is of great significance for revealing their biological activity mechanisms, optimizing extraction processes, and quality control.PMP柱前衍生化是一种常用的单糖衍生化方法，通过与单糖上的羟基反应，将单糖转化为具有紫外吸收特性的衍生物，从而便于HPLC 检测。

柱前衍生化高效液相色谱法分析当归多糖的单糖组成

关键词当归多糖, 单糖组成, 衍生化, 高效液相色谱
1引言
当归多糖是当归的主要水溶性成分。药理学研究表明 [ 1, 2] , 当归多糖具有免疫调节、促进造血、抗氧化损伤等显著生物活性。而多糖的单糖组成测定是控制多糖质量标准和提供多糖基本信息的最重要环节。因单糖存在互变异构体、差向异构体、结构相似等特征, 而且往往同一待测样品, 如多糖、寡糖、糖肽、糖蛋白等, 可能含有许多类型的单糖。所以, 单糖分析有其自身的特点, 必须具有高效的分离技术, 方可实现系列单糖的有效分离。
经传统的干燥过程和未经干燥过程的 PM P 柱前衍生化 H PLC 图, 图中未发现有明显吸收峰改变。 ( 3) 对多糖的含量、组成等定量分析更有意义, 因此过程几乎无糖损失, 多糖水解液可直接进行 PM P 衍生化, 可在线大批量分析监测。
第 9期
杨兴斌等: 柱前衍生化高效液相色谱法分析当归多糖的单糖组成
色谱峰的各峰保留时间依次为 PMP、M an、Rha、G lcUA、GalUA、G lc、Gal、Xy l、A ra、Fuc、异亚丙基丙酮 ( M esity l ox ide) 杂质峰 [ 7] , 如图 4( a) 所示。其中, 内标 Fuc与其它单糖有很好的分离, 其作为内标是合适的。 PMP 衍生化试剂不干扰单糖衍生物的分析, 因为其出峰时间最快; 而 M esity l ox ide杂质峰也不影响分析结果, 因为其出峰很慢, 远远滞后于各单糖衍生物的紫外吸收峰 [ 7] 。 3. 2 多糖水解样品制备条件优化
采用 Ag ilent 1100 色谱系统。检测波长为 250 nm。柱温为室温; 流速 1. 0 mL /m in; 流动相: 溶剂 A, 15% ( V /V ) 乙腈 + 0. 05 m o l/L 磷酸缓冲液 ( KH 2PO4-NaOH, pH 6. 9) 。溶剂 B, 40% ( V /V ) 乙腈 + 0. 05 m o l/L 磷酸缓冲液 ( KH 2PO4-N aOH, pH 6. 9) ; 梯度模式: 时间梯度为: 0→ 10→ 30 m in, 相应浓度梯度为 0→ 8% → 20% 溶剂 B; 进样体积 20 LL。 2. 5 分析原理与方法 2. 5. 1 定量校正因子以 Fuc为内标, 测定 8种单糖的定量较正因子 ( f i/ s ) 。精密称取各标准单糖并配制成 2 mm o l/L 的母液, 用时稀释为 5个不同浓度的单糖溶液, 制备 PMP 衍生物, 并进行 H PLC 分析 ( 线性范围在 1~ 10 nm o l之间 ) 。 2. 5. 2 相关系数与回归方程以单糖的浓度 X (W i /W s ) 与峰面积 Y (A i /A s )作图, 得回归方程与相关系数。求出各单糖的斜率 b, 即定量较正因子 f。 f i/ s = ( W i /W s ) / ( A i /A s ) , A S, A i分别为 Fuc内标和标准单糖的 H PLC 峰面积。 2. 5. 3 摩尔/M (M 为单糖的分子量 ) , 所得的值之比为摩尔比, 即: R i/s = f i/ s ( A i /A s ) /M。

PMP柱前衍生高效液相色谱法-终版

糖组成分析（PMP-HPLC）混合单糖标准品的准备：称取各单糖标准品（L-Fuc；L-Rha；L-Ara；L-Xyl；D-Man；D-Gal；D-Glc；D-GalA；D-GlcA）溶于去离子水中，配成1mg/ml以待分析。

多糖的水解称取2-4mg多糖样品于鸡心瓶（10ml）中，加入1ml H2O预溶，再加入1ml 4M的TFA，橡皮膏封闭瓶口，置110℃烘箱中水解（中性多糖水解2h，酸性多糖水解4h）；冷却至室温后，加甲醇多次（4次）除去多余的TFA至无酸味；水解的多糖样品复溶于200μLH2O。

单糖的PMP衍生化取50μL多糖水解液或50μL混合单糖标准品溶液于2ml EP管中，分别与50μL的0.6mol/L 的NaOH溶液充分混合，加入100μL 0.5mol/L的PMP（0.2613g/3ml）甲醇溶液，塞紧塞子封紧后，漩涡振荡仪混匀；在70℃水浴中反应100min，取出冷却至室温。

加入100μL 0.3 mol/L 的HCl中和，再加700μl去离子水以及1ml氯仿萃取，漩涡振荡，静置1-2h。

吸取上层水相900μl，再加入900μl的氯仿萃取一次，静置1h，再去上层水相800μl，再加入800μl 的氯仿萃取一次，或用低速离心代替静置处理。

用带有0.22μm微孔滤膜的注射器过滤后，装入液相瓶中待HPLC进样分析。

HPLC分析糖组成Agilent 1260高效液相色谱系统色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18，250mm×4.6mm, 5μm；流动相：Buffer A: 15%乙腈+85%磷酸盐缓冲液Buffer B: 40%乙腈+60%磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液：0.05M 磷酸二氢钾缓冲液（pH 6.7）KH2PO4 13.6g及NaOH 1.8g溶液2L水中；乙腈（HPLC级）；时间（min）Buffer A Buffer B0 100 010 90 1030 80 2035 80 2045 80 2045.01 100 055 100 0柱温：20℃；紫外检测波长：254nm；流速：1ml/min；进样体积：20μl。

高效液相色谱法测定多糖

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的多糖分析方法，其测定多糖的步骤如下：
1. 样品制备：将待测多糖样品加入适量的水中，加热至溶解，过滤去除杂质，得到待测样品溶液。

2. 色谱柱选择：根据待测多糖的性质和分子量，选择合适的色谱柱，如凝胶过滤色谱柱、离子交换色谱柱、亲和色谱柱等。

3. 流动相选择：根据色谱柱的选择，选择合适的流动相，如纯水、缓冲液、有机溶剂等。

4. 样品进样：将待测样品溶液注入进样器中，通过自动进样器或手动进样器将样品进入色谱柱中。

5. 色谱分离：将进样器中的样品通过色谱柱进行分离，不同的多糖分子会在不同的时间点出现峰值。

6. 检测：通过紫外检测器或荧光检测器等检测器检测出不同峰值的多糖分子，得到各个多糖分子的峰面积或峰高度。

7. 数据分析：根据峰面积或峰高度计算出各个多糖分子的含量或相对含量，得到多糖的测定结果。

需要注意的是，不同的多糖分子可能需要不同的色谱柱和流动相，因此在测定多糖时需要根据具体情况进行选择。

同时，样品制备和进样过程中也需要注意避免污染和样品损失。

柱前衍生超高效液相色谱法分析太子参多糖中单糖的组成

第２６卷第２３期２０１６年１２月
中国现代医学杂志
ＣｈｉｎａＪｏｕｍａｌｏｆＭｏｄｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅ
Ｖ０１．２６Ｎｏ．２３
Ｄｅｃ．２０１６
ＤＯＩ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００５ — ８９８２．２０１６．２３．００８
ＰＬＣ）ｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｍｏｎｏｓａｃｃｈａｉｆｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎＰｓｅｕｄｏｓｔｅｌｌａｒｉａｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａｐｏｌｙｓａｃｅｈａｒｉｄｅｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅ
ｕｌｔｒａｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
Ｓｈｏｕ — — ｂｉｎＧｕｏ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＰｅｏｐｌｅＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＬｉａｎｙｕｎｇａｎｇ，
ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙｈｏｔｄｉｓｔｉｌｌｅｄｗａｔｅｒ，ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄｂｙａｌｃｏｈｏｌ，ａｎｄｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄｗｉｔｈ２ｍｏｌ／Ｌｓｕｌ —

柱前衍生化HPLC法分析沙参多糖中单糖组成

柱前衍⽣化HPLC法分析沙参多糖中单糖组成收稿⽇期:2008204225作者简介:任浩娜(19762),⼥(汉族),辽宁沈阳⼈,硕⼠研究⽣,E 2m a il renhaona76@163.co m;毕开顺(19562),男(汉族),河北唐⼭⼈,教授,主要从事中药分析和中药质量控制研究,T el .024*********。

⽂章编号:100622858(2009)0320206204柱前衍⽣化HPLC 法分析沙参多糖中单糖组成任浩娜,陈晓辉,毕开顺,张晖芬(沈阳药科⼤学药学院,辽宁沈阳110016)摘要:⽬的建⽴北沙参多糖中单糖的组成和含量的检测⽅法。

⽅法以三氟⼄酸⽔解沙参多糖,⽔解产物加⼊衍⽣化试剂12苯基232甲基252吡唑酮(P M P)⽣成衍⽣化产物,采⽤R P 2HPLC 法,⾊谱柱:C 18⾊谱柱(250mm @4.6mm,5L m ),流动相:体积分数为19%的⼄腈溶液2醋酸铵缓冲液(醋酸铵2冰醋酸,p H 5.5,体积⽐为100B 1),等度洗脱,流速:1.0mL #m i n -1,检测器:紫外检测器,检测波长:250n m,柱温:35e 。

结果沙参多糖由D 2⽢露糖、D 2⿏李糖、半乳糖醛酸、D 2葡萄糖、D 2半乳糖、L 2(+)2阿拉伯糖等8种单糖(有2种未鉴定出的单糖)组成。

D 2⽢露糖、D 2⿏李糖、半乳糖醛酸、D 2葡萄糖、D 2半乳糖、L 2(+)2阿拉伯糖的线性分别为4~80L m ol #L -1(r =0.9990)、12~240L mol #L -1(r =0.9990)、5.6~1.12@103L m ol #L -1(r =0.9994)、1.54@103~30.80@103L m ol #L -1(r =0.9990)、80.0~1.6@103L m ol #L -1(r =0.9990)、64.00~1.28@103L mol #L -1(r =0.9992);平均加样回收率分别为94.0%、88.5%、93.9%、95.9%、89.2%、90.8%。

柱前衍生HPLC法分析蔓菁多糖中单糖的组成

柱前衍生HPLC法分析蔓菁多糖中单糖的组成邝婷婷;王宇;王张;杨永东;张艺【期刊名称】《中成药》【年(卷),期】2014(036)010【摘要】目的建立柱前衍生HPLC法测定藏药蔓菁多糖中单糖的组成.方法以2 mol/L硫酸水解蔓菁多糖,水解产物加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮进行衍生化,采用反相高效液相色谱法,测定蔓菁多糖中单糖的衍生物.Kromasil C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5μm);乙腈为A流动相,0.1 mol/L磷酸盐(KH2 P04-NaOH,pH6.8)缓冲液为B流动相,梯度洗脱;检测波长250 nm.结果蔓菁多糖由半乳糖、D-甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖、D-无水葡萄糖、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸7种单糖组成,其摩尔比为1∶0.26:0.54∶1.06∶0.84:0.05∶4.17.结论柱前衍生HPLC法表明蔓菁多糖主要由半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖构成.【总页数】5页(P2121-2125)【作者】邝婷婷;王宇;王张;杨永东;张艺【作者单位】成都中医药大学民族医药学院,四川成都611137;成都中医药大学民族医药学院,四川成都611137;成都中医药大学民族医药学院,四川成都611137;成都中医药大学民族医药学院,四川成都611137;成都中医药大学民族医药学院,四川成都611137【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.柱前衍生化HPLC法分析枸杞多糖中单糖组成 [J], 符梦凡;赵一帆;阎卫东2.PMP柱前衍生化-HPLC法分析玛咖多糖的单糖组成 [J], 陈燕文;李玉娟;宋梦璐;崔耀天;许方雪;李佳;胡晶红;张永清3.柱前衍生HPLC法分析普洱茶多糖中单糖组成（英文） [J], 郭威;周斌星;罗玲;李扬;柴洁;杨超;马存强;4.柱前衍生HPLC法分析普洱茶多糖中单糖组成 [J], 郭威; 周斌星; 罗玲; 李扬; 柴洁; 杨超; 马存强5.柱前衍生化HPLC法分析马卡列丙多糖中单糖的组成 [J], 龚开妍; 智馨君; 朱恋; 谭紫玲; 刘良红; 蔡伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

柱前衍生-高效液相色谱法测定岩藻多糖的单糖及糖醛酸含量

柱前衍生-高效液相色谱法测定岩藻多糖的单糖及糖醛酸含量邢丽红;祝纯静;孙伟红;翟毓秀;李兆新;苗钧魁;冷凯良【摘要】建立了一种同时测定岩藻多糖7种单糖及2种糖醛酸含量的柱前衍生-高效液相色谱检测方法.岩藻多糖用三氟乙酸水解、1 -苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化,并采用配有紫外检测器的反相高效液相色谱仪在250 nm波长下进行测定,实现了7种单糖和2种糖醛酸的良好分离.7种单糖和2种糖醛酸在1～50μg/mL 范围内线性关系良好,相关系数r ＞0.998,回收率在86％～105％之间,相对标准偏差均＜10％.甘露糖和岩藻糖检出限分别为0.5μg/mL和2.0 μg/mL,其余单糖和糖醛酸检出限为1.0 μg/mL.该方法重现性好,能够快速地对多糖样品进行组成分析.【期刊名称】《中国渔业质量与标准》【年(卷),期】2011(001)001【总页数】6页(P64-69)【关键词】岩藻多糖;1 -苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮;柱前衍生化;高效液相色谱法【作者】邢丽红;祝纯静;孙伟红;翟毓秀;李兆新;苗钧魁;冷凯良【作者单位】中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071【正文语种】中文【中图分类】S912岩藻聚糖（Fucoidon）是一种独特的结合有硫酸基团的水溶性多糖，也称褐藻多糖硫酸酯、褐藻糖胶，主要存在于褐藻和一些海洋无脊椎动物中［1］。

岩藻多糖主要有二种类型:一类是F-岩藻多糖，它的线性主链是岩藻吡喃环以α-1，3-糖苷键连接而成，还夹杂着其他糖类，如木糖、半乳糖、葡萄糖醛酸等，该糖通常在4-O基发生硫酸化作用；另一类是U-岩藻多糖，其中20%的成分为葡萄糖醛酸。

柱前衍生化高效液相色谱法分析茯苓多糖的单糖组成

柱前衍生化高效液相色谱法分析茯苓多糖的单糖组成
吴建元;肖玉玲;孙曼春;王智勇;方世平
【期刊名称】《医药导报》
【年(卷),期】2009(28)9
【摘要】目的建立柱前衍生化高效液相色谱法分析茯苓多糖的单糖组成. 方法用稀碱浸提法提取茯苓多糖,用三氟乙酸(TFA)水解,通过1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生水解后的单糖,衍生物采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)250 nm紫外检测和梯度洗脱,研究茯苓多糖的单糖组成.结果 6种标准单糖的衍生物实现了良好的分离并具有良好的峰形.茯苓多糖是由葡萄糖组成的均一多糖,与文献报道的一致.结论该方法简便,结果准确,可用于茯苓多糖或者其他多糖的单糖组成分析.
【总页数】2页(P1213-1214)
【作者】吴建元;肖玉玲;孙曼春;王智勇;方世平
【作者单位】武汉大学中南医院;武汉大学;武汉大学中南医院;武汉大学中南医院;武汉大学中南医院
【正文语种】中文
【中图分类】R282.71;R284.1
【相关文献】
1.柱前衍生化高效液相色谱法分析银耳多糖的单糖组成 [J], 陈英红;姜翔之;罗浩铭;王颖;姜瑞芝
2.柱前衍生化-高效液相色谱法分析木糖结晶母液的单糖组成 [J], 孟海波;高绍丰;
张海燕;孟汉卿
3.柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成 [J], 王媛媛;张晖;杨俊松;宗智慧
4.柱前衍生化-高效液相色谱法分析缅甸刺梧桐胶多糖的单糖组成 [J], 付兴情;黄绿;吴增;王瑞丽;冯家泽;顾雯;赵荣华
5.柱前衍生化高效液相色谱法分析淫羊藿多糖中单糖的组成 [J], 饶金华;刘文英;江佳峪
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高效液相色谱法测两头尖多糖的单糖组成

高效液相色谱法测两头尖多糖的单糖组成
闫攀凤;樊东升
【期刊名称】《山西中医学院学报》
【年(卷),期】2017(018)001
【摘要】目的:测定两头尖多糖中单糖的组成.方法:两头尖多糖采用2 mol/L三氟
醋酸水解后通过1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生,用高效液相色谱法梯
度洗脱测定;检测波长250 nm.结果:两头尖多糖由D-葡萄糖、D-核糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、L-岩藻糖、D-甘露糖、D-半乳糖、D-木糖)组成.结论:高效液相色谱
法测两头尖多糖的单糖组成,操作方法简便,具有良好的重复性及稳定性.
【总页数】3页(P35-37)
【作者】闫攀凤;樊东升
【作者单位】山西中医学院,山西太原030024;山西省中西医结合医院,山西太原030006
【正文语种】中文
【中图分类】R285
【相关文献】
1.高效液相色谱法联用蒸发光散射测定薏苡仁多糖的单糖组成 [J], 茅宇娟; 王欢;
曾陵; 陈虹
2.高效液相色谱法测定党参多糖的单糖组成及含量 [J], 张璐;杨莹莹
3.高效液相色谱法分析新型细菌多糖中单糖和糖醛酸组成 [J], 王凤芹;张林;路则庆;汪以真
4.3-氨基-9-乙基咔唑柱前衍生-高效液相色谱法分析香菇多糖的单糖组成 [J], 张萍;陈燕;刘建波;尚永辉;刘静
5.柱前衍生化-高效液相色谱法分析缅甸刺梧桐胶多糖的单糖组成 [J], 付兴情;黄绿;吴增;王瑞丽;冯家泽;顾雯;赵荣华
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微波辅助提取-柱前衍生高效液相色谱法分析板蓝根多糖的单糖组成

微波辅助提取-柱前衍生高效液相色谱法分析板蓝根多糖的单
糖组成
周威;张晓燕;段更利
【期刊名称】《时珍国医国药》
【年(卷),期】2012(23)1
【摘要】目的建立了一种微波辅助提取柱前衍生高效液相色谱法测定板蓝根多糖的单糖组成。

方法采用了微波辅助提取,PMP柱前衍生单糖,Dikma-C18色谱柱,流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液,检测波长为250 nm。

结果 L-鼠李糖,D-葡萄糖和D-半乳糖在0.156～62.5μg/ml浓度范围内线性关系良好(r>0.999 5),板蓝根多糖主要由D-葡萄糖、L-鼠李糖和D-半乳糖组成。

结论该方法简便、快速、准确,适用于分析测定板蓝根多糖的单糖组成。

【总页数】2页(P236-237)
【关键词】板蓝根多糖;单糖;微波辅助提取;柱前衍生;高效液相色谱
【作者】周威;张晓燕;段更利
【作者单位】复旦大学药学院;武汉大学基础医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.柱前衍生化高效液相色谱法分析发菜胞外多糖的单糖组成 [J], 王贵春;陈雪峰;刘宁;王宁
2.柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成 [J], 王媛媛;张晖;杨俊松;宗智慧
3.柱前衍生超高效液相色谱法分析太子参多糖中单糖的组成 [J], 郭守斌
4.3-氨基-9-乙基咔唑柱前衍生-高效液相色谱法分析香菇多糖的单糖组成 [J], 张萍;陈燕;刘建波;尚永辉;刘静
5.柱前衍生化-高效液相色谱法分析缅甸刺梧桐胶多糖的单糖组成 [J], 付兴情;黄绿;吴增;王瑞丽;冯家泽;顾雯;赵荣华
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