复发罗红霉素溶出度方法

罗红霉素氨溴索溶出度方法
1 溶出介质选择
我们采用水、0.01mol/L的盐酸和乙酸盐缓冲液（pH5.5）作为溶出介质进行试验，以溶出量和溶出曲线为指标筛选出最佳溶出介质。

（1）水
溶出介质首选水，但罗红霉素为强疏水性物质，在水中几乎不溶，故水不适宜作为罗红霉素氨溴索胶囊溶出度检查的溶出介质。

（2）0.01mol/L的盐酸
取罗红霉素氨溴索胶囊（批号20080908、20080910、20080912）各6粒，照溶出度测定法（中国药典2005版二部附录Ⅹ C第二法），以0.01mol/L盐酸900ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，分别于10、15、30、45、60分钟时，取溶液适量，滤过（同时补相同温度和体积的介质），取续滤液作为供试品溶液；另取罗红霉素和盐酸氨溴索对照品各适量，精密称定，用溶出介质溶解并定量稀释稀释制成每1ml中约含罗红霉素0.16 mg（盐酸氨溴索0.032 mg）的溶液，作为对照品溶液。

照含量测定项下的色谱条件，精密量取上述两种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出每粒的溶出量。

计算各粒罗红霉素氨溴索胶囊在不同时间的累积溶出量。

结果见表1及图1。

（要体现出罗红霉素在盐酸溶液中不稳定，溶出无规律）
表1 罗红霉素氨溴索胶囊（批号20080908）累积溶出量（介质：0.01mol/L盐酸）
图1 罗红霉素氨溴索胶囊（批号20080908）溶出曲线（介质：0.01mol/L盐酸）
溶出度。

故0.01mol/L的盐酸不适宜作为罗红霉素氨溴索胶囊溶出度检查的溶出介质。

（3）乙酸盐缓冲液（pH5.5）
取罗红霉素氨溴索胶囊（批号20080908）6粒，照溶出度测定法（中国药典2005版二部附录Ⅹ C第二法），以醋酸盐缓冲液（pH5.5）（取0.04mol/L醋酸钠溶液，用冰醋酸调节pH值至5.5）900ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，分别于10、15、30、45、60分钟时，取溶液适量，滤过（同时补相同温度和体积的介质），取续滤液作为供试品溶液；另取罗红霉素和盐酸氨溴索对照品各适量，精密称定，用溶出介质溶解并定量稀释稀释制成每1ml中约含罗红霉素0.16 mg、盐酸氨溴索0.032mg 的溶液，作为对照品溶液。

照含量测定项下的色谱条件，精密量取上述两种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出每粒的溶出量。

计算各粒罗红霉素氨溴索胶囊在不同时间的累积溶出量。

结果见表2、图2。

表2 罗红霉素氨溴索胶囊（批号20080908）累积溶出量（介质：0.01mol/L盐酸）
图2 罗红霉素氨溴索胶囊（批号20080908）溶出曲线（介质：0.01mol/L盐酸）
试验结果表明：罗红霉素氨溴索胶囊（批号20080908）在乙酸盐缓冲液（pH5.5）介质中溶出良好。

以上三种溶出介质的考察试验表明：罗红霉素在0.01mol/L的盐酸溶出介质中不稳定，降解十分明显，无法准确测定其溶出度，故0.01mol/L的盐酸不适合作为本品的溶出介质；罗红霉素在水中不溶，故水不适宜作为罗红霉素氨溴索胶囊溶出度检查的溶出介质；由文献知，当缓冲盐PH增大时，罗红霉素的溶解度降低，所以缓冲盐溶液PH 定在5.5。

罗红霉素在乙酸盐缓冲液（pH5.5）中溶出良好，适合作为本品的溶出介质。

2 转速选择
以乙酸盐缓冲液（pH5.5）为溶出介质，我们对50转/分钟、75转/分钟、100转/分钟条件下罗红霉素氨溴索胶囊的溶出情况进行研究，以确定最佳转速。

（1）50转/分钟
取罗红霉素氨溴索胶囊（批号20080908）6粒，照溶出度测定法（中国药典2005版二部附录Ⅹ C第二法），以醋酸盐缓冲液（pH5.5）（取0.04mol/L醋酸钠溶液，用冰醋酸调节pH值至5.5）900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，于45分钟时，取溶液适量，滤过（同时补相同温度和体积的介质），取续滤液作为供试品溶液；另取罗红霉素和盐酸氨溴索对照品各适量，精密称定，用溶出介质溶解并定量稀释制成每1ml中约含罗红霉素0.16 mg、盐酸氨溴索0.032mg的溶液，作为对照品溶液。

照含量测定项下的色谱条件，精密量取上述两种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出每粒的溶出量。

结果见表3。

表3 罗红霉素氨溴索胶囊45min溶出量（50转/分钟）
（2）75转/分钟
取罗红霉素氨溴索胶囊（批号20080908）6粒，照溶出度测定法（中国药典2005版二部附录Ⅹ C第二法），以醋酸盐缓冲液（pH5.5）（取0.04mol/L醋酸钠溶液，用冰醋酸调节pH值至5.5）900ml为溶出介质，转速为每分钟75转，依法操作，于45分钟时，取溶液适量，滤过（同时补相同温度和体积的介质），取续滤液作为供试品溶液；另取罗红霉素和盐酸氨溴索对照品各适量，精密称定，用溶出介质溶解并定量稀释制成每1ml中约含罗红霉素0.16 mg、盐酸氨溴索0.032mg的溶液，作为对照品溶液。

照含量测定项下的色谱条件，精密量取上述两种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出每粒的溶出量。

结果见表4。

表4罗红霉素氨溴索胶囊45min溶出量（75转/分钟）
（3）100转/分钟
取罗红霉素氨溴索胶囊（批号20080908）6粒，照溶出度测定法（中国药典2005版二部附录Ⅹ C第二法），以醋酸盐缓冲液（pH5.5）（取0.04mol/L醋酸钠溶液，用冰醋酸调节pH值至5.5）900ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，于45分钟时，取溶液适量，滤过（同时补相同温度和体积的介质），取续滤液作为供试品溶液；另取罗红霉素对照品适量，精密称定，用溶出介质溶解并定量稀释稀释制成每1ml
中约含罗红霉素0.16 mg、盐酸氨溴索0.032mg的溶液，作为对照品溶液。

照含量测定项下的色谱条件，精密量取上述两种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出每粒的溶出量。

结果见表5。

表5 罗红霉素氨溴索胶囊45min溶出量（100转/分钟）
试验结果表明：以上3个转速的罗红霉素氨溴索胶囊45分钟溶出量相比较，100转/分钟的溶出量较完全，且相对标准偏差较小，故确定本品的溶出度测定转速为100转/分钟。

3 溶出度定量方法选择
参照本品的含量测定方法，结合胶囊溶出度测定的相关要求，我们对本品溶出度定量方法进行系统研究。

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.067mol/L磷酸二氢铵溶液(用三乙胺调节pH 值至6.5)-乙腈（65：35）为流动相；检测波长为210nm；罗红霉素与前相邻杂质峰的分离度不得小于1.0，与后相邻杂质峰的分离度不得小于2.0；理论板数按罗红霉素峰计算不低于2500。

取罗红霉素氨溴索胶囊（批号20080908）6粒，照溶出度测定法（中国药典2005版二部附录Ⅹ C第二法），以醋酸盐缓冲液（pH5.5）（取0.04mol/L醋酸钠溶液，用冰醋酸调节pH值至5.5）900ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，于45分钟时，取溶液适量，滤过（同时补相同温度和体积的介质），取续滤液作为供试品溶液；另取罗红霉素对照品适量，精密称定，用溶出介质溶解并定量稀释稀释制成每1ml 中约含0.16 mg的溶液，作为对照品溶液。

照含量测定项下的色谱条件，精密量取上述两种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出每粒的溶出量。

3.1 系统适用性试验
供试品溶液取本品20080908批样品内容物适量，精密称定，加流动相制成每1ml
中约含罗红霉素0.16mg的溶液，滤过。

由图可见，盐酸氨溴索峰保留时间约为12min，罗红霉素峰保留时间约为34min，理论板数以罗红霉素峰计算为4683，两主峰之间及两主峰与相邻杂质峰之间的分离度均符合规定。

空白辅料大约在4.5分钟之前出峰，对主峰及杂质峰无干扰，不影响本品有关物质检测。

因此规定保留时间小于4.5分钟的色谱峰不积分。

该方法的系统适用性试验见本品的罗红霉素含量测定方法学研究，结果表明主峰保留时间适宜、分离度好、理论塔板数高，该方法系统适用性良好。

3.2 空白溶剂干扰试验
本品的溶出介质为乙酸盐缓冲液（pH5.5），精密量取乙酸盐缓冲液（pH5.5）20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，见图。

试验结果表明：空白溶剂色谱图在罗红霉素对照品主峰位置无色谱峰，空白溶剂对溶出度测定无干扰。

3.3 空白辅料和囊壳干扰试验
按处方比例将空白辅料混合均匀装入胶囊，取1粒胶囊置900ml磷酸盐缓冲液中，超声使胶囊溶解，取滤液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取供试品溶液20μl 注入液相色谱仪，记录色谱图，见图。

试验结果表明：空白辅料和囊壳色谱图在罗红霉素对照品主峰位置无色谱峰，空白辅料和囊壳对溶出度测定无干扰。

3.4 线性范围
精密称取罗红霉素对照品16mg（盐酸氨溴索3.2mg），置50ml量瓶中，超声溶解，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。

精密量取贮备液0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置10ml量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

精密量取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果见表15、图9～15。

表15 罗红霉素线性试验结果
浓度（μg/ml）16 32 64 96 128 160 192 峰面积
线性方程：
以浓度（C）和峰面积（A）做线性回归，得A= ，r =0.9999。

表明，在测定浓度为（16～192μg/ml）（约相当于规定溶出限度的10 %～150%范围）的范围内具有良好的线性关系。

3.5 重复性试验
取线性试验项下浓度为20μg/ml的供试品溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果见表16、图16～21。

表16 罗红霉素氨溴索溶出度测定精密度试验结果
序号 1 2 3 4 5 6
峰面积
RSD（%）：
试验结果表明：罗红霉素氨溴索胶囊溶出度测定重复性良好。

3.6 回收率试验
我们按照主药罗红霉素完全溶出量的50%、80%和100% 设计试验测定本品溶出度定量方法的回收率。

供试品溶液配制：精密称取罗红霉素对照品10mg、16mg、20mg各3份，分别置100ml 量瓶中，再分别加入已按处方比例混合均匀的的空白辅料1.134g和囊壳1粒，加乙醇20 ml与磷酸盐缓冲液（pH11.0）60ml，超声溶解，再加磷酸盐缓冲液（pH11.0）稀释到刻度，摇匀。

精密量取5ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，再精密量取5ml，准确加入1ml磷酸盐缓冲液（pH11.0），摇匀，即得。

对照品溶液配制：精密称取罗红霉素对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加乙醇20ml与磷酸盐缓冲液（pH11.0）约60ml，超声处理使罗红霉素溶解，并加磷酸盐缓冲液（pH11.0）稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

精密量取上述各溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果见表17、图22～41。

表17 罗红霉素溶出回收率试验结果
浓度水平取样量（mg）测得量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）50%
80%
100%
试验结果表明：复方罗红霉素胶囊的溶出度测定回收率良好，准确度高。

3.7溶液稳定性试验
取罗红霉素氨溴索胶囊（批号20080908）6粒，照溶出度测定法（中国药典2005版二部附录Ⅹ C第二法），以醋酸盐缓冲液（pH5.5）（取0.04mol/L醋酸钠溶液，用冰醋酸调节pH值至5.5）900ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，于45分钟时，取溶液适量，滤过（同时补相同温度和体积的介质），取续滤液作为供试品溶液；分别在0、1、2、4、6、8、12小时，精密量取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果见表、图。

表罗红霉素氨溴索胶囊溶出度溶液稳定性试验结果
时间（h）0 1 2 4 6 8 12
峰面积
RSD(%)：
试验结果表明：罗红霉素氨溴索胶囊溶出度测定的供试品溶液室温放置12小时内稳定。

以上罗红霉素氨溴索胶囊溶出度定量方法的系统研究结果表明，该方法系统适用性好，在～μg/ml范围内呈良好的线性关系，专属性强，重复性好，准确度高；适合作为本品溶出度的定量方法。

4 溶出均一性和取样时间点的确定
取罗红霉素氨溴索胶囊（批号20080908，20080910，20080912）6粒，照溶出度测定法（中国药典2005版二部附录Ⅹ C第二法），以醋酸盐缓冲液（pH5.5）（取0.04mol/L 醋酸钠溶液，用冰醋酸调节pH值至5.5）900ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，分别于10、15、30、45、60分钟时，取溶液适量，滤过（同时补相同温度和体积的介质），取续滤液作为供试品溶液；另取罗红霉素和盐酸氨溴索对照品各适量，精密称定，用溶出介质溶解并定量稀释稀释制成每1ml中约含罗红霉素0.16 mg盐酸氨溴索0.03mg的溶液，作为对照品溶液。

照含量测定项下的色谱条件，精密量取上述两种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出每粒的溶出量。

计算各粒罗红霉素氨溴索胶囊在不同时间的累积溶出量。

以考察本品的溶出均一性。

结果见表～、图～。

表罗红霉素氨溴索胶囊（01批）溶出均一性试验结果
表罗红霉素氨溴索胶囊（02批）溶出均一性试验结果
表罗红霉素氨溴索胶囊（03批）溶出均一性试验结果
试验结果表明三批罗红霉素氨溴索样品的溶出均匀性良好。

根据溶出曲线，确定罗红霉素溶出度测定的取样时间点为45分钟。

5 溶出度测定
取罗红霉素氨溴索胶囊（批号20080908）6粒，照溶出度测定法（中国药典2005版二部附录Ⅹ C第二法），以醋酸盐缓冲液（pH5.5）（取0.04mol/L醋酸钠溶液，用冰醋酸调节pH值至5.5）900ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，于45分钟时，取溶液适量，滤过（同时补相同温度和体积的介质），取续滤液作为供试品溶液；另取罗红霉素对照品适量，精密称定，用溶出介质溶解并定量稀释稀释制成每1ml 中约含0.16 mg的溶液，作为对照品溶液。

照含量测定项下的色谱条件，精密量取上述两种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出每粒的溶出量。

限度为标示量的75％，应符合规定。

结果见表、图～。

化学药品注册分类第3.2类复方罗红霉素胶囊申报临床资料10
表罗红霉素氨溴索胶囊（三批样品）溶出试验结果
试验结果表明：三批中试样品45分钟的溶出度均大于75%，符合规定。

11。