山东某猪场猪繁殖与呼吸综合症病毒感染的分离与鉴定

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ＶｒｓＰＲＶ＇异株是其主要病原Ⅲ ｉ，ＲＳ）ｅ３￣以来。关于ＰＲＶ诊断、ＲＳ分公司合成。
离报道不断出现，国各地始终处于ＰＲＶ的威胁之中，全ＲＳ在灭
（）一ＴＧＣＣＡＡＴＡ３Ａ１ＡＧＣＡＧＣＧｒＡＣ一５Ｃ
取Ｒ —ＣＴＰＲ检测ＰＲＶ阳性的组织匀浆，００ｒｉ离心ＲＳ３０ｒｎ／ａ
山东省疑似发生ＰＲＲＳ某猪场发病仔猪的血清、肺脏、、１．病毒的分离脾．４２肾、淋巴结等组织。
１１毒株、胞、验动物．２．细试
称取病料组织怖脏、巴结）０ｇ淋１于组织匀浆机中，加人生置一Ｏ℃冻存备用。２
１．细胞培养．３２
．２２确的诊断。笔者在临床见到大量的疑似ＰＲＶ病例，ＲＳ从症状、剖１．组织样品的处理
０ｍ次的疑似ＰＲＶ感染进行了血清学、ＲＳ分子生物、细胞学的全面诊理盐水１０Ｌ研磨，待匀浆后转移至盐水瓶内反复冻融３，
１ｍｎ取上清经０２ｍ微孔滤膜进行过滤除菌，１Ｌ５ｉ，．２取接种ｍＰＲＶＶ一３２参考毒株、ｒ一４ＲＳＲ２３Ｍａ１５细胞由山东滨州博长成单层的Ｍａｃ１５ｃｒ一４细胞，７℃ Ｃ３Ｏ培养箱内吸附１ｈ后倒掉莱威生物技术中心提供，自购３５日龄ＰＲＲＳ非免疫猪２头。毒液，加入含２Ｌ细胞维持液，盲传直至出现典型的细胞病０ｍ
自２００６以来我国许多猪场猪的“ 高热病”被证实为猪繁殖ＣＲ２３），Ｖ一３２的核衣壳蛋白基因（因１ＯＦＰｒｉｅｅｒｄｃｖｄＲｓｉｔｒＳｎｒｍ了扩增片段为４２ｂｏｎｐｏｕｔｅｎｅｐａｙｙｄｏｅｃＲｉａｒｏ３ｐ的特异引物，引物均由上海生物工程有限
活苗、活疫苗广泛使用下，ＲＳＰＲＶ感染猪群依然很多，正确诊断、监测ＰＲＶ感染猪群仍具有十分重要的价值。ＲＳ系１１２，，国内报道混合感染的猪群尤其严重，３在临床上难以做出准
检变化上往往难以做出最合理的判断，因此本试验利用某猪场断，从而确诊猪繁殖与呼吸综合征对该猪场的危害。
一
５２一
围技一禽学蛄占
山东某猪场猪繁殖与呼吸综合症病毒感染日分离与鉴定ｇ
陈申秒，何福庆吴雪莉蔡培军贾红梅杨灵芝，，，，
ｌ山东滨州沃华生物工程有限公司，山东滨州２６０；山东５６６２．省滨州职业技术学院，山东滨州２６０）５６０
１１３其他试剂．．
变，收获细胞毒。ｄＴ、ＮｒｅＤ２０、ａＤＡ聚合酶和ＵＩ一０ＮＰＤＡＭａｋｒＬ００ＴｑＮＮＱ１柱１．分离株的ＲＴＰＲ鉴定．５２－Ｃ式动物基因组ＤＡ抽提试剂盒购自上海生物工程有限公司，Ｎ酸性酚一硫氰酸胍一氯仿法提取病毒ＲＡ，通过一步法Ｎ５Ｔｕｅ及Ｍ— ＬＸＲＢｆｒＭＶ酶和ＲＡ酶抑制剂购自大连宝生生物Ｒ — ＣＮＴＰＲ试剂盒进行ＰＲＶ分离株鉴定。核酸提取时设正常的ＲＳ工程有限公司，犊牛血清购自杭州四季青生物材料有限公司；高Ｍａ～１５细胞为阴性对照，ＲＳＲ２３参考毒株为阳性对ｒ４ｃＰＲＶＶ一３２
（２一ｃｃＣＡ．ＡＴＧＴ一ａ）ＴＧｃＴＡＩＧＡＡＧＧ３５ＴＩ１－２试验方法
．１发病猪抗体检测２ＰＲＶ造成的高死亡率和多种病原的混合感染有很大关１．ＲＳ
参照ＥＩＡ试剂盒操作（。ＬＳ略）
致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（ｓ２１９～１８）ＴＰＲ检Ｎｐ５４６０ — ＣＲ
测试剂盒由北京世纪元亨生产，进口ＰＲ — ＬＳＲＳＥＩＡ试剂盒由美
１材料和方法
１１试验材料．
１１病料来源．１．
以ＤＭ培养液为生长液，加８％胎牛血清（Ｃ）ＭＥＮＳ、１０Ｕ／青、０ｍＬ链霉素１０Ｉ维持液加２％ＮＳａｃ１５置Ｉ０Ｕ；Ｃ。Ｍ一４ｒ
于５％的Ｃ：Ｏ培养箱中３７℃培养至单层后传代培养。
摘要：试验利用Ｅｉ本ＬＳＡ检测、ＴＰＲ方法从某疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒ＰｒｎＲｅｒｄｃｖｄｓｉｔｒＳｎＰ —ＣｏｃｅｐｏｕｔｅｎＲｅｒｏｙｙ— ｉｉａｐａ
ｄｏｉｓｒｓ）染猪场分离到一株Ｐｒｍｅｒ。￣，ｖ感ＶｕＰＲＲＳ在ｍａ－４Ｖ，ｒ１５细胞盲传第３代可见典型细胞病变，细胞培养物接种断奶ｃ将
仔猪可引起典型的呼吸困难，烧等症状，而确诊该猪场Ｐ发从ＲＲＳＶ的感染。
关键词：Ｐ；抗体；Ｃ检测；胞病变ＰＲ细
中图分类号：８８￥２
文献标识码：Ａ
文章编号：０— ７９０２２０５－１１０６（１） — ０２３０２０