（整理）农药生物测定实验指导.

（整理）农药⽣物测定实验指导.
农药⽣物测定实验指导
（⾃编试⽤1.0）
主编：姜兴印
副主编：赵春青张卫光
制药⼯程专业⽤
⼭东农业⼤学植物保护学院
2008年9⽉
棉铃⾍⼈⼯饲料制备
⼀、实验⽬的
学习棉铃⾍⼈⼯饲料制备技术和⽅法。

本⽅法还适合⽟⽶螟等⼈⼯饲料的制备。

⼆、实验⽤品和仪器设备
仪器设备：天平、⾼压灭菌器、罐头瓶、电饭锅、筛⼦（40⽬）、量筒、搪瓷盘、温度计
实验物品：⼩麦粉、⽟⽶粉、黄⾖粉、啤酒酵母粉、琼脂、棉叶、V C、棉油、苯甲酸钠、⼭梨酸钾、兽⽤链霉素、⽔等
三、实验⽅法
1. 配⽅：
2. ⼩麦粉、⽟⽶粉、黄⾖粉、酵母粉和棉叶装⼊罐头瓶中，⾼压灭菌40min.（120℃）
3. ⽔+琼脂煮开冷却⾄70℃，加⼊Vc、防腐剂、棉油混匀，再加⼊混合好的其他成分，充分混匀。

4. 倒⼊搪瓷盘，加盖冷却后放⼊冰箱中备⽤。

四、质量检查
饲料冷却后观察颜⾊和固化成型情况。

五、实验报告
农药⽣物测定药剂配制
⼀、实验⽬的
学习⽣物测定药剂配制的实验操作技术和⽅法。

⼆、实验⽤品和仪器设备
电⼦天平、计算器、烧杯、移液管、吸⽿球、记号笔、容量瓶、量筒等。

实验原药：93%顺式氯氰菊酯，95%吡⾍啉
实验制剂：50%多菌灵WP，2.5%功夫EC(w/w)，33%施⽥补EC(w/v)
三、实验⽅法
1. 原药母液的配制与稀释
（1）⽤丙酮配制2％顺式氯氰菊酯母液50mL，然后稀释成200mg/L 50mL 丙酮液。

（2）⽤丙酮配制1％吡⾍啉母液50mL，然后稀释成125mg/L 50mL丙酮液（3）将顺式氯氰菊酯和吡⾍啉按照5：2的⽐例混合，配制1.5%混剂50mL 丙酮液。

2. 制剂的稀释
（1）50%多菌灵WP，稀释成200mg/L 100mL的⽔溶液（烧杯）。

（2）2.5%功夫EC，稀释成1000mg/L 100mL的⽔溶液（烧杯）。

（3）33%施⽥补EC，稀释成150mg/L 100mL的⽔溶液（烧杯）。

四、结果计算和处理
将以上每⼀种母液配制和稀释需要原药和制剂的量计算，并详细描述配制和稀释过程。

五、实验报告
撰写实验报告。

杀⾍剂毒⼒测定－微量点滴法
⼀、实验⽬的
学习微量点滴法测定杀⾍剂触杀毒⼒的实验操作技术和⽅法，学习和使⽤微量点滴仪。

⼆、实验⽤品和仪器设备
⽣化培养箱、电⼦天平、计算器、微量点滴仪、烧杯、移液管、养⾍盒、镊⼦、滤纸、记号笔、容量瓶等。

实验药剂：顺式氯氰菊酯，2.5、5.0，10，20，40mg/L
实验材料：⽟⽶螟5龄幼⾍
三、实验⽅法
1. 药剂配制与稀释
⽤丙酮配制1％顺式氯氰菊酯母液，然后稀释成系列浓度。

2. 试⾍选取与称重
选择个体⼤⼩⼀致的5龄幼⾍，每个处理浓度3次重复，每个重复20头幼⾍，电⼦天平称重求平均⾍重。

3. 微量点滴仪的使⽤⽅法和注意事项
4. 药剂点滴
点滴部位：幼⾍前胸背⾯，点滴量1.0uL左右，以溶剂处理为对照。

5. 点滴后的幼⾍放置在养⾍盒内，5头/盒，饲喂⼈⼯饲料，置于28℃的⽣化培养箱中。

四、结果检查和处理
处理48h后检查死亡数，⽤⽑笔尖端或尖头镊⼦轻轻触动⾍体，以不能正常
值。

爬⾏者为死亡。

计算死亡率和校正死亡率，并求毒⼒回归⽅程和LD
50
五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进⾏讨论分析。

杀⾍剂毒⼒测定－浸渍法
⼀、实验⽬的
学习浸渍法（浸⾍和浸叶法）测定杀⾍剂触杀毒⼒和胃毒毒⼒的实验操作技术和⽅法。

⼆、实验⽤品和仪器设备
⽣化培养箱、电⼦天平、计算器、浸⾍器、烧杯、移液管、养⾍盒、镊⼦、滤纸、记号笔、容量瓶等。

实验药剂：80％氟⾍腈WG
实验材料：⼩菜蛾3龄幼⾍，⽢蓝叶⽚
三、实验⽅法
1. 药剂配制与稀释
将药剂稀释1.0×105×，2.0×105×，4.0×105×，8.0×105×，以清⽔为对照。

2. 采⽤浸渍法先将⽢蓝叶⽚在不同浓度的药液中处理3－5s，放在报纸上晾⼲，放在养⾍盒⾥，每盒1⽚。

3. ⽤浸⾍器将⼩菜蛾幼⾍在药液中浸渍处理3－5s，每⼀浓度处理30头，分为3次重复，每⼀重复10头幼⾍放在1个养⾍盒内。

4. 28℃⽣化培养箱饲养。

四、结果检查和处理
处理3d后检查结果，⽤⽑笔尖端或尖头镊⼦轻轻触动⾍体，以不能正常爬
值。

⾏者为死亡。

计算死亡率和校正死亡率，并求毒⼒回归⽅程和LC
50
五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进⾏讨论分析。

杀⾍剂触杀毒⼒测定-滤纸⽚药膜法
⼀、实验⽬的
学习滤纸⽚药膜的准备⽅法和利⽤药膜测定杀⾍剂对鳞翅⽬初孵幼⾍的毒⼒。

⼆、实验⽤品和仪器设备
电⼦天平、计算器、烧杯、移液管、吸⽿球、记号笔、容量瓶、量筒、滤纸、⼤头针、泡沫板、⽑笔、培养⽫、秒表、丙酮、⽯油醚、缝纫机油等。

实验原药：90%⾟硫磷原油
实验材料：⽟⽶螟初孵幼⾍
三、实验⽅法
1.混合溶剂的配制
丙酮：⽯油醚：缝纫机油＝1：3：1
2.原药母液的配制
⽤混合溶剂配制1％⾟硫磷母液50mL。

3.药膜的制备
取直径9cm滤纸，放于⽤三根⼤头针做成的⽀架上，吸取1mL1%⾟硫磷母液，从滤纸中⼼向外均匀环形滴加，使其充分湿润，待溶剂挥发后，放于直径9cm的培养⽫内备⽤，以混合溶剂处理为空⽩对照。

4.初孵幼⾍的处理
⽤软⽑笔迅速挑取⽟⽶螟初孵幼⾍30头于滤纸上，并⽴即计时，培养⽫的⼀侧加⼀微光源，⽟⽶螟由于有趋光性，会迅速爬向光照得⼀⽅，不断转动培养⽫，使⽟⽶螟保持爬动，以不能爬动的为死⾍，观察幼⾍击倒时间及头数，重复3次。

四、结果计算和处理
计算各个处理幼⾍的击倒率和校正击倒率，求得毒⼒回归⽅程和击倒中时(KT50)。

五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进⾏分析和讨论。

杀螨剂毒⼒测定－浸玻⽚法
⼀、实验⽬的
学习浸玻⽚法测定杀螨剂的实验操作技术和⽅法。

本⽅法适合测定螨体背
部刚⽑较短的各种雌成螨。

⼆、实验⽤品和仪器设备
⽣化培养箱、电⼦天平、计算器、双⽬解剖镜、烧杯、移液管、载玻⽚、双⾯胶带、零号⽑笔、记号笔、搪瓷盘、吸⽔纸、薄海绵、剪⼑等。

实验药剂：2.5％功夫乳油，2000×、4000×、8000×、16000×、32000×实验材料：⼭楂叶螨
三、实验⽅法
1. 将双⾯胶带剪成2cm长，贴在载玻⽚的⼀端。

2. ⽤零号⽑笔挑起3－4⽇龄的雌成螨，迅速将其背部粘在胶带上，每⾏粘10头，粘2－3⾏。

3. 双⽬解剖镜仔细观察粘在胶带上的螨，⽤⽑笔除去粘在胶带上不规则的螨，如⾜、腹⾯、头部等粘在胶带上，只保留符合规定的雌成螨。

25℃，相对湿度80％左右的条件下放置4h后，再⽤解剖镜观察，⾜能够正常活动的个体符合实验要求，去除不合格的其它个体，并记录存活个体数。

4. ⽤⽔将实验药剂配制成5个系列浓度，置于100mL烧杯中，⽤⼿持玻⽚⽆螨的⼀端，将粘有螨的⼀端在药液中浸渍5s，取出后⽤吸⽔纸吸去多余的药液。

对照⽤清⽔处理。

每个处理重复3－4次。

5. 在搪瓷盘中铺设厚度为1.0cm的海绵或吸⽔纸，其上铺蓝布，加⽔湿透海绵（或吸⽔纸）和蓝布，不要积⽔。

将玻⽚平放在上⾯，置于25℃的⽣化培养箱中。

四、结果检查和处理
处理24h后检查死亡数，⽤⽑笔尖端轻轻触动螨⾜，以不动者为死亡。

计算
值。

死亡率和校正死亡率，并求毒⼒回归⽅程和LC
50
五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进⾏讨论分析。

杀菌剂室内毒⼒测定－⽣长速率法
学习⽣长速率法测定杀菌剂室内毒⼒的实验操作技术和⽅法。

⼆、实验⽤品和仪器设备
⽣化培养箱、电⼦天平、计算器、直尺、培养⽫、烧杯、移液管、打孔器（直径0.5cm）、移菌环、酒精灯、记号笔、容量瓶、三⾓瓶（50mL、250 mL）、超净⼯作台、PDA培养基、微波炉、⾼压灭菌器、电饭煲、马铃薯、葡萄糖、琼脂等。

实验药剂：95%⼄霉威原药
实验材料：灰葡萄孢菌
三、实验⽅法
1. PDA培养基的制备和灭菌，培养⽫、移液管、三⾓瓶（50mL）灭菌。

2. 灰葡萄孢菌的培养
PDA平板培养灰葡萄孢菌，菌落⽣长达2/3⽫。

3. 药剂配制与稀释
先将原药⽤丙酮配制1%母液，再⽤丙酮稀释成25、50、100、200、400mg/L，以丙酮为对照。

4. 带药PDA平板的制备和接菌
在⽆菌的超净⼯作台上，50mL三⾓瓶中准确加⼊4.0mL药液，再加⼊冷却⾄50℃左右融化的PDA培养基⾄50mL刻度线，迅速摇匀后平均倒⼊到3个直径9cm的培养⽫中，制备成带药平板，每个浓度3次重复。

以丙酮为对照。

⽤灭菌的打孔器在灰葡萄孢菌菌落的边缘打取菌饼，接⼊到带药平板中央。

25℃⽣化培养箱培养。

四、结果检查和处理
处理3d后检查结果，⽤直尺测量菌落直径，计算各处理的抑制率，并求毒值。

⼒回归⽅程和EC
50
五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进⾏讨论分析。

杀菌剂毒⼒测定－圆叶⽚法
⼀、实验⽬的
学习利⽤圆叶⽚法测定杀菌剂对黄⽠霜霉病菌⽣物活性的基本要求和⽅法。

⼆、实验⽤品和仪器设备
光照⽣化培养箱、电⼦天平、计算器、烧杯、移液管、容量瓶、培养⽫、玻棒、镊⼦等。

实验药剂：霜霉威，烯酰吗啉等
试验菌种：黄⽠霜霉病菌（pseudoperonospora cubensis）。

实验材料：黄⽠叶⽚
三、实验⽅法
1. 黄⽠霜霉病菌孢⼦悬浮液的制备
室内⽤⽆菌⽔洗涤黄⽠霜霉病病叶的孢⼦，经过离⼼除去孢⼦梗等杂质，并稀释成1×105个孢⼦/mL孢⼦悬浮液，保存于4℃冰箱中备⽤。

2. 药剂配制
在预试试验的基础上，将试验药剂⽤0.1%吐温80⽔溶液稀释成5-7个系列浓度。

⽤2.0cm打孔器在⽆病黄⽠叶上打取圆叶⽚，在药液中浸渍5min后取出晾⼲，放在培养⽫内，⽫内⽤滤纸保湿，每⽚圆叶⽚叶背⾯向上，中⼼滴加10ul 孢⼦悬浮液，置于19℃⽣化培养箱内培养，光照⿊暗12h交替。

每个浓度重复4次，以0.1%吐温80⽔溶液浸渍圆叶⽚并滴加孢⼦悬浮液的处理为对照。

四、结果检查和处理
7d后检查病斑长、短轴，计算防效，并⽤DPS数据处理软件对结果进⾏处
理，求毒⼒回归⽅程和EC
50 和EC
90。

五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进⾏讨论分析。

杀菌剂毒⼒测定－盆栽法
⼀、实验⽬的
学习利⽤盆栽法测定井冈霉素对⼩麦纹枯病的毒⼒。

⼆、实验⽤品和仪器设备
光照⽣化培养箱、电⼦天平、计算器、烧杯、移液管、容量瓶、花盆（⼤号塑料杯）、玻棒、⼟壤等。

实验药剂：井冈霉素，100，50，25，12.5mg/L ；CK 试验菌种：⼩麦纹枯病菌，PDA 平板培养的菌丝。

实验材料：⼩麦种⼦三、实验⽅法
1. 配制井冈霉素各浓度的⽔溶液，并将提前选择好的⼩麦种⼦在药液中浸泡1h ，取出晾⼲。

2. 将过筛的风⼲⼟壤装⼊花盆内4/5，并浇⽔湿透，加⼊PDA 平板培养的⼩麦纹枯病菌，每⽫菌种平均加⼊到12个花盆内⼟壤的表⾯。

3. 播种，5粒/盆，覆盖1.5cm 厚度的风⼲⼟壤。

4. 光照⽣化培养箱内20℃培养21d ，光照：⿊暗=10h ：14h ，定期浇⽔，保持湿度。

四、结果检查和处理
处理21d 后检查⼩麦幼苗发病情况，并按照要求将发病情况分级，计算病情指数和防效，并求毒⼒回归⽅程和EC 50 和EC 90。

⼩麦幼苗病级分级标准：0级，不显症状；1级病斑占叶鞘宽1/2以下；2级病斑占叶鞘宽1/2-3/4；3级病斑占叶鞘宽3/4以上⾄全叶鞘。

五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进⾏讨论分析。

除草剂室内毒⼒测定－⼩杯法
⼀、实验⽬的
学习⼩杯法测定除草剂室内毒⼒的实验操作技术和⽅法。

⼆、实验⽤品和仪器设备
光照培养箱、⼩烧杯（50mL ）、量筒、移液管、计算器、直尺、烧杯、记号笔、容量瓶（100mL ）、保鲜膜、⼤头针、镊⼦、玻璃棒、砂⼦等。

实验药剂：50%⼄草胺乳油，
100
)])([(??∑?=最⾼代表级值
数）调查总病叶数（或病株表级数值病叶数（或病株数）代或病株数各级病叶数病情指数100
-=
对照组平均病情指数
处理组平均病情指数
对照组平均病情指数防治效果（％）
三、实验⽅法
1. 稗草种⼦催芽
28℃，24h催芽。

2. 药剂配制与稀释
⽤⽔稀释系列浓度500、250、125、62.5、31.25mg/L，以⽔为对照。

3. 播种
取不同浓度的药液10mL分别加⼊到50mL⼩烧杯中，加⼊适量砂⼦⾄刚好吸附药液，以清⽔为对照。

选取⼤⼩均匀、出芽⼀致的稗草种⼦播⼊砂⼦中。

播种前先⽤玻璃棒在砂⼦⾥打孔，然后再播种，防⽌损伤稗草种⼦的幼根。

5棵/杯。

4. 培养
保鲜膜封闭⼩烧杯⼝，⽤⼤头针扎5个孔，28℃光照培养箱（光:暗=14:10）培养14d。

四、结果检查和处理
处理14d后检查结果，⽤直尺测量根长和芽长，计算各处理的抑制率，分别求毒⼒回归⽅程和EC
值。

50
五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进⾏讨论分析。

除草剂室内毒⼒测定－⼩麦根长法
⼀、实验⽬的
学习⼩麦根长法测定除草剂室内毒⼒的实验操作技术和⽅法。

⼆、实验⽤品和仪器设备
⽣化培养箱、培养⽫、量筒（50mL）、移液管、计算器、直尺、烧杯、记号笔、容量瓶（100mL）、培养⽫、玻璃棒、镊⼦、砂⼦、60⽬、80⽬标准筛等。

实验药剂：50%⼄草胺乳油，
三、实验⽅法
1. ⼩麦种⼦催芽
25℃，24h催芽。

2. 药剂配制与稀释
⽤⽔稀释系列浓度200、100、50、25、12.5mg/L，以⽔为对照。

3. 发芽床的制备
直径9cm的培养⽫装满过筛的砂⼦并⽤玻棒刮平，每⼀⽫加⼊30mL药液均匀湿透砂⼦。

4. 播种
⽤玻棒在培养⽫直径处轻轻压出⼀道凹槽，选取根长为1-2mm均匀⼀致的⼩麦种⼦播种，10粒/⽫，⽤橡⽪筋固定⽫盖。

5. 培养
25℃，培养4d。

四、结果检查和处理
处理4d后检查结果，⽤直尺测量根长，计算各处理的抑制率，求毒⼒回归值。

⽅程和EC
50
五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进⾏讨论分析。

除草剂⽥间药效试验-⽟⽶⽥除草剂
⼀、试验⽬的
学习防除夏⽟⽶⽥杂草⽥间药效试验，以明确除草剂对夏⽟⽶⽥⼀年⽣⽲本科和阔叶杂草的除草效果及对夏⽟⽶的安全性，
⼆、试验⽤品和仪器设备
喷雾器、电⼦天平、计算器、烧杯、移液管、吸⽿球、软尺等。

试验药剂：⼄草胺等
试验地杂草：马唐(Digitaria sanguinal)、⽜筋草（Eleusine indica）、反枝苋（Amaranthus retroflexus）、马齿苋（Portulaca oleracea L）试验作物：夏⽟⽶，品种为郑单958或农⼤108.
三、试验⽅法
1. 试验地选择
明确试验地的⼟质和栽培情况。

2.试验设计和安排
2.1供试药剂试验设计
表1 供试药剂试验设计
2.2.1⼩区排列
⼩区南北纵向顺⾏分布，随机区组排列，见下表。

⼩区⾯积：30平⽅⽶，长⽅形设计。

重复次数：4次。

3.施药⽅法
3.1使⽤⽅法
⽟⽶播种后第⼆天进⾏⼟壤喷雾处理。

3.2施药器械
使⽤MATABI-16型背负式喷雾器，扇型喷头。

3.3施药时间和次数
3.4使⽤量
药剂施⽤量见表1，喷液量为40L／亩。

3.5防治病⾍和⾮靶标杂草药剂资料
喷药时尚未使⽤任何药剂，分别在施药当天和第⼀、⼆次检查结果时进⾏⼈⼯除草，铲除⼈⼯除草区杂草，空⽩对照区不除草，以便测定由⼄草胺本⾝造成的产量变化。

四调查、记录和测量⽅法
1.⽓象及⽥间管理资料
2.杂草调查
2.1调查时间和次数
分别在施药后5、10、15、20、40天调查。

20、40天采⽤绝对值调查法。

2.2调查⽅法
采⽤绝对数调查法。

每⼀试验⼩区固定调查3个点，每点0.33m2，分别在⽤药后20天、40天调查各点各种杂草的健株数，药后40天在调查杂草株数的同时调查鲜重防效。

2.3药效计算⽅法
GB/T 17980.42-2000。

100
）对照区杂草株数（鲜重）
处理区杂草株数（鲜重）对照区杂草株数（鲜重防除效果（%）?-=
3.作物调查 3.1调查时间和次数
分别在施药后5、10、15天及2次检查结果时。

3.2调查⽅法
没有观察到药害症状。

4.对其他⽣物影响
观察表明该药剂对⾮靶标⽣物没有影响。

5.作物产量和质量五、结果与分析六、试验报告
撰写实验报告，并对实验结果进⾏讨论分析。