人眼表细菌菌群分布及影响因素分析

人眼表细菌菌群分布及影响因素分析

杨美娜; 闵寒毅

【期刊名称】《《中国继续医学教育》》

【年(卷),期】2019(011)023

【总页数】4页(P103-106)

【关键词】眼表; 菌群; 16SrRNA; 干眼症; 睑缘炎; 角膜接触镜

【作者】杨美娜; 闵寒毅

【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院眼科北京 100730; 暨南大学附属深圳眼科医院眼整形和泪器病科广东深圳 518040

【正文语种】中文

【中图分类】R770

健康的眼表对于正常视功能的维持至关重要。在结构上，眼表与眼睑皮肤相延续，由结膜，角膜，巩膜和泪膜组成，通过与其他成分（如免疫细胞、激素、小分子物质及微生物群落等）相互作用，形成眼表微环境。正常的眼表微环境对于眼表健康是关键的。大多数人的眼表存在着相对稳定的微生物群落[1]。眼表微生物群落包括真菌、细菌及病毒等微生物种类，但数量最多且最重要的是细菌[2]。菌群受自身营养代谢和宿主免疫屏障等因素作用，形成稳定的共生状态，正常情况下并不致病，即结膜囊的正常菌群。机体免疫力下降时，部分定植细菌异常增殖，引起眼部感染，称之为条件致病菌。

1 眼表细菌菌群的取样、培养、鉴定方法

1.1 取样

目前大多数研究采用的方法是以拭子于结膜囊取样。该类方法阳性率高，而又以湿棉拭子取样培养阳性率最高。其他眼表标本取样方式包括泪液拭子、结膜印迹试纸、睑缘拭子、脱落睫毛等[3]。

1.2 培养及鉴定

传统的细菌培养和鉴定方法依赖于实验室培养和细菌的形态学特征。其结果受培养相关因素影响，包括采样方法、培养基类型（包括“血琼脂”和“巧克力琼脂”）、大气条件（需氧，微需氧和厌氧）、温度、湿度和培养时间[4]。而新型鉴定方法，如16S rRNA 测序，不受理化因素的限制，检出率更高。其他方法还包括宏观基

因组测序（更常用于分析微生物代谢和功能途径）、计算机模拟核型分析、PCR、变性梯度凝胶电泳（DGGE）和焦磷酸测序。

传统的细菌培养鉴定受各种理化因素影响较大，且依赖于细菌的形态生物学，检出阳性率较低，而以16S rDNA/16S rRNA 高通量测序为代表的分子生物学鉴定方法，具有高灵敏度和特异性，能够全面、精确地鉴定眼表细菌菌群的种属组成。

16S rDNA 存在于细菌染色体基因组，具有保守性、普遍存在性及特征性，被作

为微生物检测和分类鉴定的一种强有力的分子指标。因16S rDNA 检测为非培养

性分析技术，故结果不受抗生素使用的干扰，并适用于鉴定死菌和尚无法培养的细菌。但16S rRNA 高通量测序对设备条件和实验成本较传统的表型鉴定高，故成

本是目前限制其推广的关键因素。

2 眼表细菌菌群的分布情况

回顾国内大样本研究，国内基于传统培养及分离鉴定方法的报道基本一致：正常结膜囊菌群主要包括凝同酶阴性葡萄球菌、棒状杆菌和链球菌，其中表皮葡萄球菌是最常见的眼表菌株。孙旭光等[5]对1 411 份结膜囊标本进行培养，阳性率为

35.9%。由高至低分别为凝固酶阴性葡萄球菌（表皮葡萄球菌为主，36.2%）、棒状杆菌（16.8%）、微球菌属（12.5%）、金黄色葡萄球菌（10.7%）。王娟等[6]对25 728 名受试者进行结膜囊细菌培养,检出率最高的3 种细菌分别为表皮葡萄

球菌（71.47%)、链球菌属细菌（11.78%)和金黄色葡萄球菌（7.43%)。对1992—2004 年国内正常人结膜囊细菌培养进行Meta 分析显示阳性率最高的依

次为表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、微球菌及类白喉杆菌[7]。国外文献报道和

国内的研究结果基本一致，健康眼表最常见的细菌是凝固酶阴性金黄色葡萄球菌（包括表皮葡萄球菌），其次为丙酸杆菌属、棒状杆菌属、金黄色葡萄球菌属、链球菌属和微球菌属[2]。基于16S rDNA 基因高通量测序得到健康人眼表细菌种属

的结果与传统的一致[8-9]。有学者提出眼表核心菌群的概念，认为假单胞菌（20%），丙酸杆菌（20%），根瘤菌（16%），棒状杆菌（15%），不动杆菌（12%），短波单胞菌（5%），葡萄球菌（4%），水杆菌（2%），鞘氨醇单胞

菌（1%）和链球菌（1%）等常见的12 个属眼部微生物群为眼表核心微生物群[2]。

3 眼表细菌菌群的影响因素

3.1 年龄及性别

国内外的研究均支持年龄影响结膜囊带菌状况，其中10 岁以下及60 岁以上者结

膜囊细菌阳性率较高[6，10]。老年组阳性率高，可能与免疫功能减退，泪膜稳定

性差，泪液分泌减少、泪液成分（抗体、补体、乳铁蛋白、溶菌酶等）缺乏致眼表的防御性功能降低有关[11]。1 岁以上儿童最常见为表皮葡萄球菌[12]，可能与过敏性结膜炎、倒睫等刺激导致的不良生活习惯（比如喜揉眼）有关。新生儿结膜囊分泌物培养阳性率差异较大，菌株多样，可能受新生儿免疫功能低下及分娩方式影响。

尽管已有证据证明结膜囊细菌受性别影响[13-14]，但尚无定论。国内有报道称男

性结膜囊细菌阳性率普遍高于女性[6，15]，而国外的文献报道更倾向于两者之间

没有明显差异[10，16]。

3.2 季节

季节主要表现为温度及湿度的改变，而两者为影响微生物群落演进的重要因素。结膜囊温度和湿度相对稳定，但受环境温度与湿度影响[17]，并可能影响结膜囊菌群。国外学者从人口水平，分别以“腋臭、脚气及胃肠胀气”三个明确与微生物群落有关的症状及疾病为关键词，统计网络上相关关键词的频率变化，显示该类其检索频次呈季节性变化，间接说明季节对人体微生物群落的影响[18]。国内学者证明结膜囊带菌情况随季节变化[19-20]，春季（70.5%）及夏季（67.7%）结膜囊细菌培

养阳性率较高，而秋季（42.8%）与冬季（40.4%）较低，差别显著，但各季节培养的细菌种类均以凝固酶阴性的葡萄球菌为主，多为表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌（占60.19%）[20]。

3.3 生活习惯

生活习惯对眼表菌群的影响的热点主要集中于角膜接触镜的使用。目前的研究更倾向于佩戴角膜接触镜导致眼表菌群的改变，并认为其与眼表感染相关。Sankaridurg 等[21]发现佩戴软性角膜接触镜与病原菌的定植，尤其是革兰氏阴性菌如粘质沙雷氏菌和流感嗜血杆菌显著相关。与非镜片佩戴组相比，佩戴组的干燥结膜拭子检测结果差异更大，接近于皮肤细菌群落结构；其甲基杆菌、乳酸杆菌、不动杆菌和假单胞菌丰度更高，而嗜血杆菌、链球菌、葡萄球菌和棒状杆菌丰度更低[22]。连续一年佩戴软性角膜接触镜者结膜囊菌群丰度较对照组高[23]，而检出的菌群类型无明显差异。

3.4 是否伴发其他疾病

3.4.1 干眼症泪液在眼表分布形成泪膜，起润滑作用，同时含有抗菌物质，如溶菌酶、乳铁蛋白、免疫球蛋白A（IgA）、载脂蛋白和补体等，具有免疫防御作用。干眼症患者的泪液因质和量的改变，导致局部的防御机制减退，因此影响泪膜稳定