162例脑脊液细菌培养结合涂片革兰氏染色找菌的结果分析

World Latest Medicine Information (Electronic Version) 2019 V o1.19 No.35

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·论著·

162例脑脊液细菌培养结合涂片革兰氏染色找菌的结果分析

覃琼英，车汉荣，王海峰

（茂名市中医院检验科，广东 茂名）

摘要：目的对脑脊液细菌培养联合离心沉渣涂片革兰氏染色查找病原菌的结果进行对比分析。方法对2016年１月~ 2018年12月广东中医药大学附属茂名市中医院神经内科和神经外科送检的162例脑脊液标本进行细菌培养和离心沉渣涂片革兰氏染色找菌。结果在162例脑脊液标本中，29例培养有细菌生长，阳性率%为17.90%；而通过离心取沉淀物涂片检查，找到细菌的标本有23例，阳性率为14.19%；通过离心取沉淀物涂片找到细菌的23例标本中，其中革兰氏阴性杆菌有15例，革兰氏阳性球菌6例，墨汁染色找到新型隐球菌2例；通过培养总共有29例有细菌生长的标本中，其中19例为革兰氏阴性杆菌，7例革兰氏阳性球菌，3例为新型隐球菌；在细菌培养出3例新型隐球菌的脑脊液中，沉渣涂片只找到2例新型隐球菌；而5例培养阳性的标本中，对应的沉渣涂片未找到细菌，有2例沉渣涂片找到细菌的脑脊液培养结果为阴性。

结论脑脊液细菌培养结合离心沉渣涂片革兰氏染色找菌，可避免各种因素的影响，减少假阴性的发生，有利于临床更好更全面的掌握患者的感染情况，给临床诊断提供更好的帮助。

关键词：脑脊液；菌培养；离心沉渣涂片

中图分类号：R765.24 文献标识码：A DOI: 10.19613/ki.1671-3141.2019.35.012

本文引用格式：覃琼英,车汉荣,王海峰. 162例脑脊液细菌培养结合涂片革兰氏染色找菌的结果分析[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(35):24-25.

Analysis of Bacterial Culture Combined with Gram Staining in 162 Cases of Cerebrospinal Fluid

QIN Qiong-ying, CHE Han-rong, WANG Hai-feng

(Department of Clinical laboratory, Maoming traditional Chinese medicine Hospital,Maoming Guangdong) ABSTRACT:Objective to compare the results of bacteria culture in cerebrospinal fluid and gram staining in centrifugal sediment smear. Methods from January 2016 to December 2018, 162 cases of cerebrospinal fluid specimens from department of neurology and department of neurosurgery, Maoming hospital of traditional Chinese medicine affiliated to Guangdong university of traditional Chinese medicine were examined for bacteria culture and centrifuge sediment smear for gram staining. Results among 162 cases of cerebrospinal fluid specimens, 29 cases had bacterial growth, the positive rate % was 17.90%. By centrifugation and microscopic examination , 23 bacterial specimens were found, with a positive rate of 14.19%. Among the 23 samples of bacteria found by centrifuge sediment smear, 15 were gram-negative bacilli, 6 were gram-positive cocci, and 2 were Cryptococcus by ink staining.in the 29 cases of bacteria culture positive,19 of which were Negative bacillus, 7 were Positive coccus, and 3 were Cryptococcus . In the cerebrospinal fluid of 3 cases of cryptococcus cultured by bacteria, only 2 cases of cryptococcus were found in sediment smear. In the

5 positive specimens, bacteria were not found in the corresponding sediment smear, and the results of cerebrospinal fluid culture in 2

cases were negative.Conclusion cerebrospinal fluid bacterial culture combined with centrifugal sediment smear gram staining for bacteria can avoid the influence of various factors and reduce the occurrence of false negative, which is conducive to a better and more comprehensive clinical grasp of the patient’s infection, providing better help for clinical diagnosis.

KEY WORDS: Cerebrospinal fluid; Bacterial culture; Centrifugal sediment smear

0 引言

脑脊髓膜炎，通过脑脊液培养出细菌是较好的诊断方法，但由于各种因素的影响，难免会有假阴性的发生，为此我们对本院神经内科、神经外科2016年1月~2018年12月送检的162例脑脊液标本进行直接涂片检菌与培养两种检测方法，收到很好的效果，现报道如下。

1 材料

1.1 研究对象

选择广东中医药大学附属茂名市中医院神经内科、神经外科2016年1月~ 2018年12月临床送检的162例脑脊液标本。

1.2 标本的收集、运送和处理严格按照《全国临床检验操作规程》第3版、《临床微生物检验标准化操作》第三版要求执行[1]。

2 方法

2.1 腰穿抽取患者脑脊液

脑脊液（CSF）采集后，首先将l~5 mL无菌注入树脂需氧和厌氧培养瓶中，其余置于无菌试管中，每种检验需要最小量：细菌≥1mL,真菌≥2mL，抗酸杆菌≥2mL，15min内运送实验室，绝不可冷藏。

2.2 肉眼观察

首先观察脑脊液的外观，除结核性脑膜炎、无菌性脑膜炎外，其他细菌引起的化脓性脑膜炎，脑脊液多呈明显混浊，经抗生素治疗后，亦可不混浊或轻度混浊。

2.3 涂片革兰染色检查

以3000r/min离心，10~15min，取沉淀物涂片，做革兰染色，镜检。根据染色反应及细菌形态特征，可初步提示感染细菌的种类。

2.4 结核分枝杆菌涂片检查

脑脊液以4000r/min离心30min，取沉淀物作小而集中的涂片；亦可将脑脊液在室温内静置数小时或18~24h,待形成纤维网后，取此脑脊液倾于新的、无划痕的洁净载玻片上，多余的液体任其溢出载玻片，使纤维网自然展开，干燥、固定后做抗酸染色，检查有无抗酸性杆菌。

2.5 新型隐球菌涂片检查

以3000r/min离心，10~15min，取沉淀物涂片，用墨汁负染色，在黑色背景中，可见菌体周围有宽大透明的荚膜，有时可见到出芽的酵母菌。新型隐球菌，特别是荚膜狭窄者容易与白细胞相混淆，可用0.1%甲苯胺蓝染色法加以区别。新型隐球菌的菌体呈红色圆球状，荚膜不着色，白细胞染色成深蓝色。

3 仪器及试剂

LABSTAR EX自动血液细菌培养仪其配套需氧瓶、厌氧瓶；贝克曼WalkAway Plus 全自动微生物药敏及鉴定分析系统、法国梅里埃ATB半自动电脑检测仪及配套鉴定试剂盒、细菌培养孵箱、CO2培养孵箱、墨汁（用于新型隐球墨汁负染色）。培养基、革兰染色液、抗酸染色液由法国梅里埃公司提供。

4 培养

4.1 培养基需血平板、巧克力平板、麦康凯平板、沙保罗平板

血平板和巧克力平板是分离用的最基本培养基。巧克力平板置于CO2环境培养，有利于检出脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌及嗜血杆菌等。血平板置于CO2培养箱环境培养，易于识别β-溶血链球菌和肺炎链球菌。接种麦康凯平板可分离、鉴定革兰阴性杆菌。4.2 将患者脑脊液l~5ml无菌注入树脂培养瓶中放入LABSTAR EX自动血液细菌培养仪孵育

每十五分钟仪器自动检测一次，如阳性机器报警，将机器报警为阳性的标本直接涂片镜检初步报告，再转种到沙保罗平板、血平板、麦康凯平板、巧克力平板置(5%-10%CQ环境)中，35℃培养18-24小时，若有细菌生长根据细菌染色结果上机鉴定及药敏分析，若培养7天仪器仍报无菌生长，则再转种到沙保罗平板、血平

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