奶粉中三聚氰胺样品前处理及HPLC检测方法
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
三聚氰胺HPLC检测方法
1、高pH条件Buffer：00mM的NH4AC流动相：Buffer:ACN=95:5
流速：1.0ml/min
进样量：样品先用70%ACN溶解成约1mg/ml，用ACN稀释成0.1mg/ml，进10ul
柱温：40℃
波长：240nm
色谱柱C8 4.6*250mm 或者C18
2、离子对色谱法 色谱柱： C8 4.6*250mm 流动相：缓冲液：乙腈=85：15 缓冲液：10mM 柠檬酸，10mM 辛烷磺酸钠，调 pH 为 3.0。 流速：1.0ml/min 柱温：40 oC 波长：240nm 或者： 色谱柱： C18 4.6*250mm 缓冲液：10 mM柠檬酸, 10 mM庚烷磺酸钠 流动相：缓冲溶液：乙腈=85：15 流速：1.0ml/min 柱温：40℃ 波长：240nm
三聚氰胺样品前处理方法
方法一： .称取试样10克（±0.01g)于容量瓶中，加流动相溶液100ml溶解，超声提取30min,静置，取上层，8000转高速离 心，取上层过0.45um滤膜。备用。 方法二： 称取试样10克（±0.01g)于容量瓶中，加50%乙腈－水溶液100ml溶解，超声提取30min,静置，取上层，5000转 高速离心，取上层过0.45um滤膜。备用。 方法三： 称取试样5克（±0.01g)，加15ml 1%三氯乙酸，超声提取30min，8000转高速离心，上层用滤纸滤过，将样品上 活化的MCX柱(Oasis MCX 3cc/60mg, PN: 186000254)，用3ml水，3ml甲醇洗，抽干，5％氨水甲醇溶液3ml洗 脱，蒸干，用2：8甲醇－水定容，过0.45um滤膜，备用。 方法四： 标样：取 50mg 三聚氰胺标准品，以 20%甲醇溶解定容至 50ml 得到 1000ppm 的标准溶液，使用时，以提 取液（0.1%三氯乙酸）稀释至所要的浓度。 提取： 称取样品 5g，加入 50ml 0.1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入 2ml 2%乙酸铅溶液，超声 20min。然后取 部分溶液转移至10ml离心管中，8000rpm/min离心10min，取上清液3ml过混合阳离子交换小柱Oasis MCX。 净化： Oasis MCX小柱，60mg/3ml，活化及平衡：3ml甲醇，3ml水，上样：加入提取液3ml，淋洗：3ml水；3ml甲醇； 弃去淋洗液并将小柱抽干，洗脱：5ml 5%氨化甲醇（v/v）洗脱。（5%氨化甲醇的配置：5ml 氨水+95ml 甲醇），. 浓缩：50℃，氮气吹干，20%甲醇/水定容至 2ml，HPLC 分析或衍生后GC/MS 分析。
1、高pH条件Buffer：00mM的NH4AC流动相：Buffer:ACN=95:5
流速：1.0ml/min
进样量：样品先用70%ACN溶解成约1mg/ml，用ACN稀释成0.1mg/ml，进10ul
柱温：40℃
波长：240nm
色谱柱C8 4.6*250mm 或者C18
2、离子对色谱法 色谱柱： C8 4.6*250mm 流动相：缓冲液：乙腈=85：15 缓冲液：10mM 柠檬酸，10mM 辛烷磺酸钠，调 pH 为 3.0。 流速：1.0ml/min 柱温：40 oC 波长：240nm 或者： 色谱柱： C18 4.6*250mm 缓冲液：10 mM柠檬酸, 10 mM庚烷磺酸钠 流动相：缓冲溶液：乙腈=85：15 流速：1.0ml/min 柱温：40℃ 波长：240nm
三聚氰胺样品前处理方法
方法一： .称取试样10克（±0.01g)于容量瓶中，加流动相溶液100ml溶解，超声提取30min,静置，取上层，8000转高速离 心，取上层过0.45um滤膜。备用。 方法二： 称取试样10克（±0.01g)于容量瓶中，加50%乙腈－水溶液100ml溶解，超声提取30min,静置，取上层，5000转 高速离心，取上层过0.45um滤膜。备用。 方法三： 称取试样5克（±0.01g)，加15ml 1%三氯乙酸，超声提取30min，8000转高速离心，上层用滤纸滤过，将样品上 活化的MCX柱(Oasis MCX 3cc/60mg, PN: 186000254)，用3ml水，3ml甲醇洗，抽干，5％氨水甲醇溶液3ml洗 脱，蒸干，用2：8甲醇－水定容，过0.45um滤膜，备用。 方法四： 标样：取 50mg 三聚氰胺标准品，以 20%甲醇溶解定容至 50ml 得到 1000ppm 的标准溶液，使用时，以提 取液（0.1%三氯乙酸）稀释至所要的浓度。 提取： 称取样品 5g，加入 50ml 0.1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入 2ml 2%乙酸铅溶液，超声 20min。然后取 部分溶液转移至10ml离心管中，8000rpm/min离心10min，取上清液3ml过混合阳离子交换小柱Oasis MCX。 净化： Oasis MCX小柱，60mg/3ml，活化及平衡：3ml甲醇，3ml水，上样：加入提取液3ml，淋洗：3ml水；3ml甲醇； 弃去淋洗液并将小柱抽干，洗脱：5ml 5%氨化甲醇（v/v）洗脱。（5%氨化甲醇的配置：5ml 氨水+95ml 甲醇），. 浓缩：50℃，氮气吹干，20%甲醇/水定容至 2ml，HPLC 分析或衍生后GC/MS 分析。