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邻二氮菲分光光度法测定Fe的含量
一、实验目的
1. 掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理及操作方法
2. 掌握721型分光光度计和吸量管的使用方法
3. 熟悉标准曲线的绘制方法
二、实验原理
邻二氮菲（又称邻菲罗啉，简写为phen），是测定微量铁的较好试剂，在pH=2～9的条件下，二价铁离子与试剂生成极稳定的橙红色配合物。

Fe(phen) 32+，其lgK=21.3，κ508=1.1 ×104 L·mol-1·cm-1，铁含量在0.1～6μg·mL-1范围内遵守比尔定律。

其吸收曲线如图1-1所示。

显色前需用盐酸羟胺或抗坏血酸将Fe3+全部还原为Fe2+，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的显色酸度范围。

有关反应如下：
4 Fe3+＋2 NH2OH→4 Fe2+＋N2O＋4H＋＋H2O
图1-1 邻二氮菲一铁(Ⅱ)的吸收曲线
本方法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消除等优点。

用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列浓度的标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度(A)，以溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度，根据测得吸光度值从标准曲线上查出相应的浓度值，即可计算试样中被测物质的质量浓度。

实验器材
1.仪器
721型分光光度计、容量瓶、移液管、分析天平
2.药品
硫酸铁铵（配制方法查阅分析化学实验书P229-P231）、HCl(6 mol/L)、
5 % 盐酸羟胺(新鲜配制)、0.1 %邻二氮菲溶液(新鲜配制)、1 mol/L NaAc
三、实验步骤
1. 绘制吸收曲线
用吸量管吸取铁标准溶液（10 ug/mL）0.00 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00mL、4.00 mL、5.00 mL分别置入25 mL容量瓶中，各加入0.5 mL 5% 盐酸羟胺溶液，摇匀。

再加1.0 mL 0.1%邻二氮菲溶液和2.5 mL 1 mol/L NaAc溶液，加蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀，放置30 min。

以不加铁标准溶液的试液为参比液，(参比溶液的作用是扣除背景干扰，不能用蒸馏水作参比，因为蒸馏水成分与试液成分相差太远，只有参比和试液成分尽可能相近，测量的误差才会越小。

)在400-550波长范围内选择
最大测定波长为测定波长，依次测吸光度A值。

以铁的质量浓度为横坐标，A
值为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品测定
准确吸取适量试样2.50mL于25 mL容量瓶中(平行做3次)，未知试样溶液，以不加铁标准溶液的试液为参比液，平行测A值。

求其平均值，在标准曲线校正方程计算出铁的质量，计算水样中铁的质量浓度。

3.数据记录与处理
1．记录分光光度计型号，比色皿厚度，绘制吸收曲线和标准曲线；
2．计算未知液中铁的含量，以每升未知液中含铁多少克表示（g·L-1）。

五、注意事项
1.本实验以试剂空白（加0 mL铁标液那一份）作参比溶液。

2.本次实验涉及溶液较多，配制时应保证准确无误，测定时注意对应关系。

3.显色后放置时间10min以上。

4.移液管专管专用，无需润洗。

5.注意移液管的使用方法，要求每次从零刻度放至所需的体积。

6.制作标准曲线和进行其它条件实验时，加盐酸羟胺的目的是把试样中的Fe3+还原为Fe2+，所以要先加入盐酸羟胺。

注意溶液的填加顺序，不能随意颠倒，加入盐酸羟氨后反应5min，再加NaAc和邻二氮菲。

7.分光光度计必须预热20min，待稳定后才能测量。

8.比色皿必须配套，装上待测液后通光面必须擦拭干净。

9.同一组溶液必须在同一台仪器上测量。

★★★★★★★
请同学们认真预习实验讲义，本实验为考试内容，实验过程中老师有权拒绝回答大家的提问，祝大家都能考出好成绩。