高效液相色谱法测定乳香药材中乳香酸含量的方法研究

高效液相色谱法测定乳香药材中乳香酸
含量的方法研究
摘要：目的建立一种高效液相色谱法测定乳香药材中乳香酸的含量测定方法。

方法采用Agilent1260–C8(150mm×4.6mm,4μm)色谱柱，检测波长210nm。

乙腈—0.1%磷酸为流动相，80:20(测定α-乳香酸，β-乳香酸)，
70:30(测定11-羰基-β-乙酰乳香酸)，流速1.0ml/min，进样量10μL。

结
果α-乳香酸、β-乳香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸的线性范围分别为
0.04668～0.5835μg (r=1.0000)、0.05148～0.6435μg (r=1.0000)、
0.05212～0.6515μg (r=1.0000)。

平均加样回收率(n=6)分别为
94.76%(RSD=1.61%)、99.40%(RSD=0.84%)、100.55%(RSD=1.30%)。

结论本方法简便、灵敏、准确、重现性好。

实现了乳香药材的专属性含量测定，为其质量控制提供依据。

关键词：《中国药典》；高效液相色谱法；乳香
乳香为橄榄科植物乳香树及同属植物的树干切口中渗出的坚硬胶状树脂。

分为索马里乳香和埃塞俄比亚乳香[1]。

辛、苦、温。

归心、肝、脾经。

具有活血行气止痛，消肿生肌之功效。

主要用于痛经、经闭、胃痛、心腹诸痛、风湿痹痛；跌打伤痛、痈疽肿痛、肠痈；疮疡肿痛或溃久不收口[2]。

在院方和成方制剂中应用广泛，而且为进口名贵药材。

近年来，特别是进口名贵药材的掺假比较普遍[3-4]，质量控制尤为重要。

在2020年版《中国药典》一部中乳香药材的含量测定为挥发油测定。

此方法专属性不强，可能给企业带来经济损失和失信风险。

而且现有含量测定文献不多，大多基于挥发油研究，个别仅针对一种成分，不够科学[5-7]。

因此，为了解决这一问题，对乳香药材的代表性成分[8-9]进行分析研究，建立代表性成分乳香酸类含量测定的高效液相色谱法，为乳香药材质量控制和用药安全提供依据。

1 试验材料与仪器
1.1 仪器安捷伦1260高效液相色谱仪(UV检测器)，MSA6.6S-OCE百万分之一电子天平(德国赛多利斯公司)，KQ-500VDE超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)，天津泰斯特数显电子恒温水浴锅。

1.2 试剂与试药对照品α-乳香酸(批号:M14GB14667纯度99.3%)、β-乳香酸(批号:M14GB14668纯度98.4746%)、11-羰基-β-乙酰乳香酸(批
号:111760-201502纯度99.3%)均购自中国食品药品检定研究院。

甲醇、乙腈为色谱纯(赛默飞世尔科技(中国)公司)其余试剂为分析醇(国药集团化学试剂有限公司)，3批乳香药材(陕西地道药材有限公司批号:021*******、021*******、021*******)。

2、方法
2.1系统色谱条件采用Agilent1260–C8(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱，柱温35℃，检测波长210nm，乙腈—0.1%磷酸为流动相，80:20(测定α-乳香酸，β-乳香酸)，70:30(测定11-羰基-β-乙酰乳香酸)，流速1.0ml/min，进样量10μL。

2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液制备分别取α-乳香酸、β-乳香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品适量，精密称定，分别加甲醇溶液制成42.34 μg/ml、50.81
μg/ml、41.15 μg/ml的对照溶液。

2.2.2 供试品溶液制备取各批乳香药材适量，分别研细混匀的粉末过4号筛，取约0.2g精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，超声处理30分钟，过滤，即得。

2.2.3 阴性样品溶液制备取桃胶适量，按供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。

3、结果
3.1 方法学考察
3.1.1专属性试验分别取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，按系统色谱条件分别进样10μL，结果见图1。

α-乳香酸、β-乳香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品与样品相同保留时间峰重合，阴性样品在对照品峰和样品峰相同保留时间无干扰峰。

检测峰与相邻色谱峰的分离度大于1.5，理论塔板数10000。

说明该方法专属性强，系统适用性好。

图1 专属性试验HPLC 色谱图
A.对照品1；
B.样品1；
C.对照品2；
D.样品2；
E.阴性样品；Ⅰ.α-乳香酸;Ⅱ.β-乳香酸;Ⅲ.11-羰基-β-乙酰乳香酸
3.1.2 精密度试验取对照品溶液分别按对应的色谱条件连续进样6次，结果α-乳香酸、β-乳香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸的峰面积RSD(ｎ=6)分别为0.31%、0.29%、
0.35%，表明仪器具有良好的精密度。

3.1.3 线性关系考察分别精密吸取α-乳香酸、β-乳香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品溶液各2，5，10，15，20，25μl，分别注入高效液相色谱仪中，按确定的色谱条件测定各对照品的峰面积。

以对照品进样量为横坐标X，色谱峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，计算回归方程。

结果α-乳香酸
Y=9.5282x+0.0022，R=1.0000；β-乳香酸Y=6.9392x+0.0003，R=1.0000；11-羰
基-β-乙酰乳香酸Y=24.9968x-0.0122，R3=1.0000。

可见各成分线性关系良好。

3.1.4 重复性试验精密称取供试品0.2g，平行制备6份，按供试品溶液
制备方法制备，分别测定含量。

结果α-乳香酸平均含量为2.15%，RSD为1.81%；β-乳香酸平均含量为3.94%，RSD为2.47%；11-羰基-β-乙酰乳香酸平均含量为3.33%，RSD为2.26%。

表明该方法重复性良好。

3.1.5 稳定性试验取同一供试品溶液(批号:20210102)分别于室温下放置0、2、8、16、24h按系统色谱条件进样测定、记录峰面积，结果α-乳香酸含量为2.21%，RSD为
1.32%，β-乳香酸含量为3.94%，RSD为0.73%，11-羰基-β-乙酰乳香酸含量为3.36%，RSD
为1.83%，表明该方法重复性良好。

3.1.6 加样回收率试验取重复性试验项下已知平均含量（α-乳香
酸:10.24mg/g、β-乳香酸：35.24mg/g、11-羰基-β-乙酰乳香酸 31.32mg/g）
的样品约0.1g精密称定，按对照品含量1:1，精密加入称定的对照品，按供试品
溶液方法制备6份，测定含量。

计算各成分的平均回收率和RSD。

结果α-乳香酸、β-乳香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸的平均回收率(n=6)分别为94.76%，RSD
为1.61%;;99.40%，RSD为0.84%；100.55%，RSD为1.30%。

详见表
1。

表1 加样回收率测
定结果(n=6)
3.2 样品测定取３批乳香药材样品，按供试品溶液方法制品，在系统色谱条件下测定，ꎬ依据线性方程计算样品中α-乳香酸、β-乳香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸的含量，结果见表2ꎮ
表2 样品含量测
定结果(mg/g)
4、结论
通过试验本文确立了高效液相法对乳香药材代表性成分的含量测定方法，弥
补了现行法典的不足，能客观地评价药材质量。

说明该方法简便、可行、专属性强。

为乳香药材优劣判定提供科学的依据。

参考文献
[1]国家药典委员会﹒2020年版《中国药典》第一部.北京：中国医药科技出
版社，2020：223.
[2]常章富主编﹒中药学﹒北京：中国医药科技出版社，2020,4：111.
[3]夏小中,张昌权﹒掺伪乳香没药的鉴别﹒现代中药研究与实践﹒2007(01)：28-29.
[4]王佳芬,闫海霞﹒进口中药乳香、没药和血竭真伪鉴别方法探讨﹒中国医
药指南﹒2013,11(09)：455-457.
[5]段雨晴,黄菊等﹒醋乳香挥发油GC指纹图谱研究﹒亚太传统医药﹒2022,18(06)：61-66.
[6]汪莹,张玉珊等﹒乳香炮制后挥发性成分的变化及含量测定﹒中国药房﹒2022,33(10)：1172-1176.
[7]翟欣,庞克坚等﹒5个不同地区市售乳香质量评价及易掺伪品松香的检查﹒时珍国医国药﹒2017,28(08)：1866-1869.
[8]张佳琪,郭春杨等﹒乳香中萜类化合物的研究进展﹒华西药学杂志﹒2022,37(04)：463-467.
[9]崔锐,周金云﹒乳香化学和药理的研究进展﹒中国药学杂志﹒2003(06)：407-410.
1。