HPLC法测定盐酸帕罗西汀缓释片含量的研究

30
中国处方药 第18卷 第12期
·实验研究·
件为A 1B 3C 2D 3，
即提取1次，加醇量为10倍量，提取时间1.0 h ，提取醇浓度60%时总黄酮含量最高，为6.12%。

由方差分析表3可见，因素D 、B 、C 对试验结果有显著性影响，综合后选择A 2B 3C 3D 3为最佳提取条件，即采用60%醇提取法，提取2次，加醇量为10倍量，提取时间1.5 h 。

3 结果与讨论
通过醇提法的工艺筛选，优选出了散痛风凝胶膏贴剂总黄
31333 6.1242123 5.0652231 1.2562312 3.8573132 2.4183213 3.8593321 3.90
K111.28.718.90 6.30K210.158.9512.9010.16K310.1613.859.7115.05K 3.73 2.90 2.97 2.10K 3.38 2.98 4.30 3.39K
3.39
4.62
3.24
5.02
酮的较佳提取工艺为60%醇提取法，提取2次，加醇量为10倍量，提取时间1.5 h ，含量达到6.12%。

且筛选出的工艺操作简单，省时节力，成本较低。

采用散痛风凝胶膏贴剂三乙胺法[4]应用于总黄酮的显色和含量测定，简便易行，可快速、有效地鉴别散痛风凝胶膏贴剂总黄酮，且试验果表明三乙胺法有较好适应性和稳定性，能够全面地评价散痛风凝胶膏贴剂的醇提工艺，且方法简单、成本低，为日后散痛风凝胶膏贴剂的研制大规模生产奠定了基础。

参考文献
[1]秦乐，陈新梅，邢佰影，等． 正交试验优选菊花总黄酮的提取工艺[J]．化工时刊，2016，（11）：
18-35．[2]郭辉，陈新梅．中药活性成分磷脂复合物研究进展[J]．辽宁中医药大学学报，2016，（8）：
161-163．[3]贾凌云，孙毅，王春阳，等．菊花总黄酮提取工艺研究[J]．中药材，2003，26（1）：
35-37．[4]居羚，韩文静，池玉梅．天南星药典品种黄酮含量测定和鉴别方法的研究[J]．中成药，2010，32（2）：
308-311．C 2.972 1.4912.25＞0.05D
12.82
2
6.41
52.70
＜0.01
盐酸帕罗西汀是一种强效、高选择性5-HT 再摄取抑制剂（SSRIs ），
为苯基哌啶类化合物，与早期用于治疗抑郁症的三环及四环类抗抑郁药相比较，5-羟色胺再摄取抑制剂急性毒性低且耐受性好，成为老年人治疗抑郁症的一线药物[1-4]。

盐酸帕罗西汀普通片临床使用易产生不良反应，主要因为普通片释药快，造成胃部和小肠上端局部浓度过高。

盐酸帕罗西汀缓释片可减 1 仪器与试药
Agilent1200高效液相色谱仪（DAD ），chemstation 软件；十万分之一天电子天平：梅特勒-托利多；百万分之一电子天平：梅特勒-托利多XS105微量天平。

盐酸帕罗西汀缓释片，批号：140101-C ；乙腈为色谱纯；磷酸、三乙胺、盐酸、氢氧化钠、双氧水等均为分析纯；水为纯水。

HPLC 法测定盐酸帕罗西汀缓释片含量的研究
陈嘉璐1，2
，金鑫2，吴起娟2，程刚1＊
（1沈阳药科大学药学院，沈阳 110016；2丽珠医药集团股份有限公司，广东珠海 519090）
【摘要】目的 运用高效液相色谱法测定盐酸帕罗西汀缓释片的含量。

方法 采用Agilent ZORBAX SB C 18（4.6×150 mm ，5 μm ）色谱柱；以0.6%磷酸溶液（加三乙胺调节pH 至5.0）∶乙腈＝67∶33为流动相；流速1.5 ml/min ；检测波长295 nm ；柱温：室温。

结果 线性方程为A ＝12 579 C ＋2.102 7，r ＝1.000 0。

结果表明本品在0.005～0.375 mg/ml 范围内，浓度与峰面积具有良好线性关系；精密度试验RSD ＜2%，本方法具有良好的重复性；样品溶液，于室温下放置在0.005～0.375 mg/ml 浓度范围内具有良好的溶液稳定性；平均回收率为99.9%（n ＝9）。

结论 所建立方法准确、简便、检测成本低，可用于盐酸帕罗西汀缓释片含量的测定。

【关键词】盐酸帕罗西汀缓释片；梯度洗脱；高效液相色谱法
31
Journal of China Prescription Drug Vol.18 No.12
·实验研究·
2.1.3溶剂选择
本品在甲醇中易溶，在乙醇中溶解，在丙酮中微溶，在水中极微溶解，在0.1 mol/L 盐酸溶液中几乎不溶。

因此选用甲醇-水作为溶解样品溶剂。

2.2 方法学验证2.2.1专属性
未破坏样品溶液及其未破坏空白溶液的制备：取本品10片，去除衣膜，研碎，称取细粉适量（约相当于盐酸帕罗西汀50 mg ），
精密称定，置100 ml 量瓶中，加甲醇-水适量，超声并不时振摇至少30 min ，使溶解，放冷，加甲醇-水稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液作为储备液。

精密量取储备液5 ml ，置10 ml 量瓶中，加甲醇-水稀释至刻度，摇匀，即得未破坏样品溶液。

精密称取处方量的空白辅料，同法制备，即得未破坏空白溶液。

酸破坏样品溶液及其空白溶液的制备：精密量取储备液5 ml ，置10 ml 量瓶中，加0.1 mol/L 的盐酸溶液1 ml ，静置4 h ，90℃水浴30 min ，冷至室温，加0.1 mol/L 的氢氧化钠溶液1 ml 中和，加甲醇-水稀释至刻度，摇匀，离心，即得酸破坏样品溶液。

空白辅料储备液，同法制备，即得酸破坏空白溶液。

碱破坏样品溶液及其空白溶液的制备：精密量取储备液5 ml ，置10 ml 量瓶中，加0.1 mol/L 的氢氧化钠溶液1 ml ，静置4 h ，90℃水浴30 min ，冷至室温，加0.1 mol/L 的盐酸溶液1 ml 中和，加甲醇-水稀释至刻度，摇匀，离心，即得碱破坏样品溶液。

空白辅料储备液，同法制备，即得碱破坏空白溶液。

氧化破坏样品溶液及其空白溶液的制备：精密量取储备液5 ml ，置10 ml 量瓶中，加30%双氧水溶液1 ml ，室温放置24 h ，置100℃水浴中加热30 min ，去除多余过氧化氢，取出放至室温，加甲醇-水稀释至刻度，摇匀，离心，即得氧化破坏样品溶液。

空白辅料储备液，同法制备，即得氧化破坏空白溶液。

加热破坏样品溶液及其空白溶液的制备：精密量取储备液5 ml ，置10 ml 量瓶中，90℃加热12 h ，冷至室温，加甲醇-释至刻度，摇匀，离心，即得加热破坏样品溶液。

空白辅料储备液，同法制备，即得加热破坏空白溶液。

加热破坏（固体）样品溶液及其空白溶液的制备：取固体粉末适量，摊平，置于烘箱内，90℃加热12 h ，精密称取适量（约相当于帕罗西汀25 mg ）。

置100 ml 量瓶，加甲醇-水稀释至刻度，摇匀，离心，即得加热破坏（固体）样品溶液。

取空白辅料，同法制备，即得加热破坏空白溶液。

光照破坏样品溶液及其空白溶液的制备：精密量取储备液5 ml ，置10 ml 量瓶中，置（5 000±500） lx 条件下光照24 h ，加甲醇-水稀释至刻度，摇匀，离心，即得光照破坏样品溶液。

空白辅料储备液，同法制备，即得光照破坏空白溶液。

结果表明：破坏条件下空白辅料对样品检测无干扰。

本品在各破坏条件下，主成分峰与邻近峰分离度均大于2.0，分离良好，见图3。

2.2.2 峰纯度检查
观察破坏降解色谱图，杂质峰、空白辅料峰与盐酸帕罗西
汀峰有效分离，对样品峰进行纯度检查，纯度阈值为990.00，结果未破坏、酸破坏、碱破坏、氧化破坏、热破坏（液体）、热破坏（固体）、光破坏主峰纯度因子分别为998.84、999.07、999.04、998.88、998.78、998.67、996.17。

表明杂质以及辅料不干扰本品的检测。

2.2.3 线性
精密称取盐酸帕罗西汀对照品适量，加甲醇-水溶解并稀释制成每毫升分别含盐酸帕罗西汀0.005、0.025、0.125、0.25和0.375 mg 浓度的溶液。

照含量测定方法试验，分别精密量取20 μl 注入
液相色谱仪，记录色谱图。

以相应浓度为C ，
盐酸帕罗西汀峰面积为A ，求得线性曲线，线性方程为A ＝12 579C ＋2.102 7，r ＝
1.000 0。

结果表明本品在结果表明本品在0.005～0.375 mg/ml 范围内，浓度与峰面积具有良好线性关系，见图4。

图4：线性关系图
2.2.4 精密度
取本品10片，去衣膜，研碎，精密称取细粉适量，加甲醇-水（80∶20）
适量，超声并不时振摇至少30 min ，使溶解，放冷，加甲醇-水稀释成每1 ml 中含帕罗西汀0.375 mg 的溶液，离心，每个浓度平行配制6份供试品溶液，照含量测定方法试验，分别精密量取20 μl 注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果见表1，由表中数据可以看出，本方法具有良好的重复性。

表1：方法的重复性试验
98.0
0.96
20.374 6 5 152.998.930.374 3 5 165.999.240.382 7 5 158.996.950.379 6 5 133.897.36
0.376 9
5 110.9
97.5
2.2.5 溶液稳定性试验
取精密度项下12.5 mg 规格的样品溶液，于室温下放置0、1、3、5、7、10、13、22、30、34 h 后，照含量测定方法试验，分别精密量取20 μl 注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果表明本品在室温条件下34 h 内具有良好的溶液稳定性。

见表2。

2.2.6 回收率
分别精密称取盐酸帕罗西汀对照品30 mg 、37.5 mg 、45 mg ，置50 ml 量瓶中，按处方量分别加入空白辅料，加甲醇-水适量，超声并不时振摇至少30 min ，使溶解，放冷，用甲醇-水稀释至
图2：盐酸帕罗西汀HPLC 紫外吸收光谱图
图3：破坏试验含量比较图谱
32中国处方药 第18卷 第12期·实验研究·
表2：室温放置溶液稳定性试验
时间（h）峰面积含量（%）
0 5 144.098.4
1 5 145.598.4
3 5 141.498.3
5 5 149.898.5
7 5 144.698.4
10 5 157.398.6
13 5 155.298.6
22 5 156.298.6
30 5 155.698.6
34 5 139.098.3
平均峰面积 5 148.9 98.5
RSD（%）0.13 0.13
刻度，摇匀，离心，精密量取续滤液3 ml，置10 ml量瓶中，用甲
醇-水稀释至刻度，摇匀。

每个浓度各制备3份，见表3。

表3：回收率测定结果
水平加入量
（mg）
测得量
（mg）
回收率
（%）
平均回收率
（%）
RSD
（%）
80%31.4531.40 99.9
99.90.33 31.1831.24 100.2
31.5631.41 99.5
100%40.5840.84 100.7
100.50.21 40.6140.83 100.5
40.6940.79 100.3
120%46.0245.93 99.8
99.70.30 46.1545.88 99.4
46.3546.35 100.0
2.2.7定量限
取盐酸帕罗西汀线性项下的对照品溶液，甲醇-水逐步稀释，照含量测定方法试验，记录色谱图。

按S/N＝10±1（噪音高度的10倍）计算定量限。

按S/N＝3±1（噪音高度的3倍）计算检测限。

结果见表4。

盐酸帕罗西汀的定量限浓度为0.3 μg/ml，定量限为6 ng，检测限浓度为0.1 μg/mL，检测限为2 ng。

7针的保留时间（t）、峰面积、峰高重复性RSD分别为0.05%、3.49%、2.80%。

表4：定量限测定结果
编号t（min）峰面积峰高S/N
1 5.29910.4 1.4910.9
2 5.29811.4 1.55 9.7
3 5.29310.
4 1.4
5 10.2
4 5.29310.7 1.48 10.0
5 5.29110.4 1.47 10.8
6 5.29410.9 1.55 10.1
7 5.29710.9 1.50 10.4
RSD（%）0.05 3.49 2.80-
2.2.8 耐用性试验
将通过改变不同的流速、流动相不同的比例、不同pH值来评估测定条件参数有微小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。

取本品，除去衣膜，研碎，精密称定细粉适量，置于100 ml量瓶中，加去氟帕罗西汀和N-甲基帕罗西汀杂质对照品适量，加甲醇-水适量，超声并不时振摇至少30 min，使溶解，放冷，加甲醇-水稀释至刻度，摇匀，离心，平行制备两份，照含量测定方法试验，精密量取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果见表5。

结果当色谱条件发生微小变化时，对含量测定结果无显著影响，不同条件下供试品溶液含量的RSD均小于2%，且主峰与前后杂质分离度均大于1.5。

表明本方法耐用性良好。

2.3样品的测定
取3批盐酸帕罗西汀缓释片样品，按照含量条件进行检测，见表6。

表6：盐酸帕罗西汀有含量测定结果
批号含量（%）平均标示含量（%）140101-A98.598.898.7
140102-A98.898.698.7
140103-A98.498.598.5
3 讨论
3.1色谱条件的选择
试验中采用Agilent ZORBAX SB C18（4.6×150 mm，5 μm）色谱柱，以0.6%磷酸溶液（加三乙胺调节pH至5.0）∶乙腈＝67∶33为流动相进行分离，经反复试验，Agilent ZORBAX SB C18可以将主峰与杂质峰进行较好的分离，本品在各破坏条件下，主成分峰与邻近峰分离度均大于2.0，分离良好。

且在各破坏条件下，主峰纯度均达990.00以上。

3.2 参考盐酸帕罗西汀片含量检测方法
采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；取磷酸铵3.96 g，加水720 ml，加乙腈280 ml、三乙胺10 ml，用冰醋酸调节pH至5.5，为流动相。

结果发现峰形较差，保留时间长。

经过优化，含量测定色谱条件增加盐酸帕罗西汀峰与去氟帕罗西汀峰与N-甲基帕罗西汀峰之间的分离度系统适用性条件，最终确定采用Agilent ZORBAX SB C18（4.6×150 mm，5μm）柱；以0.6%磷酸溶液（加三乙胺调节pH至5.0）∶乙腈＝67∶33为流动相；溶解样品溶剂为甲醇-水。

经方法验证在本色谱中，色谱峰保留时间适宜、峰形良好、专属性好，该方法能准确、可靠地测定盐酸帕罗西汀缓释片的含量。

参考文献
[1] 王申捷，孙凡，朱亮.选择性5-羟色胺再摄取抑制剂的临床应用进展[J].现代生物医学进展，2014，14（3）：571-574.
[2] 颜文伟.抗抑郁药的药理及临床应用[J].中国新药与临床杂志，1998，17（2）：105-106.
[3] 王燕.抗抑郁药的研究进展与应用评价[J].中国医院用药评价与分析，2005，5（2）：81-83.
[4] 孟新玲，房江山，刘远新，等.盐酸帕罗西汀片对帕金森病患者合并抑郁和焦虑症状的临床疗效[J].中国临床药理学，2013，29（6）：403-405.
[5] 刘虹雯，席智文.匹维溴胺联合盐酸帕罗西丁片治疗伴抑郁状态的肠易激综合症疗效观察[J].中国临床实用医学，2010，4（3）：23-24.
[6] 张超，孙腾达，李波军，等.盐酸帕罗西汀联合盐酸坦索罗辛治疗原发性早泄的临床研究[J].重庆医学，2014，43（15）：1868-1870.
[7] 周翠玲，王利群，谢惠君.帕罗西汀的临床应用进展[J].中国新药与临床，2003，22（1）：53-56.
[8] Keith S. Advances in psychotropic formulations[J]. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry，2006，30（6）：996-1008.
表5：耐用性试验结果
变化参数试验项目含量1%含量2%RSD（%）
分离度
前后
不同流速
（ml/min）
0.997.898.20.27 2.18 4.58
1.098.298.1
2.12 4.48
1.197.897.6
2.11 4.40
不同pH
4.897.796.10.90 2.11 3.50
5.098.298.1 2.12 4.48
5.297.79
6.6 2.09 5.02
不同流动
相比例（乙
腈）
3298.296.70.97 2.34 4.46
3398.298.1 2.12 4.48
3497.495.9 1.94 4.49。