抑菌试验方案

利用吸附法测定壳聚糖无纺布抑菌性能试验方案
一、实验原理：本实验参考了国标GB/T20944方法，根据我们的材料特性进行了微调。

即：选取革兰氏阴性菌（大肠杆菌（25922））和革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌（25923））两类代表性指示微生物。

将测试材料浸泡在活化好的菌悬液（浓度控制为107CFU/ml）中，设置不同处理时间，稀释涂布，平板单菌落计数，计算无纺布材料的抑菌性能。

二、实验方法：
2.1试验菌种的活化
1）冻干粉接种至大豆蛋白肉汤(TSB)培养基，37℃培养24h。

一部分用于抑菌试验，另一部分用于划线接种至斜面或平皿冷藏保藏（可保藏1个月）。

2）培养液稀释。

活化好的菌悬液用稀释液稀释20倍，取1ml培养液添加到19ml稀释液（应提前灭菌）中。

3）式样预处理。

大小合适的试样饱和吸水，灭菌处理。

（周教授负责）
4）菌悬液洗涤。

将稀释好的菌悬液转移到试样中，分别震荡15min 和30min，为防止微生物传代，影响试验结果，立即放入冰箱冷藏。

5）洗涤液梯度稀释。

处理后的洗涤液立即梯度稀释到10-1, 10-2,10-3,10-4和10-5。

具体方法：取1ml洗涤原液加入9ml稀释液此时为10-1梯度；取1ml稀释后的10-1菌液加入到9ml稀释液，此时为
10-2梯度；······。

6）涂布。

分别取10-3,10-4和10-5的稀释液200ul涂布到平板（计数培养基，简称EA），每个处理做2个平行，37℃，培养24-48h，计数。

7）抑菌效果评价。

参照GB/T20944。

三、试验简易流程
注：如果活化后的菌液浓度较高，可取10-4、10-5和10-6梯度稀释液涂布。

四：所需准备耗材：
1、大豆蛋白液体培养基（7.1，TSB）
250ml培养瓶装100ml 3瓶，2瓶分别接种，1瓶备用；
2、大豆蛋白固体培养基,（7.2，TSA）
250ml培养瓶装100ml 1瓶，到平板后用于菌种保藏；
3、稀释液（7.5）
15或18ml试管装9ml 50支，42支稀释，8支备用；4、计数固体培养基（7.6，EA）
250ml培养瓶装160ml 6瓶，准备50皿。

5、枪头5ml，1ml，200ml枪头各1盒。

6、75%酒精及棉球若干，玻璃棒15支
7、记号笔，标签纸若干。