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蔬菜水果中多农残检测样品前处理方法对比与分析
2010年1月以来，海南豇豆在全国多个地区连续多次被检测出水胺硫磷、甲胺磷、克百威等禁用农药，由此，农产品中的农药残留问题又一次进入了人们的视线，而农产品农残检测技术也经受了再次考验。

瓦里安公司可以为广大食品安全检测实验室提供从样品制备（SPE净化产品和装置）到消耗品（色谱柱等）、仪器分析、方法开发、数据处理及技术支持等一整套的技术解决方案，目前公司已经开发了众多分析方法和常见农药、兽药及抗生素化合物数据库，覆盖600多种农药及蔬菜、水果、饮用水或有机废弃物等多种复杂基质。

瓦里安公司基于国标GB/T 19648-2005方法和欧盟EN 15662 方法，开发了用于蔬菜和水果上的多农残检测样品前处理方案，包括固相支持液液萃取法(SSLLE 法)、QuEChERS方法和Carbon/NH2净化法。

将该前处理方案与设计独特、功能强大的瓦里安320-MS GC-MS/MS三重四极杆质谱仪配合使用，可组成强大的高毒农药残留分析解决方案。

以下是我们通过试验，得到的蔬菜、水果中多农残检测样品前处理及检测方案。

样品前处理方法
固相支持液液萃取法（SSLLE法）
①称样。

称取20g已匀浆过的蔬菜和水果样品。

②过滤。

加入70mL丙酮匀浆3min，抽吸过滤，收集萃取液。

过滤后的残渣再用30mL丙酮洗涤并过滤，然后合并萃取液。

③浓缩净化。

35℃旋转蒸发至残留体积达18mL左右，过ChemElut柱（20g，20mL，Varian Part No.12198008）净化。

④上样。

将净化后的萃取液载入ChemElut柱，平衡10min。

⑤洗脱。

用4×20mL乙酸乙酯分次进行洗脱。

⑥再次浓缩。

旋转蒸发浓缩近干，用5mL丙酮重新溶解，定容。

⑦检测。

取1mL制好的样作为测试样，直接进样1～2μL，用GC-PFPD或GC-MS/MS进行检测。

QuEChERS方法
①称样。

称取5g粉碎蔬菜或水果样品，放入50ml特氟龙离心管中。

②提取。

向离心管中加入10mL水、15ml乙腈和100µL内标（20µg/mL灭蚁灵丙酮溶液），充分振摇1min；再加入4g MgSO4、1g NaCl、1g无水柠檬酸三钠和0.5g柠檬酸氢二钠，充分振摇1min。

③离心。

在6000r/min离心5min。

④混合。

另取离心管加入25mg Bondesil PSA吸附剂（BondeSil PSA10g，Varian Part No..12213023）、230mg无水MgSO4和2mL萃取液。

⑤再次离心。

充分振摇30s，6000r/min离心1min。

⑥检测。

取1mL作为测试样，取上清液浓缩或直接转入样品瓶，直接进样1～2μL，用GC-PFPD或GC-MS/MS检测。

Carbon/NH2净化法（GB/T 19648-2005）
①称样。

称取10g水果、蔬菜样品，加入50mL乙腈。

②抽滤、定容。

匀浆、抽滤，用20mL乙腈淋洗滤纸上的残留物，合并滤液，最后用乙腈定容至100mL。

②静置。

量取20mL滤液，加入10g NaCl和20mL 0.5mol/L的磷酸缓冲液（pH7.0），充分振摇10min，静置使溶液分层，弃去水相层。

③脱水。

将乙腈层溶液过装有无水硫酸钠的漏斗，并用适量乙腈淋洗漏斗，收集全部滤液。

④浓缩。

在低于40℃温度条件下，浓缩近干，用2mL的乙腈/甲苯（3:1）重新溶解，待净化。

⑤SPE净化过程。

a 活化：用10mL乙腈/甲苯（3:1）将固相萃取小柱进行活化；b 上样：将2mL样品待测液载入Carbon/NH2（300mg/500mg 6mL，Varian Part
No..2264265032）；c 洗脱：用20mL乙腈/甲苯（3:1）进行洗脱；d浓缩：40℃
浓缩近干，定容至1mL。

⑥检测：直接进样1～2μL，用GC-PFPD或GC-MS/MS 进行检测。

以上三种方法均可以用于毒豇豆中甲胺磷和水胺硫磷的检测。

但固相支持液液萃取和QuEChERS方法的净化效果略逊于国标GB/T 19648-2005 Carbon/NH2净化法，前两种方法与一般的气相色谱检测器联用，可能会出现一些基质干扰，建议选用气相色谱与选择性更强的脉冲式火焰光度检测器PFPD或三重四极杆质谱仪GC-MS/MS配合使用，从而保证最佳检测效果，有效消除假阳性和假阴性结果。

常规高灵敏度GC-MS/MS分析方法
以下是结合GB/T 19648-2005 Carbon/NH2净化法和瓦里安320 GC-MS/MS
色谱质谱的二级质谱多反应监测（MRM）技术的一般分析方法，可用于食品安全实验室进行高灵敏度的农残检测。

色谱条件
色谱柱：VF-5ms，0.25µm，30mx 0.25mm（Varian Part No. CP 8944）；进样口条件：260℃不分流进样；进样体积：1.0μL；柱流速：1.0mL/min；柱温条件：80℃保持2min，30℃/min升至150℃，25℃/min升至200℃，4℃/min升至220℃，30℃/min升至290℃，保持8min；离子化方式：EI；碰撞气：2.0mTorr氩气；扫描时间：0.1s；检测器电压：1420V。

仪器自动优化扫描参数见表1。

图1 甲胺磷、久效磷、克百威及水胺硫磷空白样品、加标样品、基质加标样品的MRM色谱图
结果与结论
该分析方法的样品前处理方法采用国标GB/T 19648-2005 Carbon/NH2净化法，可同时检测近百种农药残留样品，图1是受关注度比较高的四种农药甲胺磷、久效磷、克百威及水胺硫磷空白样品、加标样品、基质加标样品的MRM色谱图（加标样品为样品称重时即加入混合标样的样品，加标浓度为50 g/kg，样品浓缩倍数为2倍；添加样品为阴性样品基质溶液加标，加标浓度为100pg/mL）。

由图1可以看出，该四种农药残留的回收率在80～120%以内，完全满足国标要求；结合GB/T 19648-2005 Carbon/NH2净化法，以及瓦里安320-MS GC-MS/MS仪通过惰性离子源和二级质谱多反应监测（MRM）技术，可有效去除基质干扰，增加对复杂基质中待测目标物检测的选择性，从而保证了复杂基质中农残定性定量分析的准确性，顶级的检测灵敏度，可使政府、蔬菜集散地更有效的实施对蔬菜和水果等中农残监测与管理，指导菜农科学合理用药。