实验二动物细胞的基本形态观察和显微测量

实验二动物细胞的基本形态观察和显
微测量
实验目的:
掌握不同细胞临时制片的制作方法。

观察不同细胞的基本形态。

掌握显微
镜和测微尺的基本使用方法。

熟悉捣髓法处死蟾蜍的方法。

熟悉各种常用解剖
器材的使用及细胞生物学实验绘图方法。

实验用品:材料和标本蟾蜍一只，人血液一滴
器材和仪器配有目镜测微尺的光学显微镜一台、载片若干、盖片若干、吸
水纸、手术器材一套、解剖盘一个、小平皿一个、表镊子、消毒牙签、镜台测
微尺一个。

试剂1%甲苯胺兰、1%甲基兰、Ringer氏液(两栖类用)
理论基础细胞的形态结构与功能相关是很多细胞的共同特点，在分化程度
较高的细胞更为明显，这种合理性是生物漫长进化过程所形成的。

例如:具有收缩机能的肌细胞伸展为细长形;具有感受刺激和传导冲动机能的神经细胞有长短不一的树枝状突起;游离的血细胞为圆形、椭圆形或圆饼形。

不论细胞的形状如何，细胞的结构一般分为三大部分:细胞膜、细胞质和细胞核。

但也有例外。

例如:哺乳类红细胞成熟时细胞核消失。

生物学临时制片的一般步骤是:1.取材;2.将材料放在载玻片上;3.固定;4.
染
色。

因材料的来源、性质和制片的目的不同，各种制片的四个步骤的方法、用料等不尽相同，并且有的制片可省略固定或染色的步骤。

测微尺是用来测定显微镜下细胞等微观结构的大小的。

测微尺分目镜测微
尺和镜台测微尺，两尺配合使用。

目镜测微尺是一个放在目镜像平面上的玻璃
圆片。

圆片中央刻有一条直线，此线被分为若干格，每格代表的长度随不同物
镜的放大倍数而异。

因此，用前必须测定。

镜台测微尺是在一个载片中央封固
的尺，长1毫米(1000μm)，被分为100格，每格长度是10微米。

实验内容一、细胞基本形态观察(一)蟾蜍脊髓压片的制备和脊髓前角运动
神经细胞的观察
1.取蟾蜍一只，破坏脑和脊髓，在口裂处剪去头部，除去延脑，剪开椎管，可见乳白色脊髓。

2.取下脊髓放在平皿内，用Ringer氏液洗去血液后放在载片上，剪碎。

3.将另一载片压在脊髓碎块上，用力挤压。

4.将上面的载片取下即可得到压片。

在压片上滴一滴甲苯胺兰染液，染色
10分钟。

5.盖上盖片，吸去多余染液。

在显微镜下观察。

实验结果:染色较深的小细胞是神经胶质细胞。

染成兰紫色的、大的、有多个突起的细胞是脊髓前角运动神经细胞，胞体呈三角形或星形，中央有一个圆
形细胞核，内有一个核仁。

(二)蟾蜍骨骼肌细胞的剥离与观察
1.剪开蟾蜍腿部皮肤，剪下一小块肌肉，放在载片上。

2.用镊子和解剖针剥离肌肉块成为肌束，继续剥离，可得到很细的肌纤维(肌细胞)。

3.尽可能拉直肌纤维。

在显微镜下观察。

结果:肌细胞为细长形，可见折光不同的横纹，每个肌细胞有多个核，分布于细胞的周边。

(三)蟾蜍肝脏压片的制备与观察
1.剪开蟾蜍腹腔，取一小块(约2~3mm3)肝放在平皿内，用Ringer氏液洗净，用镊子轻压将肝中的血挤出。

2.将肝组织放在载片上，制片方法同脊髓压片。

3.用甲基兰染液染色5min。

显微镜下观察。

结果:可见肝细胞核染成兰色，肝细胞紧密排列，挤成多角形。

(四)蟾蜍血涂片及人血涂片的制备与观察
1.剪开蟾蜍胸腔。

2.取一张载玻片，用左手拇指和食指夹持载玻片的两端，右手取一张推片，用其一角蘸取一滴蟾蜍心脏血液，滴放于载玻片的一侧。

3.然后，用推片的一端紧贴在血滴的前缘，载玻片与推片之间角度以30′
~45′为宜(角度越大血膜越薄，角度越小血膜越厚)，用力均匀向前推，使血液在载玻片上形成均匀的薄层，(图2-1和图2-2)室温中晾干。

显微镜观察。

结果:可见蟾蜍红细胞为椭球形，有核。

白细胞数目少，为圆形。

图2-1血涂片的制备4.人血涂片的制备与观察
取人血一滴，制片方法同上。

显微镜观察可见人红细胞为凹圆盘形，无核。

白细胞数目少，为圆形。

(五)人口腔上皮粘膜细胞临时制片(图2-3)
1.取载玻片和盖片各一片，擦拭干净，置于实验台的适当位置，并在载玻
片中央滴加一滴生理盐水，再取一根已消毒的牙签(用较粗的一端)在自己口腔
的颊部粘膜上刮取少量上皮细胞，轻轻涂于载玻片的水滴中。

刮取前最好先用
清水漱口。

2.加一小滴甲苯胺兰染液，染色5分钟，使粘膜上皮细胞染色，然后盖好
盖玻片，用小镊子取吸水纸，将盖片周围多余的染液吸干。

3.因此时细胞的折光性强、染色浅，所以视野应相对较暗，才能观察到细胞。

先用低倍镜找到物像，可见在视野中有许多被染成浅蓝色的小片片，挑选其中着色均匀，比较分散的细胞作高倍镜观察。

在高倍镜下，可见口腔粘膜上皮细胞呈扁平的不规则的多边形，表面有一层很薄的细胞膜(光镜下难与细胞质区分)，内部有染成深蓝色的细胞核，细胞核以外至细胞膜以内为浅蓝色的细胞质，使用细调节器进一步观察可见细胞质中有大小不等的颗粒状物质。

4.按生物绘图要求，绘制高倍镜下1~2个口腔粘膜上皮细胞，并标明各部分结构的名称。

二、显微测微尺的使用方法:
1.将镜台测微尺放在显微镜的载物台上夹好，小心转动目镜测微尺和移动镜台测微尺使两尺平行，记录镜台测微尺若干格所对应的目镜测微尺的格数。

2.按下式求出目镜测微尺每格代表的长度
目镜测微尺每格代表的长度(μm)=X10
三、测量人口腔上皮细胞从显微镜载物台上取下镜台测微尺，换上人口腔上皮细胞标本，测量细胞、细胞核的长短径。

作业1.分别求出使用低倍镜(10X)，高倍镜(40X)时目镜测微尺每格代表的长度:
低倍镜:目镜测微尺每格代表的长度=XlO(μm)=μm
高倍镜:目镜测微尺每格代表的长度=XlO(μm)=μm2.分别绘制所观察的6种细胞并注明基本结构。

3.计算蟾蜍红细胞的核质比例。

计算细胞、细胞核体积的公式:
圆形V=4/3πr3(r为半径)
椭圆形V=4/3πab2(a、b为长、短半径)
核质比N/D=Vn/(Vc-Vn)(Vn为核的体积，Vc是细胞质的体积)
附录:生物绘图生物绘图是医学生必备的基本功，包括绘制肉眼观察到的活体生物、制作的各种不同类型的标本和显微镜下所观察的标本。

显微镜下生物绘图的基本方法和要求:
生物绘图工具:HB铅笔、绘图橡皮、直尺绘图纸应放在显微镜旁边、绘图
人执笔手一侧的桌面上。

图的位置、大小应与绘图纸相适。

因图的右侧和下方
需写文字说明，所以图应绘在绘图纸上偏左上方的位置。

应找到最典型、最能
说明绘图目的的物像来绘图。

绘图内容应真实、工整干净。

图中各结构的形态、位置、大小比例和深浅一定要真实合理。

物像中的明暗部分要用疏密不同的铅
笔尖点成的细小点表示在绘图中。

图中的名称标写应尽量从图中向右引出直线
后水平右延，各引线末端在同一垂线上。

名称应用汉字写在引线末端的右侧。

在图的正下方写出所绘标本的名称;在图的右下角写明放大倍数、绘图时间和绘图人。

所有文字一定要工整清晰。