油茶叶斑病菌的分离、鉴定及生物学特性研究
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1 材料与方法 1.1 材料与培养基 1.1.1 试验材料 采集于中国热带农业科学院油茶研究中心油茶种 质资源圃的感病油茶叶片。 1.1.2 培养基 培养基配制方法参考余凤玉等[5]报道。 1.2 方法 1.2.1 病原菌的分离 采用常规组织分离法分离病原菌[6]。 1.2.2 致病性测定 按照柯赫氏法则进行致病性测定。 1.2.3 病原菌形态学观察 将纯化后的病原菌接种到 PDA 培养基平板上， 在 25 ℃ 恒温培养箱中黑暗培养，观察记录菌落形态 学特征。 1.2.4 DNA 提取、PCR 扩增及序列测定 将分离菌株在 PDA 培养基上培养 5～7 d 后，收 集新鲜的湿菌体 0.1～0.3 g，用液氮在研钵中磨碎， 装入 1.5 mL 的离心管中，然后用基因组 DNA 快速提 取试剂盒（真菌）提取 DNA。
作者简介：刘小玉（1986—），女，江西九江人，硕士研究生，助理研究员，主要从事油茶丰产 栽培技术研究。E-mail：liuxiaoyu06120210@。
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Plant Protection 植物保护
油茶与油橄榄、油棕、椰子并称为世界四大木 本油料树种，为我国特有的油料作物。油茶不仅 能绿化荒山、保持水土，同时具有显著的经济效 益、积极的生态效益和良好的社会效益，发展广阔 前景[1]。
关键词：油茶；可可毛色二孢菌；鉴定；生物学特性
Identification and Characterization of Camellia oleifera Leaf Spot Disease Pathogen
LIU Xiaoyu, YU Fengyu, FU Dengqiang, YANiangqiu (Coconut Research Institute/Camellia Research Center, CATAS, Wenchang, Hainan, 571339 )
Abstract: Leaf spot disease survey was taken on pathogen isolation and identification of Camellia oleifera in Camellia Research Center, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences. The pathogen was identified through culture characteristics, morphological characteristics and genetic molecular analysis. The sequence was compared with the highly homologous strains in Genbank, and the results showed that the pathogen 20-1 was Lasiodiplodia theobromae. In vitro culture showed that PDA medium was the best for the mycelial growth of pathogen. Temperature ranged from 20 to 35 ℃ were optimum for its mycelia growth. The effects of pH and light intensity on the growth of mycelium were not obvious. And fructose was the best carbon source and sodium nitrate was the best nitrogen source.
Key words: Camellia Oleifera; Lasiodiplodia theobromae; Identification; Biological characteristic
基金项目：中国热带农业科学院基本科研业务费专项资金（1630152018006）； 中国热带农业科学 院基本科研业务费专项资金（1630022017014）。
随着油茶在全国适宜省区种植面积的逐年扩大， 油茶病害种类也有所增多[2]：早在 1981 年就有油茶软 腐病病原菌鉴定的报道[3]；牛晓庆等[4]从海南五指山油 茶园区采集到油茶叶枯病叶，并做了病原菌分离、鉴 定及生物学特性研究。但目前尚未见由可可毛色二孢 菌引起的油茶叶斑病的相关报道。
近年来，油茶叶斑病发病较为广泛，严重影响 油茶的正常生长，使挂果率降低。油茶可可毛色二孢 叶斑病主要为害叶片，叶片染病后，常提早脱落，新 梢出现枯死现象，导致油茶产量大幅下降。病斑由小 到大呈不规则状，红褐色至灰褐色，病斑连片成大病 斑，病健界限明显，病斑处凹陷。本试验通过组织分 离法对病原菌进行分离、培养及致病性检测，并对 其形态学及生物学特性进行研究，旨在明确病原菌 种类，探明其发生传播规律，为防治该病菌奠定研 究基础。
植物保护 Plant Protection
油茶叶斑病菌的分离、鉴定 及生物学特性研究
刘小玉 余凤玉 付登强 杨伟波 贾效成 陈良秋 （中国热带农业科学院椰子研究所/油茶研究中心 海南文昌 571339）
摘 要：对中国热带农业科学院油茶研究中心油茶资源圃采集到的油茶叶斑病叶片进 行病原菌分离、鉴定，并研究其生物学特性。通过对病原菌培养特性、形态特征的观察及 rDNA 的转录间隔区（ITS）序列测定，与Genbank中同源性较高的菌株进行序列对比，最 后将菌株 20-1 确定为可可毛色二孢菌（Lasiodiplodia theobromae）。生物学特性研究表明， 20-1 菌丝在 PDA 培养基上生长最快，菌丝生长的最适宜温度是 20～35 ℃，pH 值及光照 对菌丝生长的影响均不大，果糖为最佳碳源，硝酸钠为最佳氮源。
作者简介：刘小玉（1986—），女，江西九江人，硕士研究生，助理研究员，主要从事油茶丰产 栽培技术研究。E-mail：liuxiaoyu06120210@。
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Plant Protection 植物保护
油茶与油橄榄、油棕、椰子并称为世界四大木 本油料树种，为我国特有的油料作物。油茶不仅 能绿化荒山、保持水土，同时具有显著的经济效 益、积极的生态效益和良好的社会效益，发展广阔 前景[1]。
关键词：油茶；可可毛色二孢菌；鉴定；生物学特性
Identification and Characterization of Camellia oleifera Leaf Spot Disease Pathogen
LIU Xiaoyu, YU Fengyu, FU Dengqiang, YANiangqiu (Coconut Research Institute/Camellia Research Center, CATAS, Wenchang, Hainan, 571339 )
Abstract: Leaf spot disease survey was taken on pathogen isolation and identification of Camellia oleifera in Camellia Research Center, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences. The pathogen was identified through culture characteristics, morphological characteristics and genetic molecular analysis. The sequence was compared with the highly homologous strains in Genbank, and the results showed that the pathogen 20-1 was Lasiodiplodia theobromae. In vitro culture showed that PDA medium was the best for the mycelial growth of pathogen. Temperature ranged from 20 to 35 ℃ were optimum for its mycelia growth. The effects of pH and light intensity on the growth of mycelium were not obvious. And fructose was the best carbon source and sodium nitrate was the best nitrogen source.
Key words: Camellia Oleifera; Lasiodiplodia theobromae; Identification; Biological characteristic
基金项目：中国热带农业科学院基本科研业务费专项资金（1630152018006）； 中国热带农业科学 院基本科研业务费专项资金（1630022017014）。
随着油茶在全国适宜省区种植面积的逐年扩大， 油茶病害种类也有所增多[2]：早在 1981 年就有油茶软 腐病病原菌鉴定的报道[3]；牛晓庆等[4]从海南五指山油 茶园区采集到油茶叶枯病叶，并做了病原菌分离、鉴 定及生物学特性研究。但目前尚未见由可可毛色二孢 菌引起的油茶叶斑病的相关报道。
近年来，油茶叶斑病发病较为广泛，严重影响 油茶的正常生长，使挂果率降低。油茶可可毛色二孢 叶斑病主要为害叶片，叶片染病后，常提早脱落，新 梢出现枯死现象，导致油茶产量大幅下降。病斑由小 到大呈不规则状，红褐色至灰褐色，病斑连片成大病 斑，病健界限明显，病斑处凹陷。本试验通过组织分 离法对病原菌进行分离、培养及致病性检测，并对 其形态学及生物学特性进行研究，旨在明确病原菌 种类，探明其发生传播规律，为防治该病菌奠定研 究基础。
植物保护 Plant Protection
油茶叶斑病菌的分离、鉴定 及生物学特性研究
刘小玉 余凤玉 付登强 杨伟波 贾效成 陈良秋 （中国热带农业科学院椰子研究所/油茶研究中心 海南文昌 571339）
摘 要：对中国热带农业科学院油茶研究中心油茶资源圃采集到的油茶叶斑病叶片进 行病原菌分离、鉴定，并研究其生物学特性。通过对病原菌培养特性、形态特征的观察及 rDNA 的转录间隔区（ITS）序列测定，与Genbank中同源性较高的菌株进行序列对比，最 后将菌株 20-1 确定为可可毛色二孢菌（Lasiodiplodia theobromae）。生物学特性研究表明， 20-1 菌丝在 PDA 培养基上生长最快，菌丝生长的最适宜温度是 20～35 ℃，pH 值及光照 对菌丝生长的影响均不大，果糖为最佳碳源，硝酸钠为最佳氮源。