新生隐球菌的致病机理PPT课件

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新生隐球菌对C57BL/6小鼠大脑皮质作用研究
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初步结论
新生隐球菌入血后到达血脑屏障， 通过相关细胞因子如IL-6和VEGF等作用引起 脑微血管内皮细胞的凋亡， 紧密连接开放，细胞间隙增大，并可能使血脑 屏障完整性被破坏， 穿越血脑屏障，感染宿主脑组织
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差异表达蛋白点肽指纹谱鉴定
S100A10 Prx Ⅰ Prohibitin (PHB) HSP27 Malate dehydrogenase CacyBP PSA7_HUMAN cofilin
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隐球菌嗜中枢性可能的相关机制
增强细胞骨架活动能力，促进细胞胞吞胞吐活动 减少HUVEC对氧应激的耐受能力，细胞损伤增 加，增殖能力下降 促进细胞凋亡 影响了HUVEC正常的细胞内信号转导过程 抑制细胞能量代谢
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新生隐球菌侵袭血脑屏障EC扫描电镜结果
A: 对照组 B: 2h C: 6h D: 12h
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HUVEC Bcl-2(抑凋亡基因)的表达被抑制
A：对照组 B：C2HhENCLI：6h：D：12h
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HUVEC Bax (凋亡基因)的表达被启动
A：对照组 B：C2HhENCLI：6h：D：12h
Brain
Blood stream
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隐球菌病
病原菌: 易感因素 :
感染途径 : 易感器官： 预后 :
分布 :
新生隐球菌
HIV, 淋巴瘤, 激素治疗, 器官移植 原发性CD4 淋巴细胞减少 吸入，皮肤，胃肠道？ 脑、肺、皮肤、骨和关节
未治疗的脑膜炎死亡率为100% 世界范围
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隐球菌皮肤致病性中的影响因素
免疫抑制的作用可以使隐球菌感染皮损出现 时间提前，感染加重。 无荚膜株与父代有荚膜株在皮肤的致病力方 面没有明显差别 两个变种之间的致病力没有显著差别
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新生隐球菌对血脑屏障内皮细胞凋亡的影响
A: 对照组 B: 2h C: 6h D: 12h
新生隐球菌侵袭血脑屏障EC细胞的凋亡率
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新生隐球菌侵袭血脑屏障透射电镜
A: 对照组 B: 0.5h C: 0.5h D: 0C.H5EhNLEI : 0.5h F: 6h G: 6h H: 12h
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病原体穿越血脑屏障的方式
1
2
3
ECM
1: 细胞内侵袭 2: 细胞旁通过－打开紧密连接 3: 木马机制：通过巨嗜细胞穿越
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病原体 巨嗜细胞 血脑屏障 紧密连接
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检测新生隐球菌通过血脑屏障的体外模型
新生隐球菌
血液侧 脑侧
Filterinsert
HBMEC 单层 半通透膜
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新生隐球菌的毒性因子
荚膜 黑素 磷脂酶 37 ℃下生长良好
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新生隐球菌致病机理中 几个关键问题
新生隐球菌是如何穿过血脑屏障后进入中枢 神经系统的？ 为什么新生隐球菌易于感染中枢神经系统？ 新生隐球菌进入机体的途径是否只有吸入肺 部后入血一个？
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新生隐球菌通过血脑屏障的机制研究
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皮肤隐球菌感染的研究
小鼠原发性皮肤隐球菌感染模型的建立 宿主免疫状态、隐球菌变种和荚膜与皮肤 隐球菌感染的关系 小鼠隐球菌皮肤感染后是否发生播散 人角质形成细胞株－HaCat体外与新生 隐球菌相互作用
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小鼠原发性皮肤隐球菌感染模型
传染性软疣样皮损
结节样皮损
溃疡
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PAS染色
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小鼠隐球菌感染后的血行播散
免疫抑制与免疫正常小鼠各个脏器及血液真菌培养 均为阴性 免疫抑制小鼠血清乳胶凝集试验阳性 乳胶凝集试验是目前比较成熟的技术，在去除试验 本身因素影响后，其阳性率接近100％ 免疫严重受损的患者，皮肤局部创伤后大剂量接种 隐球菌还是可能引起播散性的隐球菌感染
CHANGZHENG HOSPITAL, SHANGHAI
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隐 球 菌 病 的 致 病 菌
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C
C.
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MATa X MATa
Life Cycle
Mature basidia
a
Conjugation
CHENLI Dikaryotic hyphae
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Cryptococcosis: Route of infection and dissemination
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新生隐球菌对血脑屏障紧密连接通透性的影响
紧密连接胞质附着蛋白 ZO-1 血管渗透因子VEGF
IL-6
HUVEC 紧密连接相关蛋白表达
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新生隐球菌对C57BL/6小鼠大脑皮质作用研究
大脑皮质透射电镜 A：C group B：24h C：72h D：C group E：24h F：72h
人脐静脉内皮细胞（HUVEC）建立血脑屏障 模型，观察新生隐球菌对HUVEC的影响 新生隐球菌静脉感染C57BL/6小鼠后，检测 大脑皮质内新生隐球菌感染情况，大脑皮质 内细胞凋亡及大脑皮质中特异蛋白的表达
I
9
Mouse model of cryptococcosis
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血脑屏障模式图
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大脑皮质PAS染色 A：C group B：CTX group C：0.5h D：2h E：6h F：12h G：24h H：72h
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新生隐球菌对C57BL/6小鼠大脑皮质作用研究
小鼠大脑皮质Bcl-2在 不同时相点的比较
不同时相点的小鼠大脑皮质 凋亡细胞比较
不同时相点的小鼠大脑皮质 Bax比较
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血管内皮细胞总蛋白差异表达谱
实验组蛋白二维凝胶电泳图谱
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对照组蛋白二维凝胶电泳图谱
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实验组与对照组细胞蛋白表达差异
共找到可信差异表达蛋白点19个 5个蛋白点仅在对照组细胞中表达 3个蛋白点仅在实验组细胞中表达 10个蛋白点在实验组细胞中表达降低 1个蛋白点在实验组细胞中表达升高
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隐球菌脑膜炎发病机制
新生隐球菌的跨膜作用 穿越脑微血管内皮细胞紧密连接 脑微血管内皮细胞凋亡 其它相关因子导致的通透性的增加
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新生隐球菌嗜中枢性的研究
利用蛋白质组学技术分析新生隐球菌与 血管内皮细胞共孵育后血管内皮细胞蛋 白质谱的变化 筛选差异表达蛋白，并在基因的转录层 面进行验证