拟南芥的栽培

拟南芥的栽培
拟南芥生长周期短，6∽8周即可完成从种子到种子的整个生活周期。

1.播种
腐殖质土：珍珠岩或赭石=2 : 1，播种前土壤混合物进行高压灭菌30 min，以杀死可能混有的害虫。

通常使用培养皿点播拟南芥种子，点播时使用琼脂糖浓度为0.8 %的1/2 MS培养基进行点播种子（因为该琼脂糖浓度有利于在不伤根的情况下取出培养基中的小苗，移植至土壤中）。

直接土壤播种后，将播有种子的容器移至低温条件下（2∽4 ℃）2∽4 d，以破除种子休眠（对新鲜收获的种子尤为重要），在种子发芽期间必须保持土壤高湿度，故容器需要用塑料膜覆盖1周左右揭去。

2.生长发育条件控制
光：光强度为120∽150 umol/(m2•s)，光周期为16 h光照，8 h黑暗。

长日照促进拟南芥提前开花，使叶数量减少且降低种子生成，较短日照有利于营养生长。

温度：拟南芥最适生长温度为25 ℃左右（对于迟开花拟南芥生态型来说，幼苗期要给以4 ℃左右几周的春化处理，以破除休眠）。

水分：拟南芥两片真叶开始伸展之前必须避免干旱，但供水过量会引起土表藻类和真菌的生长；当真叶长出后，灌水频率可相应减少（如每周一或两次），至长角果充实阶段必须保证水分供应，以利于种子形成，但当长角果进入成熟阶段时，较低湿度（< 50 %）是有利的。

营养：营养贫瘠的植株叶呈微淡绿色，植株矮、提早开花，且种子着生少；营养充足的健壮植株呈暗绿色。

防止杂交：防止昆虫进入导致杂交，各品系种植之间的距离>20 cm，从而防止不同品系的花相互接触。

3.拟南芥的花浸法
注意事项：当拟南芥花序枝刚伸出时，摘除初生花序枝，促进其长出更多的花序枝，并移至长日照（16∽24 h光照/d）下生长，约一周后进行转化。

正常的生长条件下，转化约3周后收获种子以供鉴定。

确认再生植株为转基因植株的方法有：Southern印迹，报告基因的活性测定和组织化学等鉴定。

在取得一系列突变体后，可用功能互补的转化法来鉴定一个基因，即：用某种途径取得的DNA片段去转化一个功能缺失的突变体，如果转化后能够补偿基因功能突变表型的话，那么这个片段即为含目的基因片段。