沉淀分离技术—有机溶剂沉淀法分离超氧化歧化酶(生物分离技术课件)

任务4.3 有机溶剂沉淀法分离超氧化歧化酶
学习目标
① 了解有机溶剂沉淀法分离的原理；
② 能够进行有机溶剂沉淀法操作。
重难点
重点：了解常用有机溶剂的选择和计算；
难点：了解有机溶剂沉淀法的影响因素。
目录
有机溶剂沉淀法分离的原理
常用有机溶剂的选择和计算
有机溶剂沉淀法的影响因素
有机溶剂沉淀法操作注意事项
一.有机溶剂沉淀法分离的原理
利用与水互溶的有机溶剂(如甲醇、乙醇、丙酮等)能使蛋白质在水
中的溶解度显著降低而沉淀的方法，称为有机溶剂沉淀。
一.有机溶剂沉淀法分离的原理
有机溶剂引起蛋白质沉淀的主要原因是加入有机溶剂使水溶液的介
电常数降低，因而增加了两个相反电荷基团之间的吸引力，促进了蛋白
质分子的聚集和沉淀。有机溶剂引起蛋白质沉淀的另一种解释认为与盐
析相似，有机溶剂与蛋白质争夺水化水，致使蛋白质脱除水化膜，而易
于聚集形成沉淀 。
一.有机溶剂沉淀法分离的原理
沉淀
原理1
静电作
脱水作
原理2
用
用
二.常用有机溶剂的选择和计算
1.有机溶剂的选择
水溶
性
小
无限互溶
介电
常数
致变
性
小
二.常用有机溶剂的选择和计算
1.有机溶剂的选择
毒性
低
成本
小
二.常用有机溶剂的选择和计算
2.有机溶剂的剂量的计算
V=
0 2 −1
100−2
Байду номын сангаас
三.有机溶剂沉淀法的影响因素
1.温度
三.有机溶剂沉淀法的影响因素
2.浓度
蛋白质5~20mg/mL
多糖1%到2%
三.有机溶剂沉淀法的影响因素
3.pH
溶解度
低
pH
杂质
等电点
三.有机溶剂沉淀法的影响因素
4.金属离子
复生合物
0.05mol/L以下