高效液相色谱串联质谱法测定普洱茶中草甘膦残留的不确定度评定

高效液相色谱串联质谱法测定普洱茶中草甘膦残留的不确定度评定
作者：罗发美，伍旭东，刘新月
来源：《现代食品》 2019年第22期
罗发美，伍旭东，刘新月
（普洱市质量技术监督综合检测中心，云南?普洱?665000）
Luo Famei, Wu Xudong, Liu Xinyue
(Pu’er City Quality and Technical Supervision Comprehensive Testing Center, Pu’er?665000, China)
摘?要：依据标准检验SN/T 3983-2014《出口食品中氨甲基酸类有机磷除草剂残留量的测
定液相色谱-质谱/质谱法》测定普洱茶中的草甘膦残留量，对测定结果的不确定度进行分析，计算了合成标准不确定度和扩展不确定度。

实验结果表明：当置信概率为95%、包含因子k=2时，扩展不确定度为0.2 mg·kg-1。

此外，校准曲线和测试方法精密度对测量不确定度的影响较大，检测人员应对这些影响因素进行重点控制，以提高检测结果精确度。

关健词：普洱茶；草甘膦；不确定度
Abstract：Glyphosate residues in tea were determined by HPLC-MS/MS method and the uncertainty of determination result was analyzed and quantified. The expanded uncertai nty of determination was calculated to be 0.2 mg·kg-1 from the experimental data when the confidence level was 95 % and factor (k) was 2. It was found that the uncertainty mainly derived from the uncertainty of the uniformity of the samples and the precision of test methods. Some test skills used to improve the quality control were discussed.
Key words：Pu’er tea; Glyphosate; Uncertainty
中图分类号：O65
草甘膦是一种除草剂，使用时以叶面喷施为主。

2015—2017年，茶叶中草甘磷残留被检出超标产品8例，均存在于各省、市、区检测结果中，有4批次产品检出值超过3 mg·kg-1，超出现限量值3倍以上，最高1例达4.12 mg·kg-1。

目前，由草甘膦引起的水体污染、植被破坏、牲畜中毒等案件逐年增加[1]。

根据《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》（GB 2763-2016）[2]，茶叶中草甘膦的最大残留限量为1 mg·kg-1。

本文依据检验检疫行业标准检验方法《SN/T 3983-2014 出口食品中氨基酸类有机磷除草剂残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》[3]，根据《化学分析中不确定度的评估指南》（CNAS-GL06）[4]和《测量不确定度评定与表示》（JJF1059-1999）[5]，采用实际样品添加标准溶液的方法评定不确定度的来源，并给出了普洱茶中草甘膦的扩展不确定度。

1?材料与方法
1.1?试剂
草甘膦标准品：纯度大于99.0%；硼酸盐；9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC-Cl）；盐酸溶液；乙腈：色谱纯；甲酸：色谱纯；二氯甲烷：色谱纯。

1.2?设备
3200 QTRAP高效液相色谱串联质谱仪（美国AB Scies）；Diret-Q5型超纯水机（法国Milipore公司）；AS3120A型超声清洗仪（天津奥特赛恩斯仪器有限公
司）；PV-1型小型旋涡混匀器（德国IKA公司）；M27942B型移液枪：（德国eppendorf 公司）；HH-6型数显恒温水浴锅（江苏省金华市荣华仪器制造有限公司）。

1.3?试样提取
称取2 g（精确至0.01 g）试样于50 mL具塞离心管中，旋涡振摇30 s，再加入8 mL水和2 mL二氯甲烷，高速匀浆提取10 min，于4 000 r·min-1离心5 min。

取上清液6 mL到15 mL离心管中，再加入4 mL二氯甲烷，4 000 r·min-1离心5 min，取上清液4 mL到15 mL 离心管中，盐酸调节pH值至2，吸取1 mL提取液于CAX固相萃取柱中，弃去流出液，用12 mL 淋洗液洗脱，收集洗脱液，旋蒸至近干，加入1.0 mL 5%硼酸盐缓冲溶液，吸取300 μL硼酸盐缓冲溶液到净化液中，再加入200 μL 9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC-Cl），旋涡震摇静置过夜衍生后供液相色谱串联质谱测定。

1.4?测定
1.4.1?色谱条件
（1）色谱柱。

C18色谱柱，150 mm×2.1 mm（内径），粒度2.7 μm；
（2）流动相。

A：乙腈（含0.1%甲酸）；B：
5 mmol·L-1乙酸铵水溶液（含0.1%甲酸）；流速：
0.3 mL·min-1；柱温：30 ℃，梯度洗脱程序见表1。

式（1）中：X为式样中草甘膦的含量，单位mg·kg-1；C为校准曲计算出的式样读出的试样溶液中草甘膦的浓度，单位ng·mL-1；V为定容体积，单位mL；m为试样量，单位g。

2.2?标准品
本实验所用标准品为固体，所以考虑需标准品称量引入的不确定度。

2.3?天平称量样品质量
质量m由已扣除皮重的称量得出。

制造商的说明书确认扣除皮重称量的两个不确定度来源：重复性（归并为方法重复性中）和天平最大允差（包括天平的灵敏度及其线性，其中灵敏度可
忽略，因为减量称量是用同一架天平在很窄范围内进行的）。

2.4?试样体积
体积的不确定度主要由体积量器的不确定度引起，主要有2个来源：量器最大允差误差引
起的不确定度和由实验室温度变化引起的体积不确定度。

表2为不确定度来源列表。

3?不确定度各分量的计算
3.1?方法精密度
2 g试样，用10 mL提取液提取，添加100 μg·L-1浓度的草甘膦标液，按测试程序进行
前处理，一共处理6个平行，结果如表3所示。

合成相对标准偏差RSD(p)为：
按照评定不确定度的公式，计算普洱茶中草甘膦残留量的合成不确定度为：
统一取置信水平95%，k=2，相应扩展不确定度为0.2 mg·kg-1，当样品称样量为2.0 g，k=2（95%置信度），草甘膦添加量为500 mg·kg-1时，用高效液相色谱串联质谱法测定结果为（479.8±0.2）mg·kg-1。

参考文献：
[1]侯占伟，王朝虹.高效液相色谱法测定水中的草甘膦[J].刑事技术，2003（6）：9-10.
[2]国家卫生和计划生育委员会，国家食品药品监督管理总局.GB 5009.87-2016食品安全国家标准食品中磷的测定[S].北京：中国标准出版社，2016.
[3]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.SN/T 1923-2007 进出口食品中草甘膦残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法[S].北京：中国标准出版社，2007.
[4]中国实验室国家认可委会.化学分析中不确定度的评估指南（CNAS-GS06）[M].北京：中国计量出版社，2002.
[5]国家质量技术监督局.JJF1059-1999 测量不确定度评定和表示[S].北京：中国计量出版社，2000.。