常用缓冲液配置之欧阳道创编

实验室常用缓冲液配置方案
1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl 配制量：1 L配制方法：
1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA
配制量：1 L配制方法：
1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。

3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。

4. 室温保存。

3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)
组份浓度：1.5 M Tris-HCl
配制量：1 L配制方法：
1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

4)3 M醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml 配制方法：
1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解
2.加入冰醋酸调节pH值至5.2
3.加去离子水将溶液定容至100ml
4高温高压灭菌后，室温保存。

5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4
配制量：1 L配制方法：
1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。

4. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer 中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

6)10 M醋酸铵组份浓度：10 M醋酸铵
配制量：100 ml
配制方法：
1. 称量77.1 g醋酸铵置于100～200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。

3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。

4. 密封瓶口于室温保存。

注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7)苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)配制方法：
1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。

氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

8）10％(W/V) SDS组份浓度：10％(W/V)SDS
配制量：100ml
配制方法：
1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解
2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2
3.将溶液定容至100ml后，室温保存。

9）2 N NaOH组份浓度：2 N NaOH
配制量：100 ml
配制方法：
1. 量取80 ml去离子水置于100～200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。

2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。

4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

10）2.5 N HCl组份浓度：2.5 N HCl
配制量：100 ml
配制方法：
1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N)，均匀混合。

2. 室温保存。

11）5 M NaCl组份浓度：5 M NaCl
配制量：1 L配制方法：
1. 称取29
2.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。

3. 高温高压灭菌后，4℃保存。

11）20％(W/V) Glucose组份浓度：20％(W/V) Glucose 配制量：100 ml
配制方法：
1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。

3. 高温高压灭菌后，4℃保存。

12）Solution I(质粒提取用)组份浓度：25 mM Tris-HCl （pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose
配制量：1 L配制方法：
1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。

2. 高温高压灭菌后，4℃保存。

3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。

13）Solution II(质粒提取用)组份浓度：200mM NaOH，1％(W/V)SDS
配制量：500ml
配制方法：
1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中
10％SDS 50ml
2N NaOH 50ml
2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀
3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌
14）Solution III(质粒提取用)组份浓度：3 M KOAc, 5 M
CH3COOH
配制量：500 ml
配制方法：
1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。

2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。

3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。

4. 高温高压灭菌后，4℃保存。

15）0.5 M EDTA(pH8.0)组份浓度：0.5 M EDTA
配制量：1 L配制方法：
称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。

3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH)。

注意：pH 值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4. 加去离子水将溶液定容至1 L。

5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。

6. 室温保存。

16）1 M DTT
组份浓度：1 M DTT
配制量：20 ml
配制方法：
1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。

2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。

3. 适量分成小份后，-20℃保存。

17）10 mM ATP 组份浓度：10 mM ATP
配制量：20 ml
配制方法：
1. 称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。

2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，搅拌溶解。

3. 适量分成小份后，-20℃保存。

一.常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为
减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg 的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g 的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。

100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。

分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L 加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。

溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA 酶失活。

用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。

（配制过程中要戴手套）
5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。

10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解
后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

用水定容至1L。

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制）
2.5％X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。

100×Denhardt试剂（Denhardt's regent）
依照上表称取各组分，溶于水中定容。

过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。

10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）
将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃。

100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。

10mmol/L dNTP混合液
20％PEG 8000/2.5M NaCl
加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。

20×SSC
溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加100ul DEPC 于100ml
水中，使DEPC的体积分数为0.1％。

在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。

DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionized formamide）直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。

经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphate buffer）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。

配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。

TE（用于悬浮和贮存DNA）
Tris缓冲液（Tris-HCl buffer）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。

二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液
5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液
染料
1％溴酚蓝（bromophenol blue）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。

用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

凝胶上样液（gel loading solutions）6×碱性凝胶上样液（室温贮存）
6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）
6×
蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）
三.常用培养基
1） LB 培养基将下列组分溶解在0.9L 水中：
如果需要用1N NaOH （～1ml ）调整pH 至7.0，再补足水至1L 。

注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L 。

SOB 培养基将下列组分溶解在0.9L 水中：
用水补足体积到1L。

分成100ml的小份，高压灭菌。

培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

2）SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml 灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。

3）TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：
各组分溶解后高压灭菌。

冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g 的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。

高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。

4）2×YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中：
如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平
板添加琼脂粉7g/L。

5）YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中：
用水补足体积为1L后，高压灭菌。

建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。

为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

四.常用抗生素
1）氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

2）羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

3）甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

4）卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

5）氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg 氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

6）链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

7）萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

8）四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。

分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。

常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。