医院实验室白细胞(WBC)手工法计数操作规程

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实验室白细胞(WBC)手工法计数操作规程
一、目的
二、检测原理
三、试剂与仪器
四、标本采集及处理
1、采血步骤
2、注意事项
3、抗凝剂选择
4、标本送检
5、标本处理
五、操作步骤
计算与参考值
六、临床意义
1、生理变化
2、病理变化
一、目的
根据白细胞的高低变化，协助各种相关疾病的诊断。

二、检测原理
用稀醋酸溶液，将血液稀释一定倍数并破坏红细胞后，滴入计数盘中，在显微镜下计数一定范围中的白细胞数，并经换算即可求得每升血压计液中各种白细胞的总数。

三、试剂与仪器
1%Hcl：浓盐酸1ml加10g/L美蓝(或结晶紫)数滴加蒸馏水至100ml.醋酸可溶解红细胞；美蓝（或结晶紫）可使白细胞核略为着色,并易与红细胞稀释液区别。

显微镜；血细胞计数盘；微量吸管。

四、标本采集及处理
EDTA抗凝血或手指血。

1、采血步骤
（1）登记：登记的内容包括病人的姓名，病历号，采血时间，登记编号，医生姓名，送检部门等。

（2）识别病人：问清病人并识别病人是至关重要的。

（3）病人的体位：坐位采血；卧位采血；采血时病人的口中不准含食物、口香糖等，以防意外。

（4）选择适当的静脉，最宜采血的肘窝静脉，也可在腕，手，踝静脉采血。

2、注意事项
（1）病人宜处于休息状态，并且在早餐前采血（乳糜血影响检测结果）。

（2）针头不应小于21GAVGE。

国际推荐用21G1.5或20G1.5号针头，确保针头与空针联接牢固，以免产生泡沬。

（3）抽血时要“一针见血”，如抽血过慢或不太顺利，将会影响检测结果。

（4）取样完毕，立即与抗凝剂充分混合，混合抗凝标本时需轻微的但彻底的混匀，一般轻轻的翻转5至10次，要避免用力振摇，以免标本溶血影响结果。

3、抗凝剂选择
EDTA抗凝
4、标本送检
（1）标本采取前先将标本编号贴在采血管上，采血后应进行核对。

（2）标本应带盖存放；存贮时间为2－8℃＜4小时；因此取血后应及时送至实验室，以免检测结果受到影响。

5、标本处理
(1) 检验人员收到标本后应首先逐个检查其是否符合检验要求。

如果不符合检验要求的标本需通知临床重新采血。

(2) 包括抽血量不标准（过多或过少）、目测发现采血管中存在小血丝或小血块，如果排除病人体内自身溶血的情况，人为造成的溶血标本以及重度乳糜血的标本等。

(3)核对化验单申请检验项目，编号登记。

五、操作步骤
1、取清洁小试管1支，加入稀释液0.38ml
2、75%酒精将皮肤消毒后待干，穿刺皮肤，第一滴血弃去并准确采血20ul，吹入上述试剂并吸上清液洗试管数次，混匀
3、混匀后,以吸管吸取混悬液充入计数池中，静止2-3分钟
4、用低倍镜计数四个大格所有白细胞数
5、计数完毕,计数盘和盖玻片及时用水冲洗然后用细绒布拭净
计算：白细胞/L={(四大格内白细胞总数)/4}×10×20×106
式中: ÷4: 即得每大格白细胞平均数
×10: 由每大格细胞数换算为每微升细胞数
×106: 由1微升换算成1升，因为1L=106μl
×20: 血液稀释倍数
参考值：成人：(4～10) x 109/L
新生儿: (15～20) x109/L
6月～2岁: (11～12) x 109/L
六、临床意义
1、生理变化
年龄：新生儿较成人高，日间变化：早晨较低下午较高，一日之间最高值与最低值可相差一倍；运动，疼痛和情绪影响；妊娠与分娩。

由于白细胞的生理波动很大，因此白细胞计数波动小于30%在临床上常无诊断意义，只有通过定时或反复观察才有意义。

2、病理变化
由于成年人白细胞中中性粒细胞最多，所以白细胞总数和中性粒细胞增减，在多数情况下临床意义基本一致。

1）增多：急性感染和化脓性疾病为中性粒细胞增多最常见的原因；中毒；急性出血，急性溶血及手术后；恶性肿瘤，粒细胞性白血病；心肌梗塞；
2）减少：某些传染病；化学药品及放射损害；血液病；过敏性休克、重度恶病质；脾功能亢进和自身免疫性疾病。

参考文献：
1.临床医学检验手册
2.临床医学基础。