2种测定板栗新品系花粉生活力方法的比较

2种测定板栗新品系花粉生活力方法的比较
陈在新;陈波;潘娟;陈善涛
【摘要】以0202、0203等10个板栗(Castanea mollissima BL.)新品系花粉为材料,采用TTC染色法和固体培养基法2种方法,在不同条件下测定了其生活力.结果表明:固体培养基法测定各品系花粉萌发率明显高于TTC染色法,培养基中硼酸浓度为0.2%、培养时间为36 h时花粉的萌发率达到最大值.固体培养基法测定不同板栗品系间花粉生活力的差异很大,在44.9%～88.9%之间.
【期刊名称】《长江大学学报（自科版）农学卷》
【年(卷),期】2008(005)001
【总页数】3页(P11-13)
【关键词】板栗(Castanea mollissima BL.);花粉;生活力; TTC染色法;固体培养基法
【作者】陈在新;陈波;潘娟;陈善涛
【作者单位】长江大学园艺园林学院,湖北,荆州,434025;长江大学园艺园林学院,湖北,荆州,434025;长江大学园艺园林学院,湖北,荆州,434025;新疆石河子市农八师一四一团五连,新疆,石河子,832000
【正文语种】中文
【中图分类】Q945.6+4;S664.2
板栗(Castanea mollissima BL.)为山毛榉科栗属植物。

目前，发展板栗栽培已成
为我国山区农民的重要致富之路，但我国板栗生产中空苞率仍然较高，单位面积产量低、经济效益差，这种现象在我国南方尤为突出[1]。

板栗自花结实率低[2]，在
生产上合理配置量大质优花粉萌发率高的优良授粉品种，对促进板栗授粉受精、减少空苞、提高产量具有重要影响[3]。

因而在配置授粉树时准确测定授粉品种花粉
生活力极具必要性和重要性。

本研究以湖北省松滋市陈店镇板栗资源圃中生长与结果较优的10个新品系作为材料，旨在探讨、遴选较佳的板栗花粉生活力测定方法，为新品系推广种植时授粉品种的合理选配及生产中制定花期喷硼促果技术提供依据。

1 材料与方法
1.1 材料的采集与处理
以湖北省松滋市陈店镇南方板栗资源圃的0202、0203、0204、0205、0207、0208、0209、0211、0212和0213号共10个板栗品系的花粉作为试材。

于2005年5月采集花粉，每品系任选4株树(即4次重复)，每株随机采取30个雄
花序，以雄花序上第一朵花开为采摘标准，于每天上午9：00～11：00时采摘花序(花期不一致的品种分期采)[4]，采集时用剪刀从雄花序基部剪下，用塑料袋包好带回，将花序摊平于纸上室温下干燥，然后将散落出的花粉装于棕色瓶中，贮藏于0～5 ℃冰箱中备用[5]。

1.2 花粉生活力的测定方法
(1)TTC染色法取少量花粉于普通载玻片上，滴入0.5%TTC溶液2滴，取少量花
粉于普通载玻片上，滴入0.5%TTC溶液2滴，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，置于38 ℃的条件下20 min，在显微镜下观察不同的3个视野，每个视野内花粉数
量不低于30个，凡被染成红色的均为有生活力的花粉[5]。

各样本平行观察3次，取平均值。

(2)固体培养基法培养基由1%琼脂、10%蔗糖，再加一定浓度的硼酸配制而成。

硼酸选取0、0.1%、0.2%、0.3% 4个浓度水平。

培养时先将板栗花粉播于载有不
同浓度硼酸培养基的载玻片上，每个浓度3片，然后分别置于有湿滤纸垫底的培养皿中，盖上皿盖，放入25 ℃的恒温箱中进行培养。

在培养过程中经常检查滤纸湿度，然后分别在播后0 h、6 h、12 h、18 h、24 h、30 h、36 h时用显微镜观察3个视野，每个视野内花粉数量不低于30个，以花粉管长度大于或等于花粉粒短轴时即视为发芽[6]。

数据采用DPS统计软件进行统计分析，Dun can’s新复极差法进行多重比较。

2 结果与分析
2.1 TTC染色法测定板栗花粉生活力
图1 TTC法测定板栗新品系花粉生活力多重比较Figure 1 Multiple comparison of TTC determination ofChinese chestnut new strain pollen viability
TTC染色法测定的10个板栗新品系花粉萌发率结果如图1。

由图1可知，10个新品系花粉的生活率平均为38.4%，最高的为0213号，达71.3%，最低的为0209号，只有15.8%。

差异性显著测验表明，0213、0203、0212和0207的花粉萌发率极显著高于其他的品系，0213、0212、0207无显著差异；0204号极显著高于0209号；0213显著高于0207号，其他品系间差异达不到显著水平。

2.2 固体培养基法测定板粟花粉生活力
(1)不同浓度硼酸对板栗花粉萌发率的影响从图2可以看出，各品系有硼酸处理的花粉萌发率高于无硼酸处理的花粉萌发率，其中浓度为0.2%的硼酸对花粉萌发率的促进作用显著高于0、0.1%和0.3%浓度的硼酸，同时0.1%和0.3%的硼酸浓度之间的差异性不显著，说明加入0.2%的硼酸能显著地提高萌发率。

图2 同一品种不同硼酸浓度间花粉萌发率比较Figure 2 Comparison of pollen sprouting rate under different boric acid densities
(2)培养时间对花粉萌发率的影响以硼酸浓度为0.2%的固体培养基中培养36 h结果如图3。

图3 不同培养时间对10种花粉萌发率的影响Figure 3 The influence of different culture time to the sprouting rate of 10 kind of pollen
从图3可以看出，无论花粉的生活力高低，在36 h培养时间内，随着培养时间的延长，花粉萌芽率不断升高，且24～30 h是大量花粉萌发时期，极显著高于24
h前的萌发率，30 h后的萌发率没有显著地提高，培养时间低于6 h时，花粉不
会萌发，说明在测定板栗花粉发芽率时的培养时间应该为30～36 h。

2.3 2种测定方法的花粉生活力比较
以0.2%浓度的硼酸为固体培养基发芽法培养36 h的测定结果与TTC染色法测定结果如图4。

t值测验结果表明，2种方法测定结果0203、0212和0213没有显
著差异，0202、0205、0208、0209极显著，其他品系间均有显著差异。

从数值上看，固体培养基发芽法的测定结果高于TTC染色法的测定结果。

图4 2种测定方法花粉生活力比较Figure 4 Comparison of 2 kind of pollen viabilities determination methods
3 小结与讨论
10%浓度蔗糖、1%琼脂加0.2%硼酸可作为板栗花粉萌发的培养基，在25 ℃的条件下培养30～36 h可以较准确地测出板栗花粉的生活力，而采用的TTC染色法
测定的结果偏低，造成这一结果的原因可能有以下几个：(1)花粉着色深浅变异较大，主观误差造成较大的数据变异率。

因此染色法中花粉是否具有生活力的染色程度标准，有待进一步规范。

(2)在琼脂培养基中加入了10%的蔗糖，蔗糖起着维持花粉与培养基之间渗透平衡的作用，也是花粉萌发的营养物质和能量来源，有利于花粉的的发育[7]。

(3)固体培养法试验过程中加入了一定浓度的硼酸有利于花粉管的伸长，可加快发育[8]。

固体培养基法测定0202、0203等10种板栗新品系的花粉生活力差异很大，其中0213号的生活力最高，达到89.0%，最低的是0211号，只有44.9%，达到60%
以上的有0203、0204、0205、0207、0208、0212、0213等7种，从花粉生活力质量这一角度看，10个新品系生产上均可作为授粉品种。

[参考文献]
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[2]梁建萍,韩有志,梁胜发,等.丁香花粉生活力及其贮藏性的研究[J].山西林业科技,2000,3(1):10～12.
[3]蓝上宗.板栗栽培技术问答[M].北京:中国农业出版社,1998.22～23.
[4]刘殊,吴凌杰,宋巧玲.板栗花粉萌发率的测定[J].农业与技术,1997,(3):28～30.
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学,2004,(6):111～113.
[8]李大志,谢深喜,魏岳荣,等.湖南主要梨品种花粉生活力的研究[J].湖南农业大学学报,1999, 25(3):184～187.。