瘦素在病理性瘢痕中的表达及临床意义

瘦素在病理性瘢痕中的表达及临床意义
向小燕;蔡燕;周国富;黄佳佳
【摘要】目的：：观察瘦素( leptin)在人病理性瘢痕中的表达情况,初步探讨瘦素与人病理性瘢痕发生的关系。

方法：用PCR法检测人的10例正常皮肤,10例增生性瘢痕和10例瘢痕疙瘩组织中瘦素mRNA的表达。

结果：正常皮肤瘦素mRNA 呈现低表达,为0.55±0.17；增生性瘢痕组织有高表达,为0.86±0.13；瘢痕疙瘩组织呈现超高表达,为1.32±0.15。

瘦素mRNA在增生性瘢痕组和瘢痕疙瘩组中的表达量都明显高于正常皮肤组(P<0.01),在瘢痕疙瘩组的表达量明显高于增生性瘢痕组(P<0.01)。

结论：瘦素在病理性瘢痕中表达较高,在瘢痕疙瘩组织中尤其高,瘦素的表达程度与瘢痕的纤维化程度一致,瘦素在人的病理性瘢痕的发生发展中起到一定的作用,但具体的机制及是否可以作为瘢痕治疗的新靶点还需要进一步研究。

%Objective:To investigate the expressions of leptin in human pathological scar tissue and its relationship with the pathogenesis. Methods:The expressions of leptin in 10 specimens of normal skin,10 specimens of hypertrophic scars and 10 specimens of keloid were detected by PCR. Results:The expression level of leptin in hypertrophic scars and keloid was significantly higher than those in normal skin(P<0. 01);the expression level of leptin in keloid was significantly higher than those in hypertrophic scars(P<0. 01). Conclusion:The expression of leptin is higher in pathological Scar. The expression level of leptin is accordance with the level of fibrosis. It is possible that leptin plays a role in the development of pathological scar. Further studies are needed to confirm the specific
mechanism and whether it can be used as one target spot to treat the pathological scar.
【期刊名称】《川北医学院学报》
【年(卷),期】2015(000)004
【总页数】4页(P477-480)
【关键词】瘦素;增生性瘢痕;瘢痕疙瘩;mRNA表达
【作者】向小燕;蔡燕;周国富;黄佳佳
【作者单位】川北医学院附属医院烧伤整形科;川北医学院附属医院检验科，四川南充 637000;川北医学院附属医院烧伤整形科;川北医学院附属医院检验科，四川南充 637000
【正文语种】中文
【中图分类】R573.1
病理性瘢痕包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩，是一种皮肤纤维化疾病。

病理性瘢痕的存在，严重地影响着患者的身体健康及生命质量。

对瘢痕的防治，一直是目前创伤修复研究的热点问题。

瘦素(leptin)是由肥胖基因所编码的含有167个氨基酸残基的分泌性蛋白质，作为一种特殊的致纤维化因子参与了众多组织增生、肥大及纤维化［1－6］。

leptin参与了皮肤创伤修复过程［7－9］，它能刺激成纤维细胞(FB)的增殖和合成胶原。

leptin是否在病理性瘢痕这一纤维化疾病的发生方面也起到类似的作用呢?目前国内外学者尚无相关的报道。

本实验期望通过检测增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中leptin的表达情况，研究leptin与病理性瘢痕发生的关系，拓展
病理性瘢痕在细胞因子致病机理方面的研究，期望为今后的瘢痕防治提供一条新的线索。

1 资料与方法
1.1 临床病例及资料收集
收集川北医学院附属医院烧伤科2010年1月至2010年6月间增生性瘢痕10例，瘢痕疙瘩10例，正常皮肤10例。

所有瘢痕标本均取自患者要求进行瘢痕整复手
术时所切除的增生性瘢痕，瘢痕疙瘩组织标本，正常皮肤来自包皮环切手术中切除的丢弃的皮肤组织或者植皮手术中供皮区多余的皮肤。

所有瘢痕病程均在12～24个月。

所有患者均无合并皮肤疾病，结缔组织疾病和其它重要脏器的疾病，未使用类固醇激素，青霉胺和抗肿瘤药物，均未经过化疗，放疗，激光治疗及免疫治疗。

标本均经病理证实。

每例标本切下后15 min内冰下采集，置入－70℃冰箱保存。

表1 受试者一般临床资料(n=10±s)正常对照组5/5 18±2 －增生性瘢痕组 6/4
25±4 18±5瘢痕疙瘩组3/7 22±7 17±8
1.2 方法
1.2.1 主要仪器和试剂 PCR仪、凝胶成像仪(美国BIO-RAD)、Trzol总 RNA提取
试剂盒(美国 Invitrogen公司)，MMLV逆转录酶为Fermentas RevertaidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit(印度Fermenta biotech LTD)，PCR聚合酶(北京天根生化科技有限公司)。

1.2.2 引物设计与合成根据Genebank中的Leptin基因编码序列(序列号
NM_000230.2)，用在线引物设计软件Primer3设计引物，并交上海生工生物工
程有限合成。

Leptin引物:FP:5'-CGTTAAGGGAAGGAACTCTGG-3'，RP:5'-TTGATGGCTGAAGACCTTGG-3'，产物长度为 250bp。

1.2.3 聚合酶链反应(PCR)Trizol试剂盒提取各组织中的总RNA，测定其浓度和纯
度后，各取约1 μg用MMLV逆转录酶逆转录为cDNA备用。

定量PCR扩增
Leptin，同时扩增GAPDH作内参，反应条件:94℃预变性5 min;94℃变性30 s，51℃退火延伸30 s，以每一标本的平均拷贝数与相应内参平均拷贝数的比值进行
统计学分析。

1.3 统计学分析
采用SPSS12.0软件包，组间比较采用单因素方差分析，并进行两两比较，P＜
0.05为差异有统有学意义。

2 结果
正常皮肤，增生性瘢痕，瘢痕疙瘩组织中瘦素mRNA的相对表达情况:瘦素mRNA表达在250 bp处出现一条亮带。

电泳结果显示10例正常皮肤呈现低表达，表达量为0.55±0.17;增生性瘢痕组织有高表达，表达量为0.86±0.13;瘢痕疙瘩组
织呈现超高表达，表达量为1.32±0.15。

Leptin mRNA的表达量在增生性瘢痕组和瘢痕疙瘩组都明显高于正常皮肤组(P＜0.01)，在瘢痕疙瘩组又明显高于增生性
瘢痕组(P＜0.01)。

(图1，表2)
图1 Leptin PCR产物的琼脂糖凝胶电泳结果1～6. β-actin（190bp）；
7.marker（DL2 000）；8～13.Leptin（8、10 瘢痕疙瘩组；9、11. 增生性瘢痕组；12、13. 正常对照组，250 bp）。

表2 Leptin在各组间表达情况(±s) 正常对照组10 0.55 ±0.17增生性瘢痕组 10 0.86 ±0.13*瘢痕疙瘩组10 1.32 ±0.15*
3 讨论
瘦素(leptin)是由肥胖(ob)基因所编码的含有167个氨基酸残基的分泌性蛋白质，主要由白色脂肪产生，是一种具有多样性功能的活性因子。

leptin与器官纤维化的发生关系密切:(1)能够诱血管平滑肌及心肌成纤维细胞的增生肥大［4－
5］;(2)Leptin能促肝纤维化的发生、发展，并且是肝纤维化过程中必不可少的因
素［1，10－11］;(3)Leptin 也参与肾纤维化发生、发展过程［12－14］;(4)瘦素
还能促进矽肺组织纤维化和气道纤维化形成［3，6］;(5)瘦素参与了胰腺纤维化［2］。

leptin的致纤维化作用可能主要是通过调节 TGF-β1 等细胞因子的表达而实现［15－17］。

学者们［18－20］通过抑制或沉默leptin的表达，能够成功阻抑肝纤维化。

Leptin有望成为纤维化疾病基因治疗的新靶点。

Leptin还参与了创伤修复过程，因为研究发现:皮肤创面渗出物中leptin水平增高［7］，并且leptin受体表达上调［8］，受体表达越强则上皮增殖越快［9］，外源性leptin能显著促进创伤愈合［21－22］。

成纤维细胞(fibroblast，FB)是主要的创伤修复细胞，FB含所有类型的leptin受体，并且能合成和分泌leptin;外源性leptin能够促进体外培养FB增殖和胶原合成［23］。

上述表明，在创伤修复过程，FB能分泌leptin，同时又作为leptin作用的靶细胞之一，介导了leptin促进创面愈合的过程。

瘢痕是皮肤组织创伤修复后的必然产物。

病理性瘢痕是由于全身和局部因素的影响，发生异常的损伤修复过程，是创伤过度修复的结果。

组织学上以成纤维细胞(FB)的过度增生和细胞外基质(ECM)的过度聚集为特征，是一种真皮纤维化疾病。

病理性瘢痕包括增生性瘢痕或瘢痕疙瘩。

瘢痕疙瘩较增生性瘢痕而言，其胶原合成代谢功能失去正常的约束控制，持续处于亢进状态，以致其胶原纤维增生的程度高于增生性瘢痕。

考虑到leptin参与皮肤创面修复过程，结合到leptin能
致器官纤维化这一点，我们不禁想到，和致其它器官纤维化一样，leptin在病理性瘢痕这一皮肤创伤过度修复过程中是否也发生了相同的促进作用呢?leptin是否可
能也作用于病理性瘢痕的成纤维细胞，导致其过度增殖和细胞外基质的过度沉积? 本研究的结果显示，在病理性瘢痕中存在leptin的高表达，而在瘢痕疙瘩中的表
达比在增生性瘢痕中的表达尤高，Leptin的表达程度与瘢痕纤维化程度一致。

结
果显示leptin参与到了病理性瘢痕的形成过程中。

但具体机制需要进一步研究证实。

通过本研究，使瘦素致器官纤维化作用的研究进一步扩展，对病理性瘢痕发病机制
中细胞因子方面的研究进一步深入。

如果进一步深入研究其致病机理以期进行药物干预，这也为延缓病理性瘢痕发生的进程提供了一条新的思路，为病理性瘢痕的治疗提供新的理论支持，这将可能为病理性瘢痕患者带来新的希望。

参考文献
［1］Piche T，Vandenbos F，Abakar-Mahamat，et al.The severity of liver fibrosis is associated with high leptin levels in chronic hepatitis C［J］.Viral Hepatol，2004，11(1):91 －96.
［2］邹芳芳，陈少夫，郑宏.瘦素及瘦素受体在大鼠胰腺纤维化组织中表达的变化［J］.中华胰腺病杂志，2010，10(3):210－211.
［3］裴厚霜，李永斌，范德龙，等.瘦素对矽肺大鼠肺组织纤维化的影响及与
HIF-1a的相关性分析［J］.细胞与分子免疫学杂志，2014，30(7):700 －703. ［4］Schram K，De Girolamo S，Madani S，et al.Leptin regulates MMP-2，TIMP-1 and collagen synthesis via p38-MAPK in HL-1 murine cardiomyocytes［J］.Cell Mol Biol Lett，2010，15(4):551 － 563.
［5］Fukui A，Takahashi N，Nakada C，et al.Role of leptin signaling in the pathogenesis of angiotensin II-mediated atrial fibrosis and fibrillation ［J］.Circ ctrrhythin Electrophysiol，2013，6(2):402 －409.
［6］周瑞娟，朱述阳，陶洪臣，等.瘦素对大鼠气道平滑肌细胞TGFβ1及I型胶
原蛋白表达的影响［J］.细胞与分子免疫学杂志，2013，29(10):1047 －1049. ［7］Marikovsky M，Ro senblum CI，Faltin Z，et al.Appearance of leptin
in wound fluid as a response to injury［J］.Wound Repair Regen，2002，
10(5):302 －307.
［8］Stallmeyer B，Kampfer H，Podda M，et al.A novel keratinocyte mitogen:regulation of leptin and its functional receptor in skin repair
［J］.Invest Dermatol，2001，117(1):98 － 105.
［9］Murad A，Nath AK，Cha ST，et al.Leptin is an autocrine/paracrine regulator of wound healing［J］.FASEB J，2003，17(13):1895－1897. ［10］Garcia-Suarez C，Crespo J，Fernandez-Gil PL，et al.Plasma leptin levels in patients with primary biliary cirrhosis and their relationship with degree of fibrosis［J］.Gastroenterol Hepatol，2004，27(2):47－50. ［11］Honda H，Ikejima K，Hirose M，et al.Leptin is required for fibrogenic responses induced by thioacetamide in the murine liver ［J］.Hepatology，2002，36(1):12 －21.
［12］郭晓晶，王利华.大鼠肾小管间质纤维化过程中血清瘦素水平的变化［J］.山西医科大学学报，2007，38(8):698 －700.
［13］Wolf G，Hamann A，Han DC，et al.Leptin stimulates proliferation and TGF-β expression in r enal glomerular endotehelial cells:potential role in glomerulosclerosis［J］.Kidney Int，1999，56:860.
［14］Han DC，Isono M，Chen S，et al.Leptin stimulates type I collagen production in db/db mesangial cells:glucose up take and TGF-beta typeⅡ receptor expression［J］.Kidney Int，2001，59(4):1315 －1323.
［15］Ikejima K，Takei Y，Honda H，et al.Leptin receptor mediated signaling regulates hepatic fibrogenesis and remodeling of extracellular matrix in the rat［J］.Gastroenterology，2002，122(5):1399 －1410. ［16］杨利才，张道友，朱新俭，等.5/6肾切除大鼠血清瘦素水平变化及其与肾小球硬化关系［J］.放射免疫学杂志，2006，19(2):87－90.
［17］李浩，李俊，黄成，等.瘦素及转化生长因子β1与四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型逆转恢复的相关性研究［J］.中国药理学通报，2011，27(4):473 －477.
［18］Xue X，Lin J，Song Y.RNA interference targeting leptin gene effect on hepatic stellate cells［J］.Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci，2005，25(6):655 －657.
［19］薛秀兰，邢玉刚，吴晓鹭，等.小干扰RNA沉默瘦素揭示了瘦素在大鼠纤
维化中的作用［J］.中国组织化学与细胞化学杂志，2014，23(3):270 －274. ［20］Zhai X，Yan K，Fan J，et al.The b-calenin pathway contributes to
the effects of leptin on SREBP-1c expression in rat hepalic stellate cells and liver fibrosis［J］.Br J Pharmaco，2013，169(1):197 －212.
［21］文辉才，巫国辉，陈雯，等.局部应用瘦素对大鼠烫伤创面愈合的实验研究［J］.南方医科大学学报，2012，32(5):703 －706.
［22］李培兵，金宏，刘佃辛，等.瘦素促进皮肤创伤大鼠胶原合成的实验研究［J］.中国应用生理学杂志，2011，27(1):72 －74.
［23］李培兵，金宏，刘佃辛，等.瘦素对体外大鼠成纤维细胞增殖与胶原合成的
影响［J］.中国修复重建外科杂志，2005，19(1):20－22.。