EB的处理方法
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EB的处理方法
EB的处理方法
EB是我们从事生命科学尤其是分子生物学经常要接触的致癌性物质,且不好处理.现提供如下方法,供参考. 特别是刚走进实验室的新同行,一定得学会保护自己。
实验室中经常有EB被打翻或EB废弃物的处理问题,如何做到标准处理?
1 严禁随便丢弃。
因为EB是强致癌性,而且易挥发,挥发至空气中,危害很大。
2 废 EB溶液的处理方法
(1) 对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液,可如下处理:
a. 将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5mg/ml;
b. 加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4 ,混匀,再加入等量的25mol/L HCl,混匀,置室温数小时;
c. 加入一倍体积的2.5mol/L NaOH,混匀并废弃。
(2) EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下处理:
a. 按1mg/ml的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1小时;
b. 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。
3 废EB接触物,如抹布,枪头。
一般回收至黑色的玻璃瓶中,定期进行焚烧处理。
由于EB是一种诱变剂,直接倒入水槽或扔进拉圾箱可能会带来危害。
所以应该根据情况处理:
1. 电泳胶
胶里面痕量的EB没有问题,如果小于0.1%可以直接扔掉。
而如果发红,即大于等于0.1%时应该放在生物危害柜中焚烧掉。
2. EB溶液
<10ug/ml 时可以直接倒入水槽
>10ug/ml 时应该用木炭过滤或化学方法使其失活(推荐用木炭
过滤的方法)
溶液中还有重金属、氢化物、硫化物时应该按照危险垃圾处理
化学中和方法:
方法一:加等体积的漂白粉,搅拌4小时,静置4天,用NaOH 调至pH4-9, 倒入排水沟的同时用大量水冲。
方法二:每100ml加5%磷酸,加12ml0.5M的NaNO3,搅拌并静置20小时,同上调pH, 倾倒。
3. 手套、设备等物品
放在医用垃圾中焚烧,如污染严重则用漂白剂处理。
EB的净化处理方法
小心:溴化乙锭是强诱变剂,并有中度毒性。
取用含有这一燃料的溶液时务必戴上手套。
这些溶液使用后应按下面介绍的方法之一进行净化处理。
(一)溴化乙锭浓溶液(即浓度>0.5mg/ml 的溴化乙锭溶液)的净化
处理
方法Ⅰ:用沙门氏菌——微粒体测定法表明。
本方法可使EB的诱变活性降至原来的1/200 左右。
1)加入足量的水使EB的浓度降低至0.5mg/ml以下:
2)在所得的溶液中加入0.2体积的新配制的5%次磷酸和0.12体积的新鲜配置的0.5mol/L亚硝酸钠,小心混匀。
切记:检测该溶液的pH值应<3.0,市售次磷酸一般为50%溶液,具有腐蚀性。
应小心操作。
必须在临用前现用现稀释。
亚硝酸钠溶液(0.5mol/L)的配法:用水溶液34.5g亚硝酸钠并定容至终体积500ml,现用现配。
3)于室温温育24小时后,加入大大过量的1mol/L碳酸钠。
该溶液可予丢弃。
方法Ⅱ:用沙门氏菌——微粒体测定法检查,经用本方法处理后,可使EB的诱变活性降低至原来的1/3000左右。
但也有报告称,在用净化溶液处理的空白样品中,偶尔有一些仍具有诱变活性。
1)加入足量的水使EB的浓度降低至0.5mg/L以下;
2)加入1倍体积的0.5mol/L KMnO4,小心混合后再加入1倍体积的2.5mol/L HCl小心混匀,于室温放置数小时;
3)加入1倍体积的2.5mol/L NaOH小心混合后可丢弃该溶液。
(二)EB稀溶液(如含有0.5ug/ml EB的电泳缓冲液)的净化处理方法Ⅰ
1)每100ml溶液中加入2.9g Amberlite XAD-16,这是一种非离子型多聚吸附剂,可向Rohm & Haas公司购置;
2)于室温放置12小时,不时摇动;
3)用 Whatman 1号滤纸过滤溶液,丢弃滤液;
4)用塑料袋封装滤纸和Amberlite 树脂,作为有害废物予以丢弃;方法Ⅱ
1)每100ml溶液中加100mg粉状活性炭;
2)于室温放置1小时,不时摇动;
3)用Whatman 1 号滤纸过滤溶液,丢弃滤液;
4)用塑料袋封装滤纸和活性炭;
注:用次氯酸(漂白剂)处理EB稀释液并不可取;EB在262℃分解,在标准条件进行焚化后不可能再有危害性;Amberlite XAD-16 或活性炭可用于净化被EB污染的物体表面。
溴化乙锭的损害
溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。
溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性!
SYBR Green I 和溴化乙啶(EB)Ames 测试结果显示EB容易引起有机体突变。
由于溴化乙锭具有一定的毒性,实验结束后,应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置,以避免污染环境和危害人体健康。
(1) 对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液,可如下处理:
①将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5mg/ml;
②加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4,混匀,再加入等量的25mol/L HCl,混匀,置室温数小时;
③加入一倍体积的2.5mol/L NaOH,混匀并废弃。
(2) EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下处理:
① 按1mg/ml的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1小时;
② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃.
我也有一个疑点,EB不是都要用棕色瓶子装吗?就是说要避光保存,是不是在强光下不稳定啊?
EB是诱变剂,有累积效应,是DNA突变的诱变剂,可以嵌入DNA,使DNA发生突变,致癌。
一.不要直接接触(EB可以被皮肤吸收。
做实验的时候一定要带手套),二.是要注意通过呼吸摄入(60度以上容易挥发),故此环境要通风。
处理楼上的都已经说的很清楚了。
在这里我要强调的是接触EB的手套,枪头等也要即时正确处理!。