普伐他汀钠对LPS诱导的中性粒细胞NE释放及活性的影响

普伐他汀钠对 ＬＰＳ 诱导的中性粒细胞 ＮＥ 释放及活性的影响
陈雨虹脂多糖( ＬＰＳ) 诱导的 人外周血中性粒细胞弹性蛋白酶( ＮＥ) 释放及活性的影响ꎮ 方法 采用 Ｆｉｃｏｌｌ 密度梯度离心法分离培养人外周血中性 粒细胞ꎬ瑞氏染色法鉴定中性粒细胞及胞内嗜天青颗粒ꎬ使 用 ＬＰＳ 刺激中性粒细胞脱颗粒ꎬ提取细胞上清液ꎬ应用比色 法检测上清液中过氧化物酶( ＭＰＯ) 活性以确定合适的刺激 时间和浓度后ꎬ给予中性粒细胞 ＬＰＳ 刺激同时予以普伐他汀 钠处理ꎬ使用 ＥＬＩＳＡ 法检测细胞培养上清液 ＮＥ 含量ꎬ比色 法检测 ＮＥ 活性ꎮ 结果 ＬＰＳ 刺激后中性粒细胞培养上清液 中 ＮＥ 的含量和活性均明显增高ꎮ 普伐他汀钠处理后的细 胞培养上清液中 ＮＥ 明显降低( Ｐ < ０������ ０５) ꎮ 结论 普伐他汀
中 性 粒 细 胞 弹 性 蛋 白 酶 ( ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｅｌａｓｔａｓｅꎬ ＮＥ) 是一种存在于中性粒细胞嗜天青颗粒中的丝氨 酸蛋白酶ꎬ基因结构为 ＥＬＡ２ꎬ是在 １９ 号染色体短臂 末端区域内含 ５０ 个碱基的片段ꎬ含有 ２１８ 种氨基酸 和 ４ 个二硫键ꎬ是丝氨酸蛋白酶家族的一份子ꎮ 当 中性粒细胞暴露于各种细胞因子和趋化因子刺激下 时可释放 ＮＥꎬ如肿瘤坏死因子( ＴＮＦ￣α) 、白细胞介 素 ＩＬ￣８、 Ｃ５ａ、 细 菌 脂 多 糖 ( ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅꎬ ＬＰＳ) 和来自细菌壁 ＦＭＬＰ 的三肽[１] ꎮ
钠能降低 ＬＰＳ 刺激导致的中性粒细胞脱颗粒ꎬ降低 ＮＥ 释放 量及其活性ꎮ 关键词 普伐他汀钠ꎻ中性粒细胞弹性蛋白酶ꎻ脂多糖ꎻ过氧 化物酶 中图分类号 Ｒ ４５２ 文献标志码 Ａ 文章编号 １０００ － １４９２(２０１８)０６ － ０８８０ － ０５ ｄｏｉ:１０. １９４０５ / ｊ. ｃｎｋｉ. ｉｓｓｎ１０００ － １４９２. ２０１８. ０６. ０１１
ｂｒａｌ ｅｄｅｍａ ａｆｔｅｒ ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｂｒａｉｎ ｉｎｊｕｒｙ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ ａｑｕａｐｏｒｉｎ ４ ( ＡＱＰ￣４) ｉｎ ｂｒａｉｎ ｅｄｅｍａ. Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｂｒａｉｎ ｉｎｊｕｒｙ ｗｅｒｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ｆｒｅｅ￣ｆａｌｌ ａｔｔａｃｋ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｆｏｕｒ ｇｒｏｕｐｓ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄｓ: ｂｌａｎｋ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐꎬ ｓｉｍｐｌｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐꎬ ｃｙｃｌｏｂｕｆｅｐｔａｎ ( ＴＮＦ￣ α ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ) ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐꎬ ｎｉｍｏｄｉｐｉｎｅ ( Ｃａ２ ＋ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒｓ) ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ. Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｎｄ ＰＣＲ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ￣α ａｎｄ ＡＱＰ￣４ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｔｈｅ Ｃａ２ ＋ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｂｒａｉｎ ｔｉｓ￣ ｓｕｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＧＥＮＭＥＤ ｃｅｌｌ Ｃａ２ ＋ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ. Ａｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｉｍｅꎬ ｔｈｅ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｂｒａｉｎ ｅｄｅｍａ ｉｎ ｔｒａｕ￣ ｍａｔｉｃ ｒａｔｓ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ. Ｒｅｓｕｌｔｓ ① Ａｆｔｅｒ ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｂｒａｉｎ ｉｎｊｕｒｙꎬ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ￣αꎬ ＡＱＰ￣４ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｃａ２ ＋ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｒａｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｂｒａｉｎ ｉｎｊｕｒｙ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｂｌａｎｋ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ. ② Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｙｃｌｏｐｅｎ￣ ｔａｎｏｎｅ ａｌｏｎｅꎬ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ￣α ａｎｄ ＡＱＰ￣４ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｒａｔｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙꎬ ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｃｏｎ￣ ｔｅｎｔ ｏｆ Ｃａ２ ＋ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ. Ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｅｄｅｍａ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｂｙ ｉｍａｇｉｎｇꎬ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｅｄｅｍａ ｏｆ ｒａｔｓ ｉｎ ｔｒｅａｔ￣ ｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｌｉｇｈｔ. ③ Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｃａ２ ＋ ｉｎ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｎｉｍｏｄｉｐｉｎｅ￣ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｕｎｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐꎬ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＱＰ￣４ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄꎬ ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ￣α ｈａｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｃｈａｎｇｅ. Ｉｍａｇｉｎｇ ｓｈｏｗｅｄ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｅｄｅｍａꎬ ｂｕｔ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｓｉｍｐｌｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｒａｔｓ ｂｒａｉｎ ｅｄｅｍａ ｌｉｇｈｔｅｒ. ④ Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｎｉｍｏｄｉｐｉｎｅ￣ｔｒｅａｔｅｄ ｒａｔｓꎬ ｔｈｅ ｒａｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｎｏｎｅ ｈａｄ ｓｌｉｇｈｔｌｙ ｌｉｇｈｔｅｒ ｂｒａｉｎ ｅ￣ ｄｅｍａ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ Ｃａ２ ＋ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒꎬ ｂｕｔ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｎｏｔ ｏｂｖｉｏｕｓ. Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ￣α ａｎｄ Ｃａ２ ＋ ｉｎ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ａｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｆｔｅｒ ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｂｒａｉｎ ｉｎｊｕｒｙ. ＴＮＦ￣α ａｎｄ Ｃａ２ ＋ ａｒｅ ｉｎ￣ ｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｂｒａｉｎ ｅｄｅｍａꎬ ａｎｄ ＴＮＦ￣α ｍａｙ ｂｅ Ｃａ２ ＋ ｕｐｓｔｒｅａｍ ｓｉｇｎａｌ ｉｎ ｂｒａｉｎ ｅｄｅｍａ ａｆｔｅｒ ｔｒａｕｍａ. ＴＮＦ￣α ｍａｙ ｂｅ ｉｎ￣ ｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｐｏｓｔ￣ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｂｒａｉｎ ｅｄｅｍａ ｂｙ ａｆｆｅｃｔｉｎｇ ｂｒａｉｎ ｃｅｌｌ ｃａｌｃｉｕｍ ｏｖｅｒｌｏａｄ. Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｂｒａｉｎ ｉｎｊｕｒｙꎻＴＮＦ￣αꎻＣａ２ ＋ ꎻＴＮＦ￣α ｉｎｈｉｂｉｔｏｒꎻＣａ２ ＋ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒｓꎻ ｂｒａｉｎ ｅｄｅｍａ
２０１７ － １２ － １４ 接收 基金项目:安徽省自然科学基金( 编号:１３０８０８５ＭＨ１１５) 作者单位:安徽医科大学附属安徽省立医院呼吸内科ꎬ合肥 ２３０００１ 作者简介:陈雨虹ꎬ女ꎬ硕士研究生ꎻ
梅晓冬ꎬ男ꎬ教授ꎬ主任医师ꎬ硕士生导师ꎬ责任作者ꎬ Ｅ￣ ｍａｉｌ : ｈｆｍｘｄ＠ ｓｉｎａ. ｃｏｍ
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安徽医科大学学报 Ａｃｔａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓ Ａｎｈｕｉ ２０１８ Ｊｕｎꎻ５３(６)
网络出版时间:２０１８ － ５ － ２３ １４:１３ 网络出版地址:ｈｔｔｐ: / / ｋｎｓ. ｃｎｋｉ. ｎｅｔ / ｋｃｍｓ / ｄｅｔａｉｌ / ３４. １０６５. Ｒ. ２０１８０５２２. １５００. ０１１. ｈｔｍｌ