3-1 豚鼠过敏反应观察(1)

本实验主要观察豚鼠的过敏反应现象。
实验原理
先给豚鼠注射小量异种蛋白，经过一定的潜伏期，动物处于致 敏状态。当第二次用较大剂量相同抗原注射豚鼠时，抗原激发豚鼠 体内的肥大细胞或嗜碱性粒细胞，致使这些细胞释放多种生物活性 介质，豚鼠迅速产生严重的过敏反应及至过敏性休克或死亡。
主要实验材料
1、豚鼠：体重150g左右的幼小豚鼠； 2、变应原：马血清、鸡蛋清； 3、其他：生理盐水、无菌注射器、针头、碘 酒、酒精、棉球等。
2. 激肽原酶：生成激肽，致平滑肌收缩，导致支气管痉挛；毛 细血管扩张，通透性增强；
3. 白细胞三烯和前列腺素：与组胺和激肽原酶作用相似； 4. 其它……
Ⅱ型超敏反应是由IgG或IgM类抗体与靶细胞表面相应抗原结 合后，在补体、吞噬细胞和NK细胞参与作用下，引起的以细胞溶解 或组织损伤为主的病理性免疫反应。常见疾病有：1. 输血反应；2. 新生儿溶血症；3. 自身免疫性溶血性贫血；4. 药物过敏性血细胞减 少症；5. 甲状腺功能亢进等等。
2、取下针头，将血液放入一洁净的玻璃平皿中，盖上平皿盖， 置4°冰箱静置1h，收集血清，离心，收集上清（即为豚鼠血清， 可以用作补体；临用前，1：20-1：30稀释后使用），备用。
将死亡豚鼠解剖，可见肺脏极度水肿，胀满整个胸腔。
而豚鼠2、3无任何症状。
由于动物个体反应性不同，有的反应较轻，可幸免死亡。 如果再注射马血清也不出现反应，此称为脱敏状态。但脱敏 状态是暂时的，大约2周后又处于致敏状态。
注意事项：
1、心脏注射时，首先要固定好动物，然后于心跳 最明显之处进针，感觉有搏动、注射器内有回血时 再注射过敏原；
豚鼠过敏反应观察
超敏反应是指机体对某些抗原初次应答后，再次接受相同
抗原刺激时，发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主 的特异性免疫应答。超敏反应分型如下：
Ⅰ型超敏反应→速发型超敏反应 Ⅱ型超敏反应→细胞毒型超敏反应 Ⅲ型超敏反应→免疫复合物型超敏反应 Ⅳ型超敏反应→迟发型超敏反应
Ⅰ型超敏反应又称为速发型超 敏反应，是由特异性的IgE抗体介导 的，其主要特征为：
2、由于不同动物个体反应不同，大多数豚鼠发生 过敏性休克，但是少数豚鼠也会不出现明显的过敏 反应症状。
附：豚鼠血液采集及新鲜血清制备
1、豚鼠心脏穿刺采血：一人抓取固定豚鼠，使胸腹部朝上，； 另一人用左手触摸豚鼠左侧第4、5、6肋间，选择心尖搏动最明 显处将注射器针头刺入心脏；所用针头应细长，以免采血后穿刺 孔出血；体重约500g的豚鼠每次可抽血6-7ml，间隔2-3周后可再 次采血；
Ⅲ型超敏反应是由中等大小可溶性免疫复合物沉积于局部或全 身毛细血管基底膜后，通过激活补体和血小板、嗜碱性、嗜中性粒 细胞参与作用下，引起的以充血水肿、局部坏死和中性粒细胞浸润 为主要特征的炎症反应和组织损伤。
Ⅳ型超敏反应是由效应T细胞与相应抗原作用后，引起的以单 个核细胞浸润和组织细胞损伤为主要特征的炎症反应。
实验步骤：
1、取豚鼠三只，编号标记； 2、按1：10分别稀释马血清和鸡蛋清，按照下表操作（初次为后 腿内侧皮下注射），末次注射后1-5分钟观察； 3、如果心内注射未获成功，可以考虑选择豚鼠的耳缘静脉注射 0.3～0.5ml。
实验豚鼠分组表
结果判断：
豚鼠1在注射马血清1-5分钟会出现不安、抓鼻、喷嚏、 呼吸困难、竖毛、大小便失禁、痉挛性跳跃，症状严重者在 数分钟内死亡。
出现快，消退也快； 出现功能紊乱性疾病，不出现 严重组织细胞损伤； 有明显个体差异和遗传背景。
Ⅰ型超敏反应的发生 过后 60 分钟
主要生物活性介质及其生物学作用：
1. 组胺：毛细血管扩张，通透性增强；支气管胃肠道等处平滑 肌收缩；促腺体分泌局部症状：皮肤黏膜充血水肿，荨麻疹，支气 管哮喘，恶心，呕吐，腹痛，腹泻；