单克隆抗体的制备

④⑤诱用灭杂杂导方台活交交细法病的瘤瘤胞是毒仙细细融什胞胞合么的的常？选筛择选培养
养基（HAT培养基）
杂交细胞
B？B种、B瘤 、
⑥分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立
瘤瘤 、
⑦单克隆抗体的大量制备 如何获得大量的
单克隆抗体？
抗？原
效应B？细胞
筛选
（AA型、BB型）
AB型杂交瘤细胞
筛选
能产生所需抗体的细胞
6．只能使动物细胞融合的常用诱导方法（ ）
A．PEG
B．灭活的病毒
C．电刺激 D．离心
7、“生物导弹”是指 （ ） A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物
8、下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，
不正确的是（ ）A
A．B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般不 需要灭活的仙台病毒或聚乙二醇诱导
【例】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验
步骤中错误的是( )
A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的 B 淋巴细胞
B．用纤维素酶处理 T 淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞
C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的 B 淋巴细胞
与小鼠骨髓瘤细胞融合
Dwenku.baidu.com筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，
杂种细胞
动物细胞融合
既能产生特异性抗
体，又能大量繁殖
（二）单克隆抗体的制备过程
创始人：米尔斯坦
柯勒
1975年设计实验 1984年获得诺贝尔生理 学和医学奖
过程：
①免疫动物
注获射得抗能原产的生目相的应是抗体的 什B淋么巴？细胞（浆细胞）
②免疫B细胞和骨髓瘤细胞的制备
③细胞融合
具如有何筛进选行作筛用选的？培
２可用于治疗疾病和运载药物（作为运载对应疾病的 药物的 “生物导弹“。） “生物导弹”＝单克隆抗体＋药物，
用抗人绒毛膜促性腺激素 单克隆抗体做成的“早早 孕诊断试剂盒”，灵敏度 很高。在妊娠第8天就可以 做出诊断。比原来的诊断 方法提前了10天左右，可 以避免孕妇在不知道妊娠 的情况下因服用药物而对 胎儿造成不利影响。该方 法检测的准确率在90%以 上。
2.2.2单克隆抗 体的制备
讲课老师：张大华
番茄细胞
番茄原 生质体
纤维素酶、果胶 酶去除细胞壁
马铃薯 细胞
马铃薯原 生质体
再生出 细胞壁
植物组 织培养
正在融合的原生质体
杂交细胞
处理：物理法、化 学法、生物法
植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较
比较项目 原理
细胞融合的方法
诱导方法 用途
植物体细胞杂交 动物细胞融合
2、动物细胞融合的目的中最重要的是（ ）
A、克服远缘杂交不亲和 B、制备单克隆抗体
C、培育新物种
D、生产杂种细胞
3、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合， 得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗 体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ）
A、经过免疫的B淋巴细胞 B、不经过免疫的T淋巴细胞 C、经过免疫的T淋巴细胞 D、不经过免疫的B淋巴细胞
1、把某种抗原反复注射到动物体内，然后 从动物血清中分离出所需的抗体。
2、血清抗体的缺点： 产量低，纯度低，特异性差。
为了解决血清抗体产量低、纯度低，特异性差这一 难题，科学家们进行了多年的研究和探索。他们发 现，哺乳动物感染病原体后，体内会形成B淋巴细 胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每 一个B细胞只分泌一种特异性抗体。
4. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞
诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，
在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ）
①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融
合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞
⑤杂交瘤细胞
A． ②④
B．①③⑤
C． ①②③④
D．②③
5、研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（ ） A．利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞 B．以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞 C．抗癌物质在克隆细胞中大量合成 D．单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞 结合
什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后 产生的、并能与该抗原发 生特异性结合的具有免疫 功能的球蛋白。
1、抗体是由何种细胞产生的？
浆细胞（效应B细胞）
2、三抗、体单是克如隆何抗产体生的？
抗原
B淋巴细胞
增殖分化成 浆细胞
抗体
3、一种B淋巴细胞能产生 几种抗体？
一种
（一）获得抗体的传统方法（血清抗体）
抗原
过程：小鼠
效应B细胞
骨髓瘤细胞
细胞融合、筛选
多种杂交瘤细胞
多孔培养板单个细胞培养，筛选
能产生特定抗体的
细胞群
体外培养
体内培养
提取出单克隆抗体
1.在制备单克隆抗体的过程中，选用 哪两种细胞进行融合？为什么选择这 两种细胞？ 浆细胞和骨髓瘤细胞 浆细胞能产生单一抗体，但不能无限 增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖，但不 能产生单一抗体。
学性质单一、特异性强的抗体。
1、B淋巴细胞是一种高度分化的细胞，有没有可能 通过细胞培养进行无限增殖？
不可能
2、我们学过的什么细胞具有这样的能力？
癌细胞
3、有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力？
细胞融合
２、实验原理：
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖
单克隆 动物细胞培养技术 抗体
2、在这过程中进行了几次筛选？分 别在哪个步骤进行筛选？ 两次筛选。第一次在B细胞和骨髓瘤 细胞融合以后筛选出杂交瘤细胞； 第二次在杂交瘤细胞中筛选出能产生 所需抗体的杂交瘤细胞。
3、单克隆抗体具有哪些优点？
特异性强，灵敏度高，可大量制备
（三）单克隆抗体的应用
１可用于作为诊断试剂：有准确、高效、简易、快速 的优点
一个优势－－单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势
单 克 隆 抗 体 的 制 备
细胞膜的流动性 细胞的全能性
细胞膜流动性
去除细胞壁后诱 使细胞分散后 导原生质体融合 诱导细胞融合
物理：离心、振荡、电激 物理、化学法
化学：聚乙二醇
灭活的病毒
远缘杂交获得 杂种植株
主要用于制备 单克隆抗体
【学习目标】
1、简述单克隆抗体制备的过程。 2、了解单克隆抗体在医学实践中的应用。
单克隆抗体
培养后提取单克隆抗体
【答案】B
【配对练习 】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的？ ()
A．B 淋巴细胞 B．T 淋巴细胞 C．骨髓瘤细胞 D．杂交瘤细胞
【答案】D
1、动物细胞融合和植物原生质体融合比较， 在动物细胞融合中有特殊性的是（ ） A、融合的原理 B、融合的优点 C、融合的诱导手段 D、融合的过程
1、如何解决抗体的纯度低，特异性差的难题？ 由一个B淋巴细胞产生抗体
2、如何解决抗体的产量低的问题？ 由提取出来的一个B淋巴细胞通过细胞培养得到 大量的B淋巴细胞，就能产生大量的抗体
所以，要想获得大量的单一抗体，必须克隆单 一的B淋巴细胞，形成细胞群。
单克隆抗 用单个B淋巴细胞进行（无性繁殖）克隆， 体的概念：得到的基因型相同的细胞群能够分泌一种化
B．融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又 能产生单克隆抗体
C．体外培养时，一个效应B淋巴细胞可以产生 抗体，但不能无限增殖
D．单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵 敏度高，优越性明显
小结
动物细胞培养过程 两个过程
单克隆抗体制备过程
一个诱导细胞融合的新方法－－灭活 病毒 三个“一” 一个新细胞－－杂交瘤细胞