饲料中基本营养成分测定标准

实际上，100多年来世界各国一直沿用的是由德国科学家Hennberg和Stohman所创立的Weende饲料分析体系。

该分析体系是把饲料分成6种组分来分析测定：①水分(干物质)；
②粗灰分(矿物质)；②粗蛋白(N x 6．25)；④粗脂肪(乙醚浸出物)⑤粗纤维；⑧无氮浸出物(NFE，计算值)。

这种饲料分析体系显然是饲料的概略分析(Feed Proximate Analysis) ，但也是最基本的饲料成分分析。

按照GB10648-1999 饲料标签的规定：蛋白质饲料、配合饲料、浓缩饲料和复合顶混料等饲料都要把水分、粗蛋白、粗纤维和粗灰分做为保证值项目进行标注。

饲料组成成分的分析
对饲料组成成分的分析是研究营养物质的利用，评价饲料营养价值最基础的工作。

饲料中最重要的营养物质有碳水化合物、蛋白质、脂类、矿物质和维生素。

概略养分分析法把饲料组成成分分为水分、粗灰分、粗蛋白质（CP）、粗脂肪或乙醚浸出物（EE）、粗纤维（CF）和无氮浸出物（NEF）。

(一)水分
饲料中的水分有两种存在形式，游离水和结合水。

饲料分析中经常测定总水分，采用干燥失重的方法。

对于不同饲料，干燥的方法应考虑其理化性质而有所区别。

尽管饲料中的水分营养价值不大，但是测定饲料中的水分可得出饲料干物质的含量，这与饲料的能量含量密切相关，因此水分的测定意义重大。

本方法依据GB6435—86 饲料中水分的测定，它适用于配合饲料和单一饲料水分含量的测定，但不适用于做饲料的奶制品、动植物油中的水分测定。

1.方法原理
试样在(105±2)℃烘箱内和常压条件下烘干至恒重的质量为水分。

2.仪器设备
(1)植物样品粉碎机或研钵；
(2)试验筛：孔径0.42mm（40目）
(3)分析天平：分度值0．0001g；
(4)称量皿：玻璃或铝质，直径40mm、高25mm
(5)电热式恒温烘箱：控制±2℃；
(6)干燥器：变色硅胶干燥剂
3．样品的制备
(1)选取有代表性的原始样品不少于1000g。

按四分法缩分到250g，风干或以60℃烘干，用植物样品粉碎机碾细，过0.42mm试验筛(注意一定要将样品全部过筛，并混合均匀)。

封入样品袋，放在阴凉处保存，以备测定。

(2)如果饲料样品是含多汁的鲜样，如青贮、牧草等，无法直接粉碎，应进行预干燥处理：称取200-300g(准确至0.01g)鲜样，在105℃烘箱中烘杀15min，立即把温度降至65℃，烘6-8h，取出，在空气中冷却4h，称量。

失重即初水分w0(H20)。

将得到的烘干样，粉碎，过筛，装袋，以备测定。

4测定步骤
(1)将称量皿洗净，在(105±2) ℃烘箱内烘干1—2h，取出在干燥器内冷却30min，用分析天平称量。

再放入烘箱烘干30min，冷却，称量，直至两次称量之差小于0．0005g为恒重。

(2)用分析天平称取2-5g样品，均匀平摊在已恒重的称量皿中，厚度小于0．5cm。

不盖称量皿盖，在(105±2) ℃恒温烘箱内烘干2—4h。

取出，盖上称量皿盖，放在干燥器内冷却30min，称量，同样再烘1h，冷却、称量。

直至两次称量之差小于0．002g为恒重。

5．结果计算
(1)饲料中水分含量按公式(3—1)计算
式中：W(H2O)—饲料中水分的质量分数，％；
m1—105℃烘干前试样和称量皿总质量，
m2一105℃烘干后试样和称量皿总质量，
m0—105℃烘干的称量皿质量，g。

(2)每个试样应取两个平行样测定，以算术平均值为测定结果。

两个平行样的相对误差应小于0.2％。

(二)粗灰分
粗灰分是饲料中有机物被全部氧化除去后剩余的残渣，主要为矿物质氧化物和盐类等无机物质。

粗灰分的测定方法为高温灼烧法，即将饲料样品放入别550℃±5℃的高温电炉中灼烧，至灰白色，称残渣的重量。

测定饲料中的粗灰分含量，对评定饲料矿物质营养价值意义不大。

(三)粗蛋白质
饲料中的一切合氮物质的总称为粗蛋白质，用饲料中的含氮量乘以6.25进行计算。

粗蛋白质包括真蛋白质(TP)和非蛋白质性含氮化合物。

饲料总氮中的非蛋白氮(NPN）部分对水产动物几乎无用，评定饲料蛋白质营养价值有时需要对饲料中真蛋白质进行分析，如虾粉中含有大量的几丁质氮。

本方法依据GB／T6432—94饲料中粗蛋白测定方法，适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料中粗蛋白的测定。

1原理
凯氏法测定试样蛋白质含量，是在催化剂作用下用浓硫酸将含氮化合物转化为硫酸铵，将生成的硫酸铵在强碱性条件下馏出氨，经硼酸溶液吸收，再用标准酸溶液滴定，将测得的氮含量乘以换算系数6．25，即粗蛋白的含量。

2仪器设备
(1)植物样品粉碎机或研钵。

(2)试验筛：孔径0，42mm(40 目)。

(3)分析天平：分度值0．0001g
(4)专用消煮炉或可调电炉。

(5)酸式滴定管：10mL或25mL。

(6)专用消化管或250mL凯氏瓶。

(7)凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏也可采用专用定氮仪。

(8)三角烧瓶：150mL或250mL。

3试剂
(1)硫酸(AR，ρ=1.84)。

(2)混合催化剂：0.4硫酸铜(CuSO4·5H2O，AR )和6g硫酸钾(K2SO4，AR)，磨细混均。

(3)40％氢氧化钠溶液：称取40g氢氧化钠(NaOH,CP)溶于1mL蒸馏水中。

(4)2％硼酸溶液：称取20g硼酸(H3BO3，AR)1000mL蒸馏水中。

(5)混合指示剂：将0.1％甲基红乙醇溶液与0.5％溴甲酚绿乙醇溶液，按1：1等体积混合。

(6)0.1000mol/L盐酸(HCl)标准溶液：取8．3mL盐酸(AR)注入1000ml蒸馏水。

用无水碳酸钠(280℃烘干)法标定准确浓度。

称取0．2000g，溶于50mL水，加混合指示剂，用0.1mol/L盐酸滴定至暗红色。

同时滴定空白，加以校正。

(7)蔗糖(AR)
(8)硫酸铵(AR)
4操作步骤
(1)选取有代表性的样品用四分法缩分至200g，风干或以65℃烘干后粉碎，过0.42mm 试验筛，封入样品袋，在阴凉处保存，以备分析。

(2)用分析天平准确称取0.3—1.0g制好的试样，放入专用消化管或凯氏瓶中，加入混合催化剂2.0g和12mL硫酸，盖好专用消化管盖或凯氏瓶口盖一漏斗，置于专用消煮炉或可调电炉上消煮，开始用小火加热消煮，待泡沫消失后再加大火力保持微沸状态，直至溶液透明呈蓝绿色并继续消煮2h.
(3)将消化的试样放冷，加入50-60mL蒸馏水，摇匀，冷却。

将蒸馏装置冷凝管末端浸入内装25mL 2％硼酸溶液的三角瓶底部，加入2滴混合指示剂。

然后小心地向消化液内加入50mL40％氢氧化钠溶液，立即进行加热蒸馏，直至馏出液体体积为100mL为止。

取下三角瓶使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1-2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，停止蒸馏。

(4)滴定：用0.1mol/L 盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变为红色为终点。

(5)空白测定：称取0．5g蔗糖代替试样，按上述操作步骤测定。

5．结果计算
(1)饲料中粗蛋白质的含量按公式计算
式中：w(CP) —饲料中粗蛋白的质量分数，％；
V—滴定试样时所消耗的标准盐酸溶液的体积，mL
V0—滴定空白时所消耗的标准盐酸溶液体积，mL
C B—标准溶液盐酸的量浓度，MryLI
0.0140 —氮的摩尔质量，kg/mol；
m—试样质量，g
(2)每试样取两个平行样进行测定，取平均值为分析结果方法允许相对偏差≤5％。

6注意事项
(1)方法的可靠程度可用硫酸铵代替试样进行测定氮含量，与化学式计量氮作比较，误差应为±0．2％。

例如，准确称取0.2000g硫酸铵测定含氮量应为(21.19±0．2)％
(2)如果试样中蛋白质含量高，可适当减少称样量，同时考虑蒸馏完全的问题，可适当多蒸几分钟，以保证蒸馏完全，防止对下一个样品造成的记忆效应。

(3)凯氏定氮法己沿用了l00多年，目前已有全自动定氮仪，这类仪器从消化、蒸馏到滴定可自动完成，但仪器价格较贵。

目前国产半自动定氮仪实际上是一套蒸馏装置，消化、滴定还要另行试验。

(4)GB6432—94 国标方法中规定样品消化时要加入玻璃球以防爆沸，但我们的经验证明，由于加入大量混合催化剂呈颗粒状，不产生爆沸，故无需加入。

另外，本实验考虑消化需要回流过程和减少蒸馏逸出造成的氨损失，建议消化管或凯氏瓶要加盖消化。

(5)国标方法中使用邻苯二甲酸氢钾作为基准物标定盐酸溶液。

实际上使用无水碳酸钠基准物质标定盐酸溶液也是很方便的。

(四)粗脂肪
粗脂肪包括了饲料中可溶于乙醚的所有成分，故又称乙醚浸出物。

通常用索氏抽提器回流浸提饲料样品进行粗脂肪的测定。

按照国标GB／T6433—94，饲料中粗脂肪的测定方法适用于各种单一饲料、混合饲料和配合饲料的分析。

1原理
采用索氏(Soxhlet)脂肪提取器用乙醚抽提试样，抽提物的总质量为粗脂肪含量。

2．仪器设备
(1)植物样品粉碎机或研钵.
(2)试验筛：孔径0．42mm(40 目)
(3)分析天平：分度值0.0001g
(4)电热恒温水浴锅：室温-100℃。

(5)鼓风电热烘箱：50-200℃。

(6)索氏脂肪提取仪(带球形冷凝管)100-150mL
(7)滤纸或滤纸筒：中速，脱脂。

(8)干燥箱：变色硅胶或无水氯化钙作干燥剂
3试剂
无水乙醚（AR）
4．分析步骤
(1)选取有代表性的试样，用四分法缩分至200g，风干或以65℃烘干后粉碎，过0.42mm 试验筛，混匀封于样品袋内，于阴凉处保存，以备分析。

(2)索氏提取器应干燥无水，把抽提瓶(内装数粒沸石)在(150±2)℃烘箱内烘干1—2h，取出放入干燥器内冷却30min，称量。

再烘30min，同样冷却，称重。

两次称量之差小于0．0008g 为恒重。

(3)视饲料中脂肪含量称取l—5g(准确至0．0002g)置于滤纸筒内，或用滤纸包好，放入l05℃烘干1—2h，取出放入抽提器内，滤纸包应完全浸入乙醚，向抽提瓶内加60-100mL乙醚，装好回流装置，在65-75℃水浴上加热回流，控制乙醚回流速度为每小时8-10次，共回流50-70次。

取出试样，仍用原抽提瓶回收乙醚，取抽提瓶，在水浴上蒸除残存乙醚。

(4)将抽提瓶外水分擦干，放入(150±2)℃烘箱内烘干2h，取出放入干燥器内冷却30min，
称量。

同样再烘lh，冷却，称量。

两次称量之差小于0.001g为恒重。

5结果计算
(1)饲料中粗脂肪的含量按公式计算
式中：w(EE)——饲料中粗脂肪的质量分数，％：
m2——己恒重的抽提瓶质量，g；
m l——己恒重的拍提瓶和粗脂肪的总质量
m——风干试样质量，g。

(2)母个试秤取两个平行样测定，取平均值作为分析结果相对误差应小于5％。

6．注意事项
(1)本文介绍的方法又称为油重法，GB/T6433—94中称为仲裁法。

如果样品数量多，又不作为仲裁，可采用减重法。

将风干样称量装入于105℃烘干恒重的滤纸筒内，包好，在105℃烘干，冷却称量。

放入拍提瓶内抽提50—70次。

取出滤纸包，吹干乙醚，放入(105±2)℃烘箱内烘干2h.取出放入干燥器内冷却30min，称量。

滤纸包的减量为粗脂肪含量。

该方法抽提器内一次可放3-5个样品抽提。

由于样品量大，抽提次数可适当多些。

(2)目前，全自动脂肪测定仪已有销售，使用这类仪器可按仪器说明书操作。

(五)粗纤维
粗纤维是植物细胞壁的主要组成成分，它包括纤维素、半纤维素、多缩戊糖、木质素及角质素等成分。

粗纤维影响饲料的消化，但适宜的水平对动物是必需的。

测定饲料中粗纤维的含量是控制饲料中适宜的粗纤维水平的前提。

通常用稀硫酸和稀Na0H溶液溶解饲料样品，不溶性残渣为粗纤维。

概略养分分析法测定粗纤维时，由于部分半纤维素、木质素溶解于酸、碱中，导致结果出现误差。

Van Soest(1976)腾出了改进方案，用中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维(ADF)、酸性洗涤木质素(ADL)，作为测定饲料中纤维性物质的指标。

国标GB／T6434-94 饲料中粗纤维的测定方法适用于各种混合饲料、配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。

牧草、青贮等饲料中粗纤维高达60％—80％(干物质计)，而精料中，如玉米、豆粕中粗纤维不过2％—4％。

1 原理
饲料用稀酸和稀碱在规定条件下分别进行消煮，再用乙醇除去可溶物，经高温灼烧后扣除矿物质所剩余的物质总称。

主要包括纤维素、半纤维素、木质素和少量杂质，如果胶等。

2仪器设备
(1)植物样品粉碎机或研钵。

(2)试验筛：孔径1mm。

(3)分析天平：分度值0．0001g。

(4)可调电炉。

(5)高温电阻炉。

(6)电热恒温箱。

(7)消煮器：有冷凝球的600mL高型杯或有冷凝管的瓶。

(8)抽滤装置：包括真空泵、吸滤瓶和30ML滤埚(内铺孔径0.42mm不锈钢网)或G2玻璃砂滤埚。

(9)干燥器：变色硅胶或无水氯化钙作干燥剂。

3．试剂
(1)0.225mol／L 硫酸(1/2H2SO4)溶液：将6.93mL硫酸(AR，98％)移入500mL蒸馏水，冷却后定容至1000mL。

用氢氧化钠标准溶液标定其浓度，允许误差±0.005mol/L。

(2)0.313mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液：准确称取12.52g氢氧化钠溶于500mL蒸馏水，冷却后定容至1000mL。

该溶液可用邻苯二甲酸氢钾基准物质标定，浓度允许误差±0.005mol/L。

标定方法：称取1.8000g 105-110℃烘干的邻苯二甲酸氢钾基准物，溶于5mL不合二氧化碳的蒸馏水中，加2滴1％酚酞指示剂，用配好的氢氧化钠溶液滴定至粉红色。

同时滴定空白。

按以下式计算氢氧化钠溶液的量浓度c(NaoH)：
式中：c(NaOH)—NaOH 标准溶液浓度，mol/L
m—邻苯二甲酸氢钾的质量，g
V1—滴定时所用NaoH溶液体积，mL；
V0—滴定空白时所用NaoH溶液体积，mL：
0.2042—邻苯二甲酸氢钾的摩尔质量，kg/mL。

(3)酸洗石棉：将市售的酸洗石棉先用盐酸溶液(1+3)煮沸30min，过滤烘干后于550℃高温电阻炉内灼烧16h。

用0.255mol/L 硫酸(1/2H2SO4)溶液浸泡并煮沸30min，过滤，用水洗净，再用0．313nDl／L氢氧化钠(NaOH)溶液煮沸30min，过滤，可先用少量酸洗一次，再用水冲洗至中性，烘干后于550℃高温电阻炉内灼烧2h。

冷却装瓶备用，此酸洗石棉空白试验每克含粗纤维值应小于0.001g。

(4)95％乙醇(CP)
(5)乙醚(CP)
(6)正辛醇：(AR)。

4．测定步骤
(1)取有代表性饲料样品用四分法缩至200g，风干或以65℃烘箱烘干后，用植物粉碎机粉细，全部通过lmm试验筛，混匀，封入样品袋，作为试样以备测定。

(2)用分析天平准确称取1—2g试样，放入消煮器内，加入200mL 0.255mol/L硫酸(1/2H2SO4)溶液和一滴正辛醇，装好冷凝球或冷凝管立即快速加热至沸，调节加热器保持微沸状态30min。

立即抽滤(古氏坍塌内铺孔径6.5μm尼龙布)。

残渣用蒸馏水洗至中性，抽干，用200mL 0．313mol/L氢氧化钠(Na0H)溶液将残渣完全转入原消煮溶器内，同样煮沸30min。

立即用已于550℃恒重的滤埚铺酸洗石棉0.2-0.3g)过滤。

先用25mL0.255mol/L硫酸(1/2H2SO4)溶液洗涤一次，再用蒸馏水沉至中性。

抽干后用15 mL乙醇洗涤一次。

(3)抽干后将滤埚放入130℃烘箱内烘干2h取出放入干燥器内冷却30min，称量。

再移入550℃高温电阻炉内灼烧1h，取出冷却至130℃左右，放入干燥器内冷却30min，称量。

5计算结果
饲料中的粗纤维含量按下式计算
式中：w(CF)——饲料中粗纤维的质量分数，％：
m1——130℃烘干后滤埚和试样残余物总质量，g
m2—550℃灼烧后滤埚和试样残渣总质量，g；
m一称取的试样质量，g。

6注意事项
(1)饲料样品脂肪含量一般不超过l0％，但肉骨粉类等动物性饲料，脂肪超过10％，应先用乙醚进行脱脂后再按消化步骤处理样品。

(2)目前市售的专用粗纤维测定仪种类很多，不同仪器操作步骤可按仪器说明书进行，但基本步骤为：称取1—2g试样于G2玻璃砂滤埚，放入热萃取器，从顶部加入预热至沸的0.255mol/L硫酸(1/2H2SO4)溶液200mL和正辛醇2滴，将加热钮开至最大，当溶液沸腾时，调节至微沸保持30min，抽滤，用沸蒸馏水沉至中性，抽干，加入预热至沸的0．313mol/L 氢氧化钠溶液200mL，同样煮沸30min，抽滤，用沸蒸馏水洗至中性。

再用25mL95％乙醇洗涤，抽干。

移入（130±2)℃烘箱烘干2h，取出放入干燥器冷却30min，称量。

再放入550℃高温电阻炉内灼烧1-2h至灰分变白，冷却，称重。

按上式计算粗纤维含量。

(六)无氮浸出物
概略养分分析法中不直接分析无氮浸出物，而是将总量减去水分、灰分、粗蛋白质、粗纤维和粗脂肪，所得的差定义为无氮浸出物。

它主要包括糖和淀粉，但也有部分半纤维素和木质素。