TUNEL 凋亡染色-罗氏公司

TUNEL 凋亡染色
参照罗氏公司的TUNEL凋亡试剂盒说明书进行并适当改进
1、石蜡切片常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水；
2、蒸馏水缓慢冲洗后室温下干燥；
3、切片置于250ml柠檬酸（0.1M，pH6.0，10.505g C6H8O7.H2O+500ml H2O）中微波加热至沸腾，静置5min后加入100ml ddH2O；
4、15min后取出切片，标本上滴上10%山羊血清（0.5%BSA），于37°C封闭15min（室温封闭45min）；
5、TUNEL试剂1和试剂2按照1:9比例充分混匀，离心，滴加至标本（试剂覆盖组织即可），37°C孵育1h；
6、PBS清洗3次，每次10min，抗荧光淬灭剂封片，荧光显微镜摄像。

（5、6需避光操作）
7、去掉盖玻片，PBS清洗3次，每次5min；
8、滴加POD至标本，37°C孵育30min；
9、PBS清洗3次，每次5min，DAB显色；
10、苏木素复染，光学显微镜摄像。

凋亡指数（AI）计算：采用IPP随机选取5个高倍（X400）视野，计数至少1000个细胞，阳性细胞占细胞总数的百分比即为AI。

数据采用均数+/-标准差表示，采用SPSS17.0统计软件，多个样本均数比较采用ANVOA分析，以SNK-q检验进行均数间多重比较，以p<0.05有差异统计学意义。