肝癌、肝硬化和乙肝患者血清里BLM自身抗体表达量的研究

·临床研究·肝癌、肝硬化和乙肝患者血清里BLM自身抗体表达量的
研究
鲍林春，王兴林，贺敏，吴健，张传跃，张望明
（黔西南布依族苗族自治州人民医院 检验科，贵州 黔西南562400）
摘要：目的研究肝癌、肝硬化和乙肝患者血清里BLM自身抗体表达量情况。

方法采用ECL化学发光法鉴定BLM蛋白的纯度，采用间接ELISA法对20例恶性肿瘤患者54例肝硬化患者、70例乙肝患者和40例健康体检者外周血血清中抗BLM解旋酶自身抗体进行检测，对OD值进行比较分析。

结果 BLM蛋白纯度高，可作为抗原包被ELISA96孔板。

应用间接ELISA法测OD值比较发现：肝癌患者和肝硬化患者血清抗BLM解旋酶自身抗体量明显低于正常对照组（P<0.001）。

结论检测乙肝患者BLM自身抗体表达量对于肝病慢性化的进展，将成为一项新的临床预测指标。

关键词：BLM自身抗体；肝癌；肝硬化和乙肝
中图分类号：R657.3+1 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1671-3141.2016.104.090
0　引言
在DNA解旋酶中RecQ解旋酶家族占据着一个非常重要的角色，这个家族在整个生物进化过程中都一直延续着相当高的保守性，并且在维持各种生物体的遗传基因稳定性方面和细胞的正常代谢过程等方面都显得格外重要[1]。

BLM基因突变使姐妹染色单体互换率（sister chrom a tic exchange，SCE）增高，细胞DNA修复功能降低，这样受损的DNA很容易随细胞分裂而传入子细胞，细胞稳定性下降；临床表现为免疫缺陷，恶性肿瘤易患体质等等。

本研究对乙肝、肝硬化及其肝癌患者血清中的BLM解旋酶自身抗体表达量差异进行研究，内容如下：
1　资料和方法
1.1　资料。

研究对象：
1.1.1　慢性迁延性肝炎乙型（CPH）70例，男 45例，女25例，年龄20~60岁。

慢性活动性肝炎乙型（CAH）30例，均为男性，年龄 l9~62岁。

急性乙型肝炎（A—HBV）40例，男19例，女 11例，年龄 17~63岁。

1.1.2　肝硬化组（LC）：共54例，为2014年6月至2015年12月期间在黔西南州人民医院住院的病人，其中男46例，女8例，年龄25~71岁，平均53岁。

Child A级病人10例，Child B 级病人22例，Child C级病人22例；其中37例为失代偿期肝硬化患者，17例为代偿期肝硬化患者。

1.1.3　原发性肝癌组（PHC）：共20例，男14例，女6例，年龄29~72岁，平均56岁，其中有远处转移者8例（占25％），无远处转移者12例（占75％）。

1.1.4　正常对照组：同地区2014年6月至12月进行体检的人群（体检组）和住院的患良性疾病的非肿瘤患者（良性疾病组）。

共105例，其中男性48例，女性57例，平均年龄（44.3±15.4）岁。

三组间性别、年龄差异无显著性，具有可比性。

1.2　方法。

ECL化学发光法（鉴定BLM蛋白的纯度）:显影、定影：取出ECL化学发光试剂盒，平衡至室温，按1:1混合A、B液（最终体积约为0.05~0.1ml试剂/cm2膜）。

平铺适当大小的保鲜膜，将NC膜置于保鲜膜上，将混合液均匀滴加在NC 膜表面，覆盖蛋白条带。

用保鲜膜将NC膜包好，避免产生气泡，在暗室中取出X胶片，裁剪成适当大小，覆盖在NC膜上方，关上曝光夹。

曝光30s后取出X胶片，迅速浸入显影液中显影约1min，自来水洗去残留显影液，再将X胶片迅速放入定影液中定影1~2min，自来水洗去残留定影液，室温下晾干。

间接ELISA法:用包被缓冲液分别将抗原（BLM解旋酶）按1:10000（0.1μg/ml）稀释，100μl/孔加入到96孔酶标板中，4℃过夜。

然后加入稀释的乙肝、肝硬化和肝癌的血清37℃孵育1h，然后再加入酶标抗体100μl/孔，37℃孵育1h，最后加入显色剂显色，在酶标仪上双波长测定OD值。

1.3　统计学处理。

所有患者数据均用SPSS 20.0软件进行核对，计量资料用（χ—±s）表示，采用t检验。

肝癌患者和肝硬化患
者与正常对照组血清抗解旋酶自身抗体含量的比较存在显著差异（P<0.05）。

2　结果
肝癌患者和肝硬化患者与正常对照组血清抗解旋酶自身抗体含量的比较。

肝癌患者和肝硬化患者血清抗BLM解旋酶自身抗体量明显低于正常对照组（P<0.01），其中肝癌患者组和肝硬化患者组血清抗BLM解旋酶自身抗体的含量均与体检组有非常显著性差异（P<0.01）；乙肝组较体检组血清抗BLM解旋酶自身抗体的比较差异无统计学意义，如表1所示：
表1　各组血清抗解旋酶自身抗体（OD值）的比较
分组例数
χ—±s
抗BLM解旋酶自身抗体肝癌组200.205±0.167**
肝硬化组540.292±0.135*
乙型肝炎组700.378±0.121
体检组1050.418±0.160
注：与体检组比较，*P<0.05，**P<0.01。

3　讨论
癌症是目前危害人类健康最严重的一类疾病，肝癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，在全球恶性肿瘤发病率中排第五位，死亡率排名第二位，大约每年有69万患者死于肝癌[2]。

肝癌5年生存率不足5％，肝癌病人确诊越晚，其预后效果越差。

晚期诊断严重限制了肝癌治疗手段的选择，因此肝癌的早期发现非常重要，阐明肝癌发生机制将有助于寻找早期诊断肝癌的肿瘤标记物。

本研究发现，肝癌患者血清的抗BLM解旋酶自身抗体与正常对照组相比明显降低，从一个侧面反映在恶性肿瘤患者体内由于细胞破裂释放入血的正常结构的BLM解旋酶远比正常体检的人群低，可能原因如下：（1）正常结构的解旋酶在肿瘤细胞中呈低表达状态。

机体的DNA损伤修复机制缺陷与多种人类
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骨慢性损伤或软组织粘连。

而关节活动量减少、关节退行性变及关节不稳定又加重了关节损伤，从而形成恶性循环，影响病人日常生活活动。

传统治疗方法主要以口服药物，临床上常用的为非甾体类消炎、止痛药（NSAID）或者肾上腺皮质激素类药物（口服或关节腔注射）。

药物治疗主要以解热、镇痛为主，虽然可以解决病人的疼痛问题，但由于需长时间服药及药物的副作用[10]和经济等诸多原因，多数病人难以坚持。

关节内注射玻璃酸钠注射液治疗膝关节骨性关节炎在此之前于临床上已得到广泛应用[11-12]。

玻璃酸是人体内的生理活性物质，是关节滑液的主要成分，又是构成软骨基质的成分之一。

玻璃酸是由葡糖醛酸和乙酰氨基葡糖组成双糖单位结合而成的一种黏多糖。

它具有特殊的黏弹性和保水性，可润滑关节，防止粘连；可在关节软骨面形成黏弹性保护膜，防止软骨基质进一步破坏，促进软骨愈合和再生；SH（玻璃酸钠）分子网能够抑制炎症介质的扩散，减少滑膜渗出；可抑制痛觉感受器中痛觉纤维的兴奋性，缓解疼痛，改善关节功能。

本观察发现，单纯用玻璃酸钠关节内注射，尤其是在减轻疼痛、提高关节功能方面具有统计学意义。

智能通络治疗仪是国家中医药管理局首批推荐的中医诊疗设备，其主要性能为中医分证型治疗、中医定向透药治疗、热疗及综合治疗。

膝关节骨性关节炎属于中医“痹症”范畴，临床分为风寒湿痹型、劳力失度型、气血亏虚型、肝肾不足型。

本组中劳力失度为多，也即现代医学所称的慢性劳力为多。

痹痛型电极保湿垫内含有经萃取的中药成分，主要有红花、川穹、牛膝、元胡、炮姜、肉桂、黄芪、花椒、伸筋草、透骨草等成分。

红花、川穹、牛膝活血化瘀，元胡、炮姜温经止痛，黄芪补益气血，花椒、伸筋草、透骨草舒筋活络，加以智能通络治疗仪的分证型补、泻、平补平泻电刺激治疗及中医定向透药治疗共奏，补益气血、温经通络、化瘀止痛、滑利关节等功效。

中药离子导入仪是根据生物电药导理论、热敷医学、磁场学、中国古典中医医学及现代微电脑技术，结合多年临床实践研发的新一代医疗仪器。

该仪器在设计上引用了先进的中频技术，因而该仪器具有中频药物导入和中频仿生按摩及热、磁制冷的多重功能，调制的中频电流能促进皮肤电阻下降，扩张小动脉和毛细血管，改善局部血循环；同时，该仪器的非对称中频电流产生的电场，对药物离子产生定向的推动力，使药物中的有效成分更深入、更有效地透过皮肤黏膜快速的进入人体，作用于患部病灶，具有消炎、消肿、镇痛、舒筋通络、松解粘连、调节和改善局部循环的作用[7]，能缓解和消除膝关节骨性关节炎造成的交感神经及神经根的麻木、刺痛等症状。

综上所述，通过本院临床随机对照研究结果表明，老年膝关节骨性关节炎中药离子导入外用联合玻璃酸钠注射治疗的临床疗效显著高于常规口服非甾体类消炎、止痛药（NSAID）或者肾上腺皮质激素类药物（口服或关节腔注射）治疗，从而可以大大减少因长期大量口服此类药物导致的不良反应。

随着研究的不断深入，SH（玻璃酸钠）会显示出更多的用途及更好的发展前景。

参考文献
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退行性膝关节的流行病学调查[J].中国临床康复，2005，9（47）：8-9.
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观察[J].中国矫形外科杂志，2001，8（1）：40-41.
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性关节炎[J].中国中医骨伤科杂志，6（3）：39.
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杂志，2007，10:793-796.
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洗治疗膝骨性关节炎[J].山东中医杂志，2009，28:32-32.
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[8]　徐桂莲.膝关节骨性关节炎的治疗进展[J].贵州医药，2006，30
（12）：1142-1143.
（上接第113页）
疾病有关，包括遗传性疾病、环境相关疾病、衰老、肿瘤等，RecQ解旋酶参与多条DNA损伤修复途径，如碱基切除修复、核苷酸切除修复、DNA错配修复、同源重组及非同源末端连接，在维护基因组稳定性中发挥重要作用。

（2）人类RecQ家族解旋酶可以成为抗癌治疗的一个潜在靶点[3-4]。

易雪[5]等应用半定量 RT-PCR法对六株肿瘤细胞株及正常人造血细胞中BLM mRNA 水平进行检测，结果发现在六种肿瘤细胞株中均高表达 BLM mRNA，与正常人 BLM mRNA 的表达有显著性差异，也提示了BLM高表达与肿瘤的发生之间关系紧密；Su等[6]发现RecQL4在前列腺癌细胞中高表达和Ramiro Mendoza-Maldonado等[7]发现RecQ1在恶性胶质瘤细胞中高表达。

以上也能为肝癌患者和肝硬化患者血清抗BLM解旋酶自身抗体量明显低于正常对照组（P<0.01）提供一定的事实依据。

（3）肿瘤患者免疫功能受抑制。

抗BLM解旋酶自身抗体是自身抗体，恶性肿瘤属于消耗性疾病，肿瘤患者的细胞免疫和体液免疫功能下降，现在研究还发现了个别解旋酶甚至参与了机体天然免疫反应调控机制[8]。

因此其抗BLM解旋酶自身抗体的含量也比正常对照组低是有依据的。

综上所述，肝癌患者和肝硬化患者血清中抗BLM解旋酶自身抗体的含量比体检者和乙肝疾病者低。

研究得知：肝癌患者和肝硬化患者血清抗BLM解旋酶自身抗体量明显低于正常对照组（P<0.01），其中肝癌患者组和肝硬化患者组血清抗BLM解旋酶自身抗体的含量均与体检组有非常显著性差异（P<0.01）；抗BLM解旋酶自身抗体有望成为早期诊断肝癌的肿瘤标记物之一。

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