ABO、RH 血型系统及鉴定

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方法学评价
盐水凝集法 可分为玻片法和试管法，操作简便， 无需特殊仪器。 玻片法：无需离心，适用于血型普查。但反应时间长， 灵敏度差，凝集较弱时易导致定型错误。血清抗体效 价低时不易出现凝集，故不适于反向定型。 试管法：用离心法加速血型抗原抗体反应，故所需时 间短，适于急诊定型。因离心增强红细胞凝集，可发 现较弱的凝集现象，有助于检出亚型，故为常用血型 鉴定方法。
RH血型鉴定

RH血型检测方法及检测 原理 方法学评价 质量保证 临床意义
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ABO血型系统背景
ABO血型系统---免疫原性最强
1900年，出生于奥地利的美国免疫学家Karl Landsteiner (1868-1943年)发现不同个体的红细胞膜表面A、B血型抗（blood -group antigen）和血清中抗A、抗B血型抗体（blood-group antibody）各不相同，其分布具有一定的规律性。根据红细胞 膜上是否存在A、B抗原及血清中是否存在抗A、抗B抗体，可将人 类血型分为A、B、AB和O型。红细胞膜表面只有A抗原者为A型， 其血清中通常存在抗B抗体；红细胞表面只有B抗原者为B型，其 血清中通常存在抗A抗体；红细胞膜表面同时具有A抗原B抗原者 为AB型；红细胞膜上既无A抗原又无B抗原者为O型。
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方法学评价
凝胶微柱法 重复性好，特异性和灵敏度高，结果准确。因可在 凝胶中加入抗球蛋白，有助于促进红细胞特异性凝 集。试剂、标本定量加样；可用手工、半自动、全 自动操作。全自动仪器分析不仅可减少人为误差， 还便于临床输血计算机管理。 试剂成本较高，需用离心设备。
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ABO、RH 血型系统及鉴定
血型概述
血型是人类血液以血型抗原为表现形式的遗 传性状，血型由血型基因决定，是血细胞的主要 特征之一。ABO血型系统（blood group system）和Rh血型系统是红细胞的2大血型抗 原抗体系统，在临床输血和血液遗传学研究上有 重要意义。血型鉴定和交叉配血是保证输血安全 的主要措施。
ABO血型系统抗原—分布
A、B、H抗原主要存在于红细胞膜上。同时也分布 在白细胞、血小板及其他组织细胞上。组织细胞合成 并分泌的水溶性A、B、H血型抗原多为半抗原，称为血 型物质（blood-group substance）,血型物质广泛存 在于人体的各种体液和分泌物中，以唾液中含量最高， 其次是血清、尿液、精液、羊水等。体液中含有血型 物质者为分泌型，体液中不含血型物质者为非分泌型。 血型物质具有与相应抗体反应的性质，测定唾液血型 物质可协助鉴定ABO血型，检查羊水血型物质可以预测 胎儿血型。
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鉴定方法
盐水凝集法： ABO血型抗体以IgM为主，IgM 为五聚体免疫球蛋白，其相对分子质量大，是完全 抗体。IgM抗体克服红细胞表面排斥作用能力强， 在生理盐水中与含有相应ABO血型抗原的红细胞结 合，出现肉眼可见的凝集现象。
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鉴定方法
凝胶微柱法： 利用凝胶分子筛作用和亲和效应， 以凝胶微柱为反应介质，在透明塑料卡上凝胶管的 凝胶介质中的红细胞与相应抗体结合，形成红细胞 凝块，经低速离心处理，凝胶红细胞悬浮的凝胶中， 未结合抗体的红细胞则沉于凝胶底部。本法用单克 隆抗体，特异性高。根据不同需要可选用中性凝胶、 特异凝胶或抗球蛋白凝胶作为反应介质。结果既可 肉眼观察，也可用血型分析仪分析。
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ABO血型系统抗体
ABO血型抗体按其来源可分为天然抗体和免疫性抗 体。天然抗体主要由自然界中具有与A、B血型抗原结 构相同的物质刺激机体的免疫系统产生，主要为IgM型 免疫球蛋白。免疫性抗体则来自母婴血型不合的妊娠 或血型不合的输血，新生儿血清中的抗体通常是来自 母体的IgG型免疫球蛋白。抗体在出生后3-6个月开始 出现，青春期达到高峰，持续终身，但其效价随年龄 增高而逐步降低。
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主要内容
ABO血型系统

RH血型系统

ABO血型系统背景 ABO血型系统抗原 ABO血型系统抗体 ABO血型系统亚型 检测原理 鉴定方法 方法学评价 质量保证 临床意义
RH血型系统的命名 RH血型系统抗原 RH血型系统抗体
ABO血型鉴定

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ABO血型系统抗体
表3
特性 分子量（kD） 耐热性（70℃）
ABO血型系统抗体的特性
IgM型 1000 破坏 4-25 生理盐水 能 IgG型 160 稳定 37 酶处理或清蛋白溶液 不能
与红细胞结合最适温度（℃） 与红细胞反应介质 被血型物质中和
通过胎盘
不能
能
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B 无
抗A1（25%）ห้องสมุดไป่ตู้
抗A，抗A1 抗A，抗B和抗A1
+
-
+
+ -
-
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ABO血型检测原理
输血安全是临床输血的首要问题，正确的血型鉴定 是保证输血安全的前提条件。 检测原理：血型抗原与相应抗体在反应介质中形成 红细胞和相应血型抗体结合的免疫复合物，出现肉 眼可见的凝集现象。用已知的特异性标准血清检查 红细胞的未知血型抗原称为正向定型（direct typing）,用已知血型的标准红细胞检查标本中的未 知血型抗体称为反向定型（indirect typing）。
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RH血型系统的命名
Rh系统表型及基因型 根据CDE命名法，人类红细胞的Rh抗原理论上有C、D、E和c、d、 e共6种，由于尚未发现d抗体，相应也未发现d抗原。因此现有5 种Rh抗原，相应有5种Rh抗血清。 临床实验室常用5种Rh抗血清鉴定红细胞上的Rh抗原，其中D抗 原最为重要。 根据红细胞上有无D抗原将红细胞分为Rh阳性和Rh阴性，中国人 约99.6%为Rh阳性，0.4%为阴性。
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质量保证
4. 综合分析试验结果
对异常现象如正、反向定型结果不一致时，要查找原因，解决 存在问题。准确无误登记结果，经仔细核对后方可发出报告。
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临床意义
输血 血型鉴定是临床输血的首要步骤，输血前必须准确鉴 定受血者及供血者的血型，选择同型血源，经交叉配血相符后 才能实施输血。 器官移植 ABO血型抗原是一种广泛分布于人体器官组织血 管内皮细胞表面的移植抗原。在器官移植时，应力求受体和供 体间ABO血型一致，否则供体中的血型抗体可作用于移植物血 管内皮表面的ABO血型抗原发生超急性排斥反应，导致移植失 败。 新生儿溶血病 母子ABO血型不合的妊娠后期，由于局部胎 盘破裂造成少量胎儿红细胞进入母亲的血液循环，刺激母体免 疫系统产生针对胎儿红细胞的IgG型血型抗体，当抗体效价大 于1:64时，胎儿发生溶血病的几率增高。 其他 ABO血型检查还可用于法医学鉴定及某些疾病的相关 调查。
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ABO血型系统抗原—组成和遗传
ABO血型系统抗原是存在于红细胞膜上的一种糖蛋白，由多肽 和糖链组成。在人类的遗传特性中有一对分别来自母亲和父亲的 A、B、O血型基因（blood types gene）,主要功能是调控血型抗 原的合成，表型即所检测到的红细胞血型。A和B基因是显性基因， O基因则是隐性基因。因此，表型为A的个体其基因型可能是AA或 AO，表型为B的个体其基因型可能是BB或BO。A血型和B血型的主 要抗原成分分别由A、B基因调控。除ABO血型基因外，存在于ABO 各型红细胞膜上的H抗原是形成A、B血型抗原的结构基础，H抗原 又称H物质，受H基因的调控，H基因的遗传与ABO基因无关。H物 质抗原性较弱，血清中一般测不出H抗体。妊娠5-6周的胎儿红细 胞已能测出ABO血型抗原。新生儿ABO血型的抗原性较弱，约为成 人的20%，以后随年龄的增长而不断增强，20岁左右到达高峰， 进入老年期逐渐减低。人的ABO血型抗原一般终身不变。
1.标准血清 标准血清新鲜，应在有效期内使用， 效价高，凝集力强，正确存放，严防污染。常用的抗 血清有：
人血清ABO血型抗体：1.特异性高。2.凝集效价：抗A不低于 1:128，抗B不低于1:64。3.亲和力：反应开始15s内即出现凝集， 3min时明显凝集，血凝块大于1mm*1mm。4.稳定性高。5.已灭火 补体。 人ABO血型单克隆抗体：1.特异性：抗A抗体特异凝集具有A型 红细胞抗原的A1、A2、A1B、A2B；抗B抗体只凝集含B抗原的B和 AB型红细胞。2.亲和力：国家标准是抗A对A1、A2、A2B分别为 15s、30s、45s；抗B对B型红细胞为15s。3.凝集效价：国家标准 是抗A1、抗B均大于1:128。4.稳定性：较人血清抗体的稳定性低。
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ABO血型系统抗原—组成和遗传
表1
血型 A B AB O
人类ABO血型系统
红细胞膜抗原 A B A, B 血清中抗体 抗B 抗A 抗A，抗B
表2
血型（表型）
ABO血型的表型与基因型
基因型 血型（表型） 基因型
A B
AA,AO BB,BO
AB O
AB OO
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RH血型系统的命名
Fisher-Race命名法（CDE命名法） CDE命名法简明易懂，为临 床常用。其要点是： Rh血型系统的遗传基因是位于1号染色体短臂上的连锁基因，每 条染色体有三个连锁的基因位点，依次排列为CDE。 各基因位点由一对等位基因组成。 CDE三个连锁基因以复合体的形式遗传。 由三个连锁基因可产生8种基因组合和36种遗传型
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Rh血型系统抗原及抗体
Rh血型系统抗原

Rh血型系统抗原强度仅次于ABO血型系统的A抗原及B抗原。 目前已发现的Rh抗原有45种，其中与人类关系最为密切的 是D、E、C、c、e五种，其中以D抗原的抗原性最强，依次 是 E 、 C 、 c 、 e。
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质量保证
3.试验器材
所用器材必须清洁、干燥，试管、滴管要专用，标记清楚。 用试管法定型时，应同时进行正向和反向定型。每批测定均须 设置对照。 红细胞浓度按要求配置，红细胞与相应抗体的比例适当。 反应温度、反应时间、离心时间是血型鉴定的重要影响因素， 要按操作规程严格控制。 仔细观察结果，注意出现弱A亚型和弱B亚型，肉眼判断有疑 问时，必须用显微镜复查。
结果判断
表5
正向定型 标准血清+被检者红细胞 抗AB 抗A + + 抗B + + (O型血清) + + + -
ABO血型正、反向鉴定及结果判断
反向定型 标准红细胞+被检者血清 A型 红细胞 + + B型 红细胞 + + O型 红细胞 A型 B型 AB型 O型 结果判断
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ABO血型系统亚型
表4
血型 A1 A2 A1B
ABO亚型抗原抗体及抗原与抗血清的反应
血清中抗A、抗B抗体 抗B，抗H 抗B和抗A1(1%-2%） 抗H 与抗血清的反应 抗A + + + 抗B + 抗A1 + +
红细胞表面 A、B抗原 A1和A A A1，A和B
A2B
B O
A和B
ABO血型系统亚型
A、B血型因抗原结构的差异在同一血型形成若干 亚型。A抗原的主要亚型有A1和A2，约占A型血的 99.9%。 A1和A2红细胞均能与抗A血清发生直接凝 集反应。由于存在A1和A2亚型，因此AB血型中也存 在相应的A1 B和A2 B亚型，中国人A、AB血型以A1 、 A1 B亚型为主， A2 、 A2 B亚型仅占1%。B亚型较 少见，且抗原性弱，故临床意义不大。
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质量保证
2.被检红细胞
标本新鲜，严防污染。细菌污染的标本或严重细菌感染患者的 红细胞上T抗原被激活，与标准血清中的T抗体结合，出现全 凝集现象，干扰血型鉴定。 某些疾病如多发性骨髓瘤、慢性肝病所致的高球蛋白血症在作 ABO血型鉴定时出现假凝集，可加做自身血清和红细胞，自 身红细胞和生理盐水对照试验及结合反定型结果进行鉴定。当 疑有血浆成分干扰血型鉴定时可用生理盐水反复洗涤红细胞以 除干扰。