一例人工养殖大鲵“大脚病”的诊治

一例人工养殖大鲵“大脚病”的诊治
马永兵;余波;徐景峨;周思旋
【期刊名称】《科学养鱼》
【年(卷),期】2014(000)012
【总页数】2页(P64-65)
【作者】马永兵;余波;徐景峨;周思旋
【作者单位】贵州贵阳市水产技术推广站 550005;贵州省畜牧兽医研究所;贵州省畜牧兽医研究所;贵州省畜牧兽医研究所
【正文语种】中文
大鲵(Andrias davidianus)，俗称娃娃鱼，为国家二级保护动物，是我国珍稀的特种经济动物。

近年来由于人工大量工厂化养殖，大鲵暴发了各种疾病。

2014年6月，贵州省某大鲵养殖场发生了以大鲵出现“大脚病”、腹部和背上出现“打印”为特征的疫病。

经过临床症状观察、病理解剖及实验室诊断，诊断为嗜水气单胞菌和柠檬酸杆菌的混合感染。

通过采取综合有效的防治措施，大鲵养殖场疫情得到有效控制。

现将诊治情况报告如下。

一、发病情况及临床症状
2013年12月，贵州省某大鲵养殖场体重100～300克、体长20～30厘米的大鲵，在更换新的水泥养殖池后15天突然发病。

发病初期大鲵行动缓慢，摄食量减少，7～10天后病鲵出现皮肤溃烂，大鲵出现了“大脚”，腹部和背上出现“打印”，过后出现大量死亡。

用庆大霉素浸泡，部分使用氟苯尼考进行肌肉或腹腔注
射治疗无效，陆续死亡，发病大鲵死亡率高达60%以上。

二、病理剖检
对病死大鲵进行病理剖检，其结果如下：病死大鲵下颌与腹部皮肤出现溃烂，出现“打印”，四肢肿大，前肢出现溃烂；剖解后，肝脏肿大，有淤血呈花斑状，胆囊充盈，脾脏肿大。

三、实验室检验
1.细菌学检查
(1)细菌的分离培养。

采用无菌操作，用接种环针刺取患病大鲵的肝脏组织接种在
普通血清琼脂平板，同时用接种环将腹水接种在普通血清琼脂平板上，于28℃恒
温培养18～24小时，分离得到2株细菌分别记为：DY1、DY2。

在显微镜下，
DY1菌革兰氏染色阴性、两端钝圆、散在或个别成双排列、杆状、无芽孢。

DY2
菌革兰氏染色阴性、短杆菌杆状、两端钝圆、散在(有的成双)、无芽孢。

(2)生化鉴定。

应用细菌生理生化鉴定管，对分离的DY1、DY2菌株进行生化鉴定。

(3)药敏特性的测定。

按常规药敏纸片法，应用19种抗生素药物测定分离菌株的耐药性，分别将分离菌株DY1、DY2涂布法接种在血清平板上，然后将药敏纸片贴
在培养基上，28℃培养18～24小时，测定抑菌圈直径，敏感度根据杭州微生物
试剂有限公司提供的标准进行判定。

2.16S rRNA基因序列分析
经分析，DY1分离菌株的16S rRNA序列与Gen-Bank基因库嗜水气单胞菌的
16S rRNA基因进行比对，核苷酸相似性在99%以上，综合细菌培养和生理生化
结果表明分离到的病原菌DY1为嗜水气单胞菌。

DY2分离菌株的16S rRNA序列与GenBank基因库柠檬酸杆菌的16S rRNA基因进行比对，核苷酸相似性在99%以上，综合细菌培养和生理生化表明分离到的病原菌DY2为柠檬酸杆菌。

3.养殖用水的检测
(1)养殖用水的细菌检测。

采用无菌操作养殖用水，用接种环接种在血清琼脂平板上，于28℃恒温培养18～24小时，同样分离得到2株细菌，经细菌分离鉴定为嗜水气单胞菌和柠檬酸杆菌。

(2)养殖用水的pH检测。

应用酸度计对养殖水泥池的表面及池底水体的pH进行检测。

养殖水泥池的表面水的pH为7.2，水泥池池底pH为8.7。

4.患病大鲵虹彩病毒的PCR检测
由于目前人工养殖大鲵多发虹彩病毒病，因此对该病进行大鲵虹彩病毒的PCR检测。

取病死大鲵的肝组织病料0.5克，加入500微升PBS缓冲液，待检样品研磨后在-20℃反复冻融3次，5000转/分离心取上清液用于核酸的提取。

应用TIANamp病毒基因组DNA提取试剂盒提取总DNA。

参照Mao等方法，设计合成1对特异性扩增虹彩病毒主要核衣壳蛋白(MCP)基因的引物，预期扩增片段大小为510bp。

上游引物：5'-GACTTGGCCACTTATGAC-3'，下游引物：5'-GTCTCTG GAGA AGAAGAA-3'，该引物由宝生物(大连)工程有限公司合成。

结果从患病大鲵肝组织中均未扩增到预期大小约510bp的DNA片段。

确定患病大鲵未感染虹彩病毒。

四、诊断结果
经过流行病学调查、临床症状观察、病理解剖及实验室诊断，结果表明该养殖场出现的疫病是由水泥池碱性过重、大鲵出现皮肤溃烂、继而感染嗜水气单胞菌和柠檬酸杆菌所致。

五、防治措施
确诊后，首先对水泥池用500毫升/米3的冰醋酸浸泡2个月，期间大鲵用塑料盆养殖。

同时对发病养殖池先用0.1%高锰酸钾浸泡30分钟，再用5%的食盐水浸泡30分钟，最后用清水冲洗。

对发病大鲵单独用塑料盆养殖，在养殖用水中每立方米添加维生素C 5克、黄芪多糖5克、电解多维5克、头孢噻呋1克，浸泡5个
小时，连续浸泡7天。

对未发病大鲵养殖池每立方米的池子加食盐100克进行消毒。

20天后发病的大鲵部分开始摄食，死亡数量明显减少，疫情得到了有效遏制。

六、讨论
大脚病是引起大鲵养殖经济损失最大的病害之一，主要由虹彩病毒和嗜水气单胞菌引起，研究表明大鲵感染虹彩病毒和嗜水气单胞菌后，出现“大脚病”，而嗜水气单胞菌又是引起“打印病”的病原。

人工规模化养殖条件下，因养殖密度大、养殖水体循环缓慢，水体环境适合该菌生长繁殖和水生动物抵抗力低下时则会引起相应疾病的暴发，这些都为嗜水气单胞菌和柠檬酸杆菌的增殖和感染提供了有利条件。

本文中大鲵养殖场新建的水泥池每立方米用1000毫升食用醋浸泡半年。

而食用醋有效的醋酸只有3%，且在18℃的岩洞里酸碱中和速度较慢，对养殖水的pH检测表明水泥池碱性过重，而使用食用醋的量太少和时间太短，因此排除了虹彩病毒引起的“大脚病”。

药敏试验结果表明此次分离到的柠檬酸杆菌对庆大霉素、氟苯尼考不敏感。

而氟苯尼考是水产上治疗效果比较好的抗生素，目前该药应用比较广泛，但由于长期大量的使用，该药出现了耐药性，因此在此提醒养殖场要进行科学用药。