高敏肌钙蛋白T(cTnT-hs)的检测优势

Ser-23, Ser-24
Oxidization
Cys-80, Cys-97
Heparin Interference
AccuTnI Binding Regions 24-40 + 41-49
Liaison Binding Regions 27-39 + 80-110
AxSYM Binding Regions 20-39 + 87-91
背景信号来实现 获益：提高了分析检测的灵敏度，最低检测阈值由0.01ng/ml降低到
0.003ng/ml
高敏肌钙蛋白检测过程
• 生物素捕获抗体（2.5μg/mL），钌标记检测抗体（2.5μg/mL），样本在均 相中培养4.5分（Elecsys 2010/cobas e 411；STAT应用）或9分钟 （Modular E170/cobas e 611；正常应用）。
French J and White H Heart 2004; 90(1): 99–106.
肌钙蛋白生理 (Troponin)
心肌纤维
•肌纤维由平行的粗丝和细丝组成网状结构。粗丝是肌球蛋白复合体；细 丝由肌动蛋白，原肌球蛋白和肌钙蛋白组成 •肌钙蛋白在骨骼肌和心肌中广泛存在:
•肌钙蛋白C结合Ca离子 – 存在于骨骼肌和心肌 •肌钙蛋白I是肌动蛋白抑制亚基 – 仅存在于心肌中 •肌钙蛋白T是原肌球蛋白结合亚基, 推动肌肉收缩–仅存在于心肌中
cTnT-hs简单方便的试剂管理
• 2维条形码自动输入全部信息 • 试剂联体包 成分独立 稳定好 • 无需配制，打开即用 • 自动开闭试剂瓶盖，有效地防止挥发等
cTnT-hs检测样本的采集
• 适用多种标本类型 血清 血浆(K2-EDTA, K3-EDTA, 肝素理, 肝素钠)
• 标本稳定时间 2-8°C 24h , -20°C 12月. 可冰冻一次
不受肝素干扰
2010年
Elecsys® Troponin T –hs 最低检测浓度: 0.003 ng/ml 第99百分位数: < 0.014 ng/ml 10% CV: 0.013 ng/ml
cTnT-hs与第四代肌钙蛋白T比较
更低的检测阈值，更精确的检测参考值
最低检测阈值 检测范围
99百分位参考值 LoQ (10% CV) WHO 诊断参考值
TnT 4th generation
10 pg/ml 10 - 25 000 pg/ml
10 pg/ml
30 pg/ml
100 pg/ml
TnT-hs 3 pg/ml 3-10 000 pg/ml 14 pg/ml
13 pg/ml
100 pg/ml
cTnT-hs沿用了最先进的电化学发光技术
先进的检测技术
电化学发光技术
电化学发光免疫测定法（Elecsys）发展于 1996年，它在发光反应中加 入了电化学反应，是继放射免疫、酶免疫、化学发光免疫测定之后的新 一代标记免疫测定技术，是电化学和免疫测定相结合的产物。
世界公认的 最先进 的临床免疫检测技术
肌钙蛋白：先进的电化学发光法
• 以三明治模式应用2个cTnT特异性鼠单克隆抗体作为抗原结合片段（FAB）。 • 抗体识别位于cTnT分子中部的表达位（氨基酸位125-131和135-147）。 • 检测基于电化学发光免疫分析 • 应用钌的三联啶金属错合物（II）作为标记
Contents
肌钙蛋白概述 高敏肌钙蛋白T检测特性 高敏肌钙蛋白T与不同肌钙蛋白的比较 总结
高敏肌钙蛋白T检测特性
肌钙蛋白T的检测历史 高敏肌钙蛋白T检测的一致性 高敏肌钙蛋白T检测的灵敏度 高敏肌钙蛋白T检测的准确性
制作工艺的不断进步，使得肌钙蛋白的检测水平不断提高
第一代 1989年 ELISA Troponin T
0.6
0.4
P/B Regression
Y = 1.002 * X + 0.001
md(95) = 0.007
0.2
N = 195 r = 0.9990
t = 0.9727
0.0 0.00.20 Nhomakorabea40.6
Troponin T, Elecsys TnT hs, E170 [ng/mL]
0.8
1.0
cTnT-hs在所有检测平台均有非常好的检测一致性
不同检测系统的肌钙蛋白I检测,其结果也完全不同
Report 06020, May 2006，
标准化问题对肌钙蛋白I检测所带来的问题
• 个体间cTnI检测到标准化较困难且检测水平可能出现20倍以上的差异 • 干扰物可能导致错误的升高或错误地降低分析物浓度，这与反应中干扰
的部位有关还可能导致使其他分析物的结果出现误差 • 对于免疫检测的干扰可能导致实验室对患者结果的错误解读，及使医生
Clin Chem 43;3:458-466; 1997
心肌损伤后，肌钙蛋白浓度升高时间早，持续时间长
是理想的心肌损伤标志物
蛋白
脂肪酸结合蛋白（Fatty acid binding protein）
分子
量 最早被检测 持续可检
(KD）
时间* 测时间
灵敏度
12 1.5-2小时 8-12小时 ＋＋＋
肌红蛋白（Myoglobin）
对患者应用错误的治疗 • 由于cTnI 检测方法多样, 医生和实验室人员产生常会出现严重的混淆。
接受应用一种个人的Tn检测需要有基于同行评审的文献支持
Datta P et al. Clin chem 1999; 56:2266-69.Tate J, Ward G. Clin Biochem Rev. 2004; 25:105-20; Apple F and Wu A , Clin Chem 2001; 47: 377-379,.
导致肌钙蛋白I检测标准不统一
•Troponin I易发生蛋白质水解和酶代 谢，降解在体内体外都可发生
•Troponin T单体是TnT唯一的存在形式
•Troponin I有多种存在形式:
•自由的和复合形式 •蛋白结合形式 •复合的非肝磷脂形式 •磷酰基形式
Korff S et al, Heart, 2006; 92: 987-993. Wu A et al, Clin Chem 1998; 44:1198–1208. Katrukha A et al, Clin Chem 1997; 43:1379-1385.
• 超长试剂稳定时间 未开封试剂， 2-8 °C 开封试剂， 2-8 °C 放置分析仪
有效期内均可使用 12 周 4周
高敏肌钙蛋白T检测特性
肌钙蛋白T的检测历史 高敏肌钙蛋白T检测的一致性 高敏肌钙蛋白检测灵敏度高 高敏肌钙蛋白检测变异小，精确度高
cTnT-hs检测可在多种检测平台上进行
• 适用于各种型号的电化学发光全自动免疫分析仪 • Elecsys 2010 • cobas e 411 • cobas e 601 • Modular E 170
肌钙蛋白是特异性最好的心脏标志物
相对升高
骨骼肌损伤(Marathon Runners马拉松选手) n = 41
100
10
1
0.1
Mgb
CKMB
cTnI
cTnT
[60µg/L] 18/21
[7.5µg/L] 3/21
[2.5µg/L] 0/21
[0.1µg/L] 0/21
43名马拉松选手奔跑3天后，血液中肌钙蛋白浓度未有升高 肌红蛋白和CKMB则有升高1
cTnT-hs在各种平台均有非常好的检测一致性
E2010 (STAT) vs. E170 (18 min) - range 0 -2.5 ng
Troponin T, Elecsys TnT hs, E2010 [ng/mL]
2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0
0.0
0.5
P/B Regression Y = 1.0 * X + 0.001 md(95) = 0.008 N = 200 r = 0.9995 t = 0.9740
1.0
1.5
Troponin T, Elecsys TnT hs, E170 [ng/mL]
2.0
2.5
cTnT-hs在各种平台均有非常好的检测一致性
E2010 (STAT) vs. E170 (18 min) - range 0 -1 ng/ml
1.0
0.8
Troponin T, Elecsys TnT hs, E2010 [ng/mL]
高敏肌钙蛋白T：更先进的检测技术
• 生物素捕获抗体保持不变。检测抗体的基因经过重新设计，用人IgG C1区域 取代鼠单克隆抗体FAB片段的连续C1区域，形成人鼠嵌合型检测抗体
获益：进一步减少易受嗜异性抗体（HAMAs）的干扰 ，提高了检测的准确度 • 样本量由15μL增加到50μL，增加检测抗体的钌浓度，和通过缓冲区优化降低
多中心研究结果
Site - Instrument
Lab 1 - C6000 Lab 1 - C6000 Lab 1 - E2010 Lab 1 - E2010 Lab 2 -E 170 Lab 2 -E 170 Lab 2 - e 411 Lab 2 - e 411 Lab 3 - E170 Lab 3 - E170 Lab 3 - E2010 Lab 3 - E2010 Lab 5 - E2010 Lab 5 - E2010 Lab 6 - E 411 Lab 6 - E 411 Lab 7 - E2010 Lab 7 - E2010
不同的肌钙蛋白I检测方法采用肌钙蛋白I肽链的不同位点
N-terminal
Cardiac Specific Region Most Stable Region
C-terminal
0
Phosphorylation
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 aa
0 cTnI ox cTnI red
CIT
IC ox
IC red
IT ox
IT red cTnI Forms
Wu A et al, Clin Chem 1998; 44:1198-1208.
不同检测系统的肌钙蛋白I检测其结果也完全不同
Report 05085(Nine troponin assays) December 2005，
第一代心脏特异性单克隆抗体
第二代 第三代 第四代 第五代
1993年 1996年
Enzymun Troponin Elecsys Troponin T
Elecsys® Troponin T
第二代心脏特异性单克隆抗体 （定标液：牛 肌钙蛋白）
第二代心脏特异性单克隆抗体 （定标液：人 基因重组肌钙蛋白）
2005年 Elecsys®Troponin T
96
4-6小时
103 6-10小时
2-3天 3-5天
＋＋ ＋＋
乳酸脱氢酶（LDH）
135 6-10小时 5-7天
French J and White H Heart 2004; 90(1): 99– *症状出现后时间
106.
＋＋
特异性
＋＋ ＋
＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋
＋＋
＋ +
肌钙蛋白T的存在形式单一,而肌钙蛋白I有多种存在形式
• 添加链霉亲和素包裹的珠，在第二个4.5或9分钟的培养期内所形成的免疫复合 物结合成微粒物。
• 在第二次培养期后，反应混合物被转送入测量单元，其中珠被磁极捕获至电极 表面。清洗测量单元去除未绑定的标记并注满包含三丙胺的检测缓冲液。
• 给电极施以电压后，释放出的化学发光可以由光电倍增器检测到。 • 结果通过2点校准曲线确定且具有仪器特异性。
16 1.5-2小时 8-12小时 ＋＋＋
心肌型肌酸激酶同功酶(CK-MB) 83
2-3小时
1-2天 ＋＋＋
肌钙蛋白I（Troponin I）
33
3-4小时 7-10天 ＋＋＋＋
肌钙蛋白T（Troponin T）
38
3-4小时 7-14天 ＋＋＋＋
肌酸激酶(CK)
天冬氨酸转氨酶(Aspartate transaminase)
Bayer Ultra TnI
27-40 + 87-91 + 41-49
Architect and new generation AxSYM 41-49
不同肌钙蛋白I形式对不同检测方法的反应各不相同
1200
相对反应
1000 800 600 400 200
Test 1 Test 2 Test 3 Test 4 Test 5 Test 6 Test 7
高敏肌钙蛋白T(cTnT-hs)的检 测优势
Contents
肌钙蛋白概述 高敏肌钙蛋白T检测特性 高敏肌钙蛋白T与不同肌钙蛋白的比较 总结
Contents
肌钙蛋白概述 高敏肌钙蛋白T检测特性 高敏肌钙蛋白T与不同肌钙蛋白的比较 总结
急性心肌梗死(MI)后心脏标志物的分泌
心脏标记物升高量与心肌坏死程度成正比