论文-银杏叶总多酚对大肠杆菌抑制效果的研究

科技创新论文
题目：银杏叶总多酚对大肠杆菌抑制效果的研究
摘要 (1)
第一章绪论 (2)
1.1植物总多酚研究现状及资源利用 (3)
1.2 大肠杆菌生物学特性及其危害 (3)
1.3 研究的可行性分析 (3)
1.4 研究内容及意义 (3)
第二章实验部分 (4)
2.1实验仪器、试剂及供试菌 (4)
2.1.1实验仪器 (4)
2.1.2主要实验试剂 (4)
2.1.3供试菌种 (5)
2.2实验方法 (5)
2.2.1银杏叶总多酚粉末的制备 (5)
2.2.2生理盐水的配置 (5)
2.2.3培养基配制及平板制备 (5)
2.2.4银杏叶总多酚溶液的制备 (5)
2.2.5滤纸圆片的制备 (5)
2.2.6供试菌种悬菌液的制备 (6)
2.2.7滤纸圆片法测定细菌抑菌效果 (6)
2.2.8最低抑菌浓度（MIC）的测定 (6)
2.2.9 最佳抑菌质量浓度的测定 (6)
2.2.10pH值对抑菌活性的影响 (7)
2.2.11温度对抑菌活性的影响 (7)
2.3结果及分析 (7)
2.3.1银杏叶总多酚的最小（MIC）和最佳抑菌质量浓度 (7)
2.3.2pH值对银杏叶总多酚抑菌活性的影响 (8)
2.3.3温度对银杏叶总多酚抑菌活性的影响 (9)
2.3.4结论及分析讨论 (9)
参考文献 (10)
银杏叶总多酚对大肠杆菌抑制效果的研究
摘要：采用滤纸片法研究了银杏叶总多酚对大肠杆菌的抑菌活性及其质量浓度、pH值、温度对抑菌活性的影响。

结果表明：银杏叶总多酚对大肠杆菌的最低抑菌抑菌浓度不超过0.4mg/mL，最佳抑菌浓度为5mg/mL。

在pH7～8的环境条件下，抑菌活性最强。

银杏叶总多酚溶液具有热稳定性，高温短时间加热不影响其抑菌活性。

关键词：银杏叶总多酚；大肠杆菌；抑菌浓度；
Abstract: The anti-E.coli activities of total polyphenol of Ginkgo biloba and the effects of the factors including concentration,pH value,temperature on the anti- microbial activities were studied by filtering paper method.The results showed that the minimnm anti-E.coli concentration of the total polypheol of Ginkgo biloba was no more than 0.4mg/mL and the optimum anti-E.coli concentration was 5 mg/mL. When under the condition of pH equaled to 7～8,the anti- microbial activity reached the highest level. The anti- microbial activity of total polyphenol of Ginkgo biloba was characterized by its heat stable ability and high temperature in short time did not effect on its anti- microbial activity.
Key words:total polyphenol of Ginkgo biloba; E.coli; anti-microbial concentratio
第一章绪论
1.1植物总多酚研究现状及资源利用
植物总多酚是一类广泛存在于各种植物体内的多酚类物质的总称,在植物体类的含量仅次于纤维素,半纤维素和木质素,主要存在于植物的皮、根、木、叶、果中。

植物总多酚具有清除机体内自由基、抗脂质氧化、延缓机体衰老、预防心血管疾病、抑菌、防癌、抗辐射等生物活性功能。

银杏叶总多酚属植物总多酚的一种,现已知银杏叶中的黄甙、黄酮类成分、氨基酸和氨基酸合成胶原蛋白成份对人体美容,抑制黑色素生长,保持皮肤光泽与弹性降低人体血液中胆固醇水平,防止动脉硬化起着不小的作用。

银杏叶总多酚在功能方面研究潜力相对而言较强,尤其是在抗菌功能上,具有很强的应用价值和研究意义。

1.2大肠杆菌生物学特性及其危害
大肠杆菌学名称作“大肠埃希菌”，属于革兰氏阴性短杆菌，是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种正常栖居细菌，主要寄生在大肠内，由于结构简单，繁殖迅速，培养容易，所以它是生物学上重要的实验材料[1]。

正常情况下，大多数大肠杆菌不但不会给我们的身体健康带来任何危害，反而还能竞争性抵御致病菌的进攻，同时还能帮助合成维生素K2，与人体是互利共生的关系。

但倘若侵入人体一些部位时，可引起感染，如腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等[2]。

因此，大部分大肠杆菌通常被看作机会致病菌。

人在感染大肠杆菌后的症状为胃痛、呕吐、腹泻和发热、甚至是致命性的，尤其是对孩子及老人。

2011年5月，德国暴发了严重的肠出血性大肠杆菌O104:H4疫情，造成2200人染病，22人死亡[3]。

所以，研究抑制大肠杆菌生长作用对预防和治疗其引发的疾病是至关重要也是迫在眉睫的。

1.3研究的可行性分析
当前国内外关于抑制大肠杆菌的方式主要集中在研制抗革兰氏阴性菌的药物上，例如青霉素、链霉素、卡那霉素、庆大霉素、氯霉素滴、诺氟沙星、氧氟沙星等。

然而，抗生素的大量使用会带来较强毒副作用，直接伤害身体，其毒副反应最严重的是过敏反应[5]。

研究表明每种抗生素对人体均有不同程度的伤害。

比如链霉素、卡那霉素可引起眩晕、耳鸣、耳聋；庆大霉素、卡那霉素、万古霉素可损害肾脏等等。

其次，抗生素用得太多，也会让杀灭的细菌产生耐药性。

细菌不但对某种抗生素耐药，同时亦可对其他抗生素耐药，而且耐药性还可以在不同的细菌、人体正常菌群的细菌与致病菌之间，通过耐药基因相互传播，使细菌耐药
性复杂化。

再者，抗生素用得过多过滥，会大量杀灭体内正常细菌，让致病菌乘虚而入，可以造成人的死亡。

比如说人体肠道细菌，按一定的比例组合，各菌间互相制约，互相依存，在质和量上形成一种生态平衡，长期应用广谱抗生素，敏感肠菌被抑制，未被抑制的细菌乘机繁殖，从而引起菌群失调，可以引起一些维生素的缺乏，使身体抵抗力下降。

人体内某些寄生菌会变为致病菌[6-9]。

现阶段众多富含总多酚类植物中，研究最广的素材主要有葡萄、茶叶等。

然而葡萄和各种茶已成为各国研究植物总多酚的最重要的资源，且在美、德、法、意、日、澳大利亚等过已有相关的专利产品问世，此外茶多酚已被广泛地用于食品、医药，精细化工研究等方面。

近几年，多种植物中总多酚的抗氧化抑菌性，抑制肿瘤细胞增殖等活性的研究也有较多的报道，大量的流行病原学研究以及实验都证明总多酚具有抑菌作用[10-18]。

总多酚通过抑制病源微生物的黏附、竞争抑制作用、破坏菌体的细胞膜结构和抑制各类酶的活性，使其丧失细胞膜的屏障和酶系的保护功能。

众多国内外研究表明植物总多酚对细菌、真菌霉等均具有抑制作用，尤其对金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、沙门氏菌抑菌效果良好。

并且由于总多酚类化合物对人体无毒，明显不同于常用抑菌类药物，在发展新型药物中具有十分重要的意义，也是合成药所不具有的优点，在预防细菌疾病和临床疾病治疗与研究中均具有较广阔的应用前景。

总结各类相关文献资料，得出目前国内外对于银杏叶总多酚抑菌的研究非常有限，虽然在总多酚的提取条件、提取物的抗氧化作用、抑菌作用有一定的初步研究结果，但对银杏叶总多酚抑制大肠杆菌作用效果的研究尚无报道。

对于该菌的研究，可以填补银杏叶总多酚抑菌这一研究空白，有望使银杏叶总多酚的利用更为广泛、更加高效。

1.4研究内容及意义
本项目以银杏叶总多酚作用于大肠杆菌，采用滤纸片扩散法、单因素变量法等方法探究银杏叶总多酚的抑菌作用，测定银杏叶总多酚对大肠杆菌最低抑菌浓度（MIC），探究银杏叶总多酚在不同质量浓度、温度、pH值条件下对大肠杆菌抑制效果的影响，从而确定其对大肠杆菌的最佳抑菌条件。

所得成果以期为银杏叶总多酚的综合利用及开发提供参考依据，为抑制大肠杆菌药剂的研发提供参照。

第二章实验部分
2.1实验仪器、试剂及供试菌
2.1.1实验仪器
BCD-216YHN冰箱：青岛海尔股份有限公司；SZ-93自动双重水蒸馏器：上海亚荣生化仪器厂；YX280A电热手提蒸汽消毒器：上海三申医疗器械有限公司；WP800TLZ3-K3微波炉：格兰仕微波炉电器有限公司；DHG-90LLOA型电热恒温鼓风干燥箱：宁波江南仪器厂；SPX-150BSH-III生化培养箱：上海新苗医疗器械制造有限公司；SWCJ-A洁净工作台：上海新苗医疗器械制造有限公司；FA2004N电子天平：上海民桥精密科学仪器有限公司；外径千分尺（0-25 mm）：上海恒量量具有限公司。

2.1.2主要实验试剂
表1 主要实验试剂
Table.1 main experimental reagents
试剂名称试剂来源类型
牛肉膏本实验室提供AR
蛋白胨本实验室提供AR
氯化钠本实验室提供AR
琼脂本实验室提供/
无菌水本实验室提供/ 银杏叶总多酚溶液本实验室提供/
2.1.3供试菌种
表2 供试菌种
Table.2 tested strains
菌种名称拉丁文名称菌种类型菌种来源
大肠杆菌Escheriechia coli 细菌本系微生物教研室提供
2.2实验方法
2.2.1银杏叶总多酚粉末的制备
实验室在60 %的乙醇水溶液为提取溶剂，微波溶解时间为1 min，料液比为1:30，抽提次数为3次，用微波乙醇抽提法制得银杏叶总多酚乙醇粗提物。

将提取出的银杏叶总多酚乙醇粗提物用水浴蒸汽加热法提取银杏叶总多酚粉末，使银杏叶总多酚乙醇溶液在恒温下蒸发。

将烧杯装水至烧杯体积的2/3，再放置在电炉上加热直到沸腾，最后将银杏叶总多酚乙醇溶液倒入蒸发皿中，放于烧杯上加热，直到银杏叶总多酚粉末出现。

用这种方法提取银杏叶总多酚粉末，提取出的银杏叶总多酚粉末需装于棕色瓶中且放入真空冷冻干燥箱里保存，以备不时之需。

（注：由于银杏叶总多酚物质中抗氧化酶在高温下易被氧化，且容易变性，此外银杏叶总多酚在高温下容易分解，因此水浴温度需恒温）
2.2.2生理盐水的配置
用电子天平精确的称取0.9 g氯化钠固体，倒入已用蒸馏水洗尽且烘干的烧杯中，加入少量的蒸馏水溶解。

将溶解后的氯化钠溶液倒入100 mL的容量瓶中，定容至100 mL，倒入准备好的广口瓶中，备用。

2.2.3培养基配制及平板制备
牛肉膏蛋白胨固体培养基：准确称取牛肉膏3.0g,蛋白胨10g, NaCl 5.0 g,琼脂15g,用1 mol/L NaOH调pH至7.2-7.4，蒸馏水定容至1000 mL,于121℃下灭菌30 min。

将经高压蒸汽灭菌的培养基冷却至50-60℃，在无菌洁净工作台上倒入已高压蒸汽灭菌且干燥的培养皿内，每皿约15-20 mL，即培养皿内厚度约2-2.5 mL，制备数量足够多，备用。

2.2.4银杏叶总多酚溶液的制备
称取一定梯度量的银杏叶总多酚粉末，在洁净工作台上加入无菌蒸馏水溶解配置梯度浓度依次为0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL、3.0 mg/mL、4.0 mg/mL、5.0 mg/mL、6.0 mg/mL、7.0 mg/mL、8.0 mg/mL、的银杏叶总多酚溶液，装于已准备的试管中，用遮光物包装好放入冰箱中冷藏保存，备用。

2.2.5滤纸圆片的制备
层析用滤纸片，用打孔器打制成直径为8 mm的滤纸圆片足够多，120 ℃高压蒸汽灭菌30 min，用干燥箱于42 ℃烘干，备用。

2.2.6供试菌种的活化及悬菌液的制备
在超净工作台上用接种环将大肠杆菌接种于斜面牛肉膏蛋白胨培养基上，接种3-4支斜面培养基后，放入37℃恒温培养箱中培养48 h,备用。

在150 mL三角瓶中,加入50mL生理盐水及入少许玻璃珠，封口，121℃下灭菌30 min后冷却。

在无菌操作平台上,用接种环挑取1-2环共试菌种于三角瓶中,封口后置于恒温摇床中振荡10 min左右。

用血球计数板检测,控制菌悬液含菌约105 cfu/mL,备用。

2.2.7滤纸圆片法测定细菌抑菌效果
将在洁净操作台中制好的平板用紫外光杀菌30 min，再进行接种。

接种过程中用移液器移取100 uL的大肠杆菌悬菌液于平板中，然后再用三角玻璃涂布器涂布均匀。

最后再在含菌平板上呈三角形放置三片无菌滤纸圆片，贴上相应的标签，以便区分，放入无菌培养箱中37 ℃培养48 h。

在每个条件下接2个培养皿。

根据抑菌圈直径的大小来判断其抑菌的效果程度。

将培养了48 h后含菌的培养皿从培养箱中取出，用灭菌的刀片将培养皿中的含滤纸圆片的透明圈取出成正方形状，再用千分尺测出正方形的边长，此边长即为抑菌圈的直径大小，同一浓条件下的大肠杆菌有2皿，即同一条件下的每种细菌的抑菌圈直径需测6次，最后取平均值即为透明圈的直径大小。

每皿中有3个抑菌圈，需逐个测定，记录数据。

2.2.8最低抑菌浓度（MIC）的测定
分别将灭菌后的滤纸圆片置于质量浓度为0.1、 0.2、 0.4、0.6、 0.8、和1.0 g/L 的银杏叶总多酚水溶液中, 浸泡12h之后，取出，沥干，备用。

向灭菌的牛肉膏蛋白胨固体培养基分别加入100 uL的菌悬液, 然后再用三角玻璃涂布器涂布均匀。

最后将沥干的滤纸圆片分别贴在含菌平板表面，呈三角形。

倒置培养48 h后观察是否出现抑菌圈。

重复2个平板。

以不加银杏叶多酚溶液只加菌悬液为对照。

2.2.9最佳抑菌质量浓度的测定
分别将灭菌后的滤纸圆片置于质量浓度为1、2、3、4、5、6、7、8g/L的银杏叶总多酚水溶液中, 浸泡12h之后，取出，沥干，备用。

向灭菌的牛肉膏蛋白胨固体培养基分别加入100 uL的菌悬液, 然后再用三角玻璃涂布器涂布均匀。

最后将沥干的滤纸圆片分别贴在含菌平板表面，呈三角形。

倒置培养48 h后观察并测量抑菌圈直径大小。

重复2个平板。

2.2.10 pH值对抑菌活性的影响
将灭菌后的滤纸圆片置于用氢氧化钠和盐酸调配成8个pH值梯度(3-4， 4- 5, 5- 6, 6- 7, 7-8, 8-9, 9-10, 10-11)的银杏叶总多酚溶液中, 浸泡12h之后，取出，沥干，备用。

向灭菌的牛肉膏蛋白胨固体培养基分别加入100 uL的菌悬液, 然后再用三角玻璃涂布器涂布均匀。

最后将沥干的滤纸圆片分别贴在含菌平板表面，呈三角形。

倒置培养48 h后观察并测量抑菌圈直径大小。

重复2个平板。

2.2.11 温度对抑菌活性的影响
分别取最佳抑菌质量浓度下的银杏叶总多酚溶液10ml于6支试管中，然后分别在4℃、24℃、40℃、60℃、75℃、85℃、100℃六个温度下处理半个小时,再将灭菌后的滤纸圆片浸泡于各试管中12h，取出，沥干，贴在含菌平板表面，呈三角形。

倒置培养48 h后观察并测量抑菌圈直径大小。

重复2个平板。

2.3实验结果及分析
2.3.1银杏叶总多酚的最小（MIC）和最佳抑菌质量浓度
由表1~2可知，随着质量浓度的增加，银杏叶总多酚的抑制大肠杆菌的活性增强。

当银杏叶总多酚质量浓度在0.4mg/mL以下时，观察不到明显的抑菌圈，当质量浓度增加到0.4mg/mL时，用滤纸片法可以观察到对大肠杆菌开始出现明显的抑制作用，所以，最小抑菌质量浓度为0.4mg/mL。

当银杏叶总多酚质量浓度达到5mg/mL以上时，抑菌圈大小的增大幅度就已经比较平缓，考虑到经济成本，银杏叶总多酚对大肠杆菌的的最佳抑菌质量浓度为5mg/mL。

表1 银杏叶总多酚最低抑菌浓度的测定
Table.1 Minimum antimicrobial concentrations of total polyphenol of Ginkgo Biloba 浓度抑菌圈直径（mm）
（mg/mL）对照（无菌水）0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1
1号培养皿8 8 8 9.2 10.2 10.8 11.5 8 8 8.4 9.7 10.4 10.5 11.3 8 8 8.2 9.8 9.8 12.1 12.2
2号培养皿8 8 8 9.4 9.6 10.2 11.6 8 8 8 9.4 10.5 12.3 11.7 8 8 8.4 10.0 10.3 9.8 11.5
平均8 8 8.2 9.6 10.1 10.9 11.6
表2 不同梯度浓度的银杏叶总多酚抑菌作用
Table.2 Effect of different concentration gradient of total polyphenol of Ginkgo Biloba antibacterial effect 浓度抑菌圈直径（mm）
（mg/mL） 1 2 3 4 5 6 7 8
1号培养皿10.6 12.6 14.2 14.7 14.2 16.7 14.2 16.3 10.3 10.8 13.8 15.4 15.1 15.8 15.8 15.7 9.5 11.7 13.6 14.5 13.8 16.3 13.6 15.9
2号培养皿11.8 9.5 14.1 13.8 15.8 15.4 12.9 14.8
12.2 11.2 13.5 14.1 16.5 14.9 13.7 15.2 11.2 10.8 12.8 13.6 15.4 14.8 14.3 15.4
平均10.9 11.1 13.7 14.3 15.1 15.7 14.1 15.6
2.3.2 pH值对银杏叶总多酚抑菌活性的影响
由表3可知，pH值对银杏叶总多酚抑制大肠杆菌活性的影响较大，在中性和偏碱性的环境中抑菌活性较好并且较稳定。

pH值为7~8的时候抑菌活性最强，随着碱性或酸性的增加，银杏叶总多酚的抑菌活性下降。

表3 不同pH值的银杏叶总多酚溶液对细菌的抑菌圈直径Table.3 The diameters of inhibition zone of different pH of the total-polyphenol of Ginkgo Biloba to E.coli
pH
抑菌圈直径（mm）
4 5 6 7 8 9 10
1号培养皿8.2 10.6 11.8 15.4 15.6 13.6 10.2 8.4 11.2 12.2 16.3 16.9 13.9 9.6 8.2 10.4 11.0 15.7 15.2 12.7 9.4
2号培养皿9.2 9.8 12.4 15.9 14.3 13.2 8.6 8.8 10.2 13.2 16.2 13.6 12.8 8.4 8.6 9.6 12.8 15.6 15.2 11.4 9.4
平均8.5 10.3 12.2 15.8 15.1 12.9 9.3 说明：银杏叶总多酚质量浓度为5 mg/mL
2.3.3 温度对银杏叶总多酚抑菌活性的影响
由表4可知，经低温长时间放置和高温短时间加热处理后，银杏叶总多酚的抑菌圈变化不大，即低温长时间放置和高温短时间加热对银杏叶总多酚抑制大肠杆菌活性的影响不大。

表4 不同温度处理后的银杏叶总多酚对大肠杆菌的抑菌圈直径
Table.4 The diameters of inhibition zone of the total-polyphenol of Ginkgo biloba treated by different temperatures to E.coli
温度（℃）
抑菌圈直径（mm）
4℃2d 24℃1d50℃2h75℃30min85℃10 min100℃2min
1号培养皿15.6 16.4 14.2 13.4 13.4 12.8
16.4 15.8 13.8 14.2 14.2 12.6 16.2 15.8 13.6 14.8 12.8 13.2
2号培养皿15.4 15.6 12.8 12.6 13.3 11.8
14.8 16.2 13.7 13.8 14.0 10.8
15.2 15.4 13.6 14.4 12.8 11.8
平均15.6 15.9 13.6 13.9 13.4 12.2
说明：银杏叶总多酚质量浓度为5 mg/mL
2.3.4 结论及分析讨论
银杏叶总多酚对大肠杆菌有较强的抑制作用，其最低抑制质量浓度不超过0.4mg/mL，最佳抑菌质量浓度为5mg/mL。

pH值影响银杏叶总多酚的抑菌活性，银杏叶总多酚在中性或者偏碱性的环境稳定，pH值为7~8的时候抑菌活性最强，随着碱性或酸性的增加，银杏叶总多酚的抑菌活性下降。

低温长时间放置和高温短时间加热对银杏叶总多酚抑制大肠杆菌活性的影响不大。

本文将不同质量浓度的银杏叶总多酚作用于大肠杆菌，并在一定条件下改变pH值、温度以测定其对大肠杆菌抑制效果的影响，实验得出了银杏叶总多酚对大肠杆菌的最低抑菌浓度和最佳抑菌浓度。

由于银杏叶总多酚是一种混合物，主要由花青素、儿茶素、表儿茶素、没食子酸等多酚类物质组成，要具体到银杏叶总多酚中何种物质对大肠杆菌起到抑制作用，还有待进一步的研究证明。

此外，要将银杏叶总多酚作为一种食品添加剂或者作为抑菌药物实际使用，如何添加其用量，如何取得实际最佳的抑菌效果，尚需进一步的研究。

参考文献
[1] 房海. 大肠埃希氏菌[M].保定: 河北科学技术出版社, 1997:172 - 177.
[2] 毕建秀等. 鸡致病性大肠杆菌的分离、定型[J]. 畜禽业, 2003,( 8):38-39
[3] 黄熙，邓小玲，梁骏华，卢玲玲，黄琼，张永慧，杨杏芬. 2011年德国肠出血性大
肠杆菌O104:H4感染暴发疫情溯源调查[J] .2011（06）:1-3
[4] 贾之慎,杨贤强. 茶多酚抗氧化作用的研究与应用[J].食品科学,1990,19(11):1-5.
[5] 鞠洪涛,韩文瑜,王世若,等. 中草药消除大肠杆菌埃希氏菌耐药性及耐药质粒的研究
[J]. 中国兽医科技,2000,30(3):27-29.
[6] 董金甫,李瑶聊,洪绍梅,等. 茶多酚对8种致病菌最低抑制浓度的研究[J]. 食品科
学,1995,16(1):6-12.
[7] 雷连成. 致病性大肠杆菌的耐药性监测[J]. 中国兽医杂志, 2001,(1):12- 13
[8] 朱力军. 动物大肠杆菌耐药性的变化趋势[J].中国兽药杂志,2001, 35(2):16- 18.
[9] Enzo A Tosi, Edmundo Re, Marta E Ortega, et al. Foodpreservative based on
propolis: Bacteriostatic activity ofpropolis polyphenols and flavonoids upon Escherichia coli[J].Food Chemistry, 2007, 104:1025–1029.
[10] Almajano MP, Carbo R, Jiménez JAL, et al. Antioxidantand antimicrobial
activities of tea infusions. Food Chemistry,2008, 108(1):55−63.
[11] 朱跃斌. 茶多酚的生产与应用[J] . 现代化工, 1999, 19( 11):1-33.
[12] 张光玉. 茶多酚一种极有潜力的新型饲料添加剂[J].饲料博览,1999,11( 11) : 7-10.
[13] 肖辉,苏振霞,单娟娟,等. 16 种中草药提取物对嗜水气单胞菌的体外抑菌实验[J].水
生态学杂志, 2009,(3):53-56.
[14] 王世红．银杏叶现代药理应用及其机制的研究进展[J].基层中药杂志2001(5):52-53．
[15] 李莉. 银杏叶提取物的稳定性考察[J] 华西药学杂志 2002 17(6) 422-424．
[16] 邵继平，王伯初，陈欣，等. 银杏叶提取物药用价值的研究进展[J]. 重庆大学学报（自
然科学版），2003（1）：130-134.
[17] 林清洪，黄维南，林光荣，等. 银杏资源的合理开发与利用[J]. 福建农业科技，2006
（3）：15-16.
[18] 江德安. 叶用银杏研究进展[J]. 孝感学院学报，2002（6）：63-66.。