水杨酸软膏和凝胶剂的体外释药及其经皮吸收实验

实验三十三水杨酸软膏和凝胶剂的体外释药及其经皮吸收实验
一、目的和要求
1．了解软膏及凝胶基质对药物释放的影响。

2．熟悉测定软膏剂和凝胶剂体外经皮渗透的方法。

3．熟悉药物经皮渗透量及渗透速率参数的计算方法。

二、实验药品与器材
药品水杨酸；硬脂酸，单硬质酸甘油酯，白凡士林，羊毛脂，三乙醇胺，吐温80，羧甲基纤维素钠，卡波普，羟丙甲纤维素（HPMC），甘油。

器材752-紫外线分光光度计，智能透皮实验仪TP-2A（南京红蓝电子科技中心），微孔滤膜（0.8μm），试管（10ml），注射器（5ml），吸量管（1ml），挂道，手术剪，手术镊，蒸发皿。

实验动物与试剂小白鼠（体重18～25g）。

6%Na2S（脱毛剂），硫酸铁胺显色剂，淀粉等。

三、实验内容
（一）软膏剂和凝胶剂处方及制备过程
处方1（O/W包型乳剂基质）
水杨酸 2.0g
硬酯酸 4.8g
单硬脂酸甘油酯 1.4g
白凡士林 2.4g
羊毛脂0.4g
三乙醇胺0.16g
吐温800.04g
纯化水加至50g
制备以硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、白凡士林、羊毛脂为油相，于蒸发皿中，置水浴加热至80℃左右；另将三乙醇胺、吐温80、纯化水加至烧杯中，于水浴加热至80℃左右。

等温下将水相缓缓倒入油相，并在水浴上反应5～10min，然后室温下不断搅拌至乳白色半固体基质形成，分次加入水杨酸，研磨混匀。

处方2（水溶性基质）
水杨酸 1.3g
羧甲基纤维素钠 1.2g
甘油 3.0g
纯化水加水20g
制备工艺将CMC-Na置乳钵中，加入适量纯化水溶胀片刻，研磨均匀，加入甘油适量，研匀。

称取水杨酸适量用水溶解，然后分次加入至上述基质中，研磨混匀即可。

处方3（凝胶基质1）处方4（凝胶基质2）
水杨酸5%水杨酸5%
羟丙甲纤维素14%羟丙甲纤维素28%
卡波普97128%卡波普97114%
丙二醇QS丙二醇QS
纯化水QS纯化水QS
凝胶剂的制备将卡波普、羟丙甲纤维素（HPMC）分别用纯化水浸泡，三乙醇胺调节卡波普溶液的pH至5～6，卡波普与HPMC以2∶1或1∶2比例混合均匀，加入适量丙二醇，置乳钵中研磨均匀得凝胶基质。

称取水杨酸适量用水溶解，与上述凝胶基质混匀即可。

（二）离体小鼠皮肤的制备取体重18～25g的小鼠，处死，用自制的脱毛剂对小鼠
腹部进行脱毛处理，剪下小鼠腹部的皮肤，剥离脂肪组织及粘液组织，不伤角质层，将皮肤用新鲜生理盐水冲洗干净，备用。

（三）标准曲线的制备精密称取水杨酸对照品125.0mg ，至250ml 容量瓶中，加水适量，振摇，待全溶后，加水至刻度。

吸取上述溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0和7.0ml 置25ml 容量瓶中，加水定容，分别吸取5ml 置试管中，加硫酸铁显色剂1ml ，混匀，于530nm 波长处测定吸收度A 。

（四）渗透扩散装置及实验方法本实验采用双室渗透扩散装置，包括扩散池、接受池和磁力搅拌器，扩散面积为1.76cm 2，接受池一侧连有一个上倾管道，供取样补充接受液或排汽泡使用，外置恒温水浴（37±1）℃。

将预处理的皮肤固定于渗透扩散装置的扩散池和接受池之间，扩散室中加入软膏或凝胶剂2.0g ，固定。

接收室中为生理盐水，记录体积（约为16ml），持续搅拌，分别于1，2，3，4，6，8，12h 定时取样5.0ml （立即补充5.0ml 生理盐水），用0.8μm 的微孔滤膜过滤。

在滤液中加入1.0ml 硫酸铁显色剂，混匀。

另吸取空白皮肤浸泡液5ml ，加入1ml 硫酸铁显色剂为空白，在530nm 处测定吸收度A ，代入标准曲线方程，计算水杨酸的浓度。

四、数据处理与实验结果
1．标准曲线将上述对照品溶液测得的浓度（C ）与吸收度（A ）进行线性回归，即得标准曲线方程为C =（r =），线性范围：μg/ml 表1水杨酸标准曲线数据
2．累计渗透量的计算
C i =f (A i )Q n =16C n +∑−=115n i i C C n ：第n 点侧得的药物浓度（μg/ml ），Ci ：第i 个点侧得的药物浓度（μg/ml ），V ：接收池的总体积（ml ），Vi ：每次取样体积（ml ），S ：渗透面积（cm 2）。

3．透皮曲线的绘制：以单位面积累计渗透量为纵座标，时间为横座标，绘制水杨酸经皮渗透曲线，曲线尾部的直线部分外推与横座标相交，求得时滞T g 。

4．透皮速率的计算：将渗透曲线尾部直线部分的Q-t 数据进行线性回归，求得直线的斜率即为渗透速率J （μg/cm 2·h ）。

表2.不同基质对水杨酸透渗透量的影响
表3.不同基质软膏及凝胶剂的透皮参数数据浓度C （μg/ml ）
吸收度A
时间（h ）
O/W 型乳剂基质水溶性基质凝胶基质1凝胶基质2Ai Ci Q Ai Ci Q Ai Ci Q Ai Ci Q
1.0
基质类型
Q-t 方程J （ug/cm 2·h ）Lag ，T g （h ）
O/W 型基质
1
2
五、实验指导
经皮渗透法是研究软膏和凝较剂中药物释放的体外测定方法，是将制剂涂在离体皮肤表面，置于扩散池中，在维持动态条件下，测定单位时间内通过皮肤的药量。

通过比较药物透皮速率及时滞可分析基质对药物渗透的影响。

在维持皮肤两侧浓度梯度条件下，当皮肤扩散达到伪稳态时，单位面积透皮量Q与扩散时间t有如下关系：
Q=k t
式中k是渗透系数，以伪稳态时Q对t作图所得直线斜率计算。

该直线与横坐标轴t上的截矩即可计算时滞T g。

制备离体小鼠皮肤时，使用的脱毛剂应新鲜配制，并严格控制脱毛时间（约1～3min），脱毛后应立即用生理盐水冲洗干净，防止损伤角质层。

同一组软膏的扩散实验尽量使用相同部位的皮肤（即使用腹部皮肤），由于皮肤部位、角质层厚度对药物经皮渗透影响较大，即药物的渗透与厚度成反比。

扩散池用螺丝旋紧之前，可用镊子将皮肤拉紧，否则会增大扩散面积。

4．可将软膏或凝胶剂装入扩散池接触皮肤一面，亦可先取少量涂在皮肤表面，然后继续装填，以保证软膏或凝胶剂与皮肤紧密接触，避免形成气泡。

接收室灌注生理盐水后，应将室内空气全部排除。

磁力搅拌子转速以能均匀混合液体为宜，转速太快会形成旋涡，减少扩散面积，转速太小接收室上、下层溶液难以混匀。

水杨酸浓度过高时，应定量稀释，然后吸取5ml，精密加入1ml硫酸铁胺显色剂（其本身有吸收），用量多少对吸收度有影响，应作空白对照。

六、思考题
1．经皮给药制剂有何优点？试说明各类基质释药能力不同的原因？
2．影响药物经皮渗透的剂型因素和生理因素有哪些？。