血液系统疾病中LRP15基因甲基化状态的研究
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AML ALL CML CLL
图1.4.1
阳性率
AML各亚型中LRP15基因甲基化状况
100.00%
80.00%
60.00%
阳性率 40.00%
系列1
20.00%
0.00% M1 M2 M3 M4 M5 M6
图1.5.2
AML、ALL不同病期LRP15基因甲基化阳性率
100.00%
80.00%
60.00% 阳性率
第二部分
血液系统良性疾病中LRP15 基因甲状态的研究
材料与方法
一标本
9例MS-PCR所用血液系统良性疾病患 者骨髓、1例COBRA所用ITP患者骨 髓来自2003.6～2004.4解放军总医院 血液科门诊病人
COBRA PCR产物5个阳性克隆菌落测序结果
TTTGTTTGTTTTTTTTGTAAGGTTATGGTGTTTG GAGTAGGGTTTGTAGCGGTCGTCGTAGTAATG AGTTAAGTTGTGTTTTGTATGGTTGTTTGGGGT TGTATTTCTGTTTGGTGGTGGTGTTTGAAGATG TTAGTTGTGTTATGTATTGTTTGTGTTTTGTGTT TTAGTTGTTGTGTATTAATGTTGTTGTTTTTGTT GGGAGTTAAGTTTGTTGGGTTGGTTTGGTTTT AGGTGGGTAGTTTGGTTTGTAG
1
1.00
18
2 2 1
非甲基化
5
1
4
2
生 0.75
6 3
2
存
2
率 0.50
甲基化 0.25
1
5
1
0.00 0
100
200
300
时间（d）
不同肿瘤中CpG岛的甲基化谱是不同的， 特定肿瘤中的CpG岛甲基化表明该肿瘤 细胞在去除该基因的表达后更适合生存， 该基因的灭活可能是导致肿瘤发生发展 的原因之一。LRP15基因在复发难治白 血病中高度甲基化，提示LRP15基因可 能在白血病的发生发展中起一定作用， 证明该基因修饰水平的变化与白血病发 生及复发相关，可能为一个抑癌基因。
测序所得的序列相当于LRP15的反义链，CA相当于 TG，表明该段序列中CG中的C未甲基化
正常供者和AL中LRP15甲基化状况
总例数 阳性例数 阳性率
NPBSC
AL
9
73
0
52
0%
71.23%
表1 P=0.000
白血病中LRP15基因甲基化阳性率
80.00% 60.00% 阳性率 40.00% 20.00% 0.00%
二实验方法、步骤
（一）甲基化PCR 反应（MS-PCR）
1 MS-PCR反应原理
三 统计方法
采用Stata 7.0统计分析，各组间率的检验 采用χ2检验，随访资料的分析采用生存 分析。以P<0.05为差异有统计学意义。
MS-PCR产物测序序列
CAATACATAACACAACTAACATCTTCAAA CACCACCACCAAACAAAAATACAACCCC AAACAACCATACAAAACACAACTTAACTC ACATTACTACGGCGGCCGCTGCAGACCCT ACTCCAAACACCATAACCTTACAAAAAAA ACAAACAAAAACAAAAAAAAAACAAAAC ACCACTTACCCAAAAATACAATCAAC
要准确了解DNA甲基化与细胞恶性 转化的关系，必须了解特定序列的 甲基化状况。
LRP15基因是我室2001年克隆的一条 白血病相关基因，功能不清，其调 控区CpG岛密集，可能受甲基化调 控。
实验研究目的
探讨血液系统恶性肿瘤及良性疾病 中LRP15基因甲基化的状况
第一部分
白血病中LRP15基因甲状 态的研究
此段序列CpG岛没有甲基化
结论
1 LRP15基因甲基化与恶性肿瘤有关， 与正常细胞的幼稚与否无关。
2 LRP15基因的甲基化与急性白血病 的发生发展有关，可以监测患者病情变 化。
3 LRP15基因的甲基化不但与恶性肿瘤 有关，与免疫系统疾病也有一定关系。
血液系统疾病中LRP15基 因甲基化状态的研究
前言
白血病是一种多基因异常所致的造 血干细胞克隆性疾病，病死率较高， 是目前血液科治疗的难点。
近年来研究发现，白血病与甲基化 关系密切，在白血病发生、发展、 治疗、预后中起着重要作用。
CpG结构中胞嘧啶的甲基化对多个真核 基因的表达有重大的影响。在正常细胞 内，甲基化主要发生在CG贫乏区。富含 CG的区域(CpG岛)，则保持着非甲基化 的状态，但是一些疾病的相关基因例 外。
初治
40.00%
难治
20.00%
图1.6.1
七 AL患者LRP15基因甲基化状况 与其生存率的随访研究
对此73例AL患者进行随访，随访时间截止 2004-4-15，发现 非甲基化组平均生存时间 201天
非甲基化组平均生存时间 165天
P=0.2636
甲基化组、非甲基化组生存曲线
图1.4.1
阳性率
AML各亚型中LRP15基因甲基化状况
100.00%
80.00%
60.00%
阳性率 40.00%
系列1
20.00%
0.00% M1 M2 M3 M4 M5 M6
图1.5.2
AML、ALL不同病期LRP15基因甲基化阳性率
100.00%
80.00%
60.00% 阳性率
第二部分
血液系统良性疾病中LRP15 基因甲状态的研究
材料与方法
一标本
9例MS-PCR所用血液系统良性疾病患 者骨髓、1例COBRA所用ITP患者骨 髓来自2003.6～2004.4解放军总医院 血液科门诊病人
COBRA PCR产物5个阳性克隆菌落测序结果
TTTGTTTGTTTTTTTTGTAAGGTTATGGTGTTTG GAGTAGGGTTTGTAGCGGTCGTCGTAGTAATG AGTTAAGTTGTGTTTTGTATGGTTGTTTGGGGT TGTATTTCTGTTTGGTGGTGGTGTTTGAAGATG TTAGTTGTGTTATGTATTGTTTGTGTTTTGTGTT TTAGTTGTTGTGTATTAATGTTGTTGTTTTTGTT GGGAGTTAAGTTTGTTGGGTTGGTTTGGTTTT AGGTGGGTAGTTTGGTTTGTAG
1
1.00
18
2 2 1
非甲基化
5
1
4
2
生 0.75
6 3
2
存
2
率 0.50
甲基化 0.25
1
5
1
0.00 0
100
200
300
时间（d）
不同肿瘤中CpG岛的甲基化谱是不同的， 特定肿瘤中的CpG岛甲基化表明该肿瘤 细胞在去除该基因的表达后更适合生存， 该基因的灭活可能是导致肿瘤发生发展 的原因之一。LRP15基因在复发难治白 血病中高度甲基化，提示LRP15基因可 能在白血病的发生发展中起一定作用， 证明该基因修饰水平的变化与白血病发 生及复发相关，可能为一个抑癌基因。
测序所得的序列相当于LRP15的反义链，CA相当于 TG，表明该段序列中CG中的C未甲基化
正常供者和AL中LRP15甲基化状况
总例数 阳性例数 阳性率
NPBSC
AL
9
73
0
52
0%
71.23%
表1 P=0.000
白血病中LRP15基因甲基化阳性率
80.00% 60.00% 阳性率 40.00% 20.00% 0.00%
二实验方法、步骤
（一）甲基化PCR 反应（MS-PCR）
1 MS-PCR反应原理
三 统计方法
采用Stata 7.0统计分析，各组间率的检验 采用χ2检验，随访资料的分析采用生存 分析。以P<0.05为差异有统计学意义。
MS-PCR产物测序序列
CAATACATAACACAACTAACATCTTCAAA CACCACCACCAAACAAAAATACAACCCC AAACAACCATACAAAACACAACTTAACTC ACATTACTACGGCGGCCGCTGCAGACCCT ACTCCAAACACCATAACCTTACAAAAAAA ACAAACAAAAACAAAAAAAAAACAAAAC ACCACTTACCCAAAAATACAATCAAC
要准确了解DNA甲基化与细胞恶性 转化的关系，必须了解特定序列的 甲基化状况。
LRP15基因是我室2001年克隆的一条 白血病相关基因，功能不清，其调 控区CpG岛密集，可能受甲基化调 控。
实验研究目的
探讨血液系统恶性肿瘤及良性疾病 中LRP15基因甲基化的状况
第一部分
白血病中LRP15基因甲状 态的研究
此段序列CpG岛没有甲基化
结论
1 LRP15基因甲基化与恶性肿瘤有关， 与正常细胞的幼稚与否无关。
2 LRP15基因的甲基化与急性白血病 的发生发展有关，可以监测患者病情变 化。
3 LRP15基因的甲基化不但与恶性肿瘤 有关，与免疫系统疾病也有一定关系。
血液系统疾病中LRP15基 因甲基化状态的研究
前言
白血病是一种多基因异常所致的造 血干细胞克隆性疾病，病死率较高， 是目前血液科治疗的难点。
近年来研究发现，白血病与甲基化 关系密切，在白血病发生、发展、 治疗、预后中起着重要作用。
CpG结构中胞嘧啶的甲基化对多个真核 基因的表达有重大的影响。在正常细胞 内，甲基化主要发生在CG贫乏区。富含 CG的区域(CpG岛)，则保持着非甲基化 的状态，但是一些疾病的相关基因例 外。
初治
40.00%
难治
20.00%
图1.6.1
七 AL患者LRP15基因甲基化状况 与其生存率的随访研究
对此73例AL患者进行随访，随访时间截止 2004-4-15，发现 非甲基化组平均生存时间 201天
非甲基化组平均生存时间 165天
P=0.2636
甲基化组、非甲基化组生存曲线