一种chIRF3的原核表达及多克隆抗体的制备方法[发明专利]
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专利名称：一种chIRF3的原核表达及多克隆抗体的制备方法专利类型：发明专利
发明人：何秀苗,李尚泉,陈艳艳,陈博文,刘玉晶,黄海佩
申请号：CN201910623934.3
申请日：20190711
公开号：CN110294798A
公开日：
20191001
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种chIRF3的原核表达及多克隆抗体的制备方法，设计chIRF3的引物扩增其cDNA，双酶切处理扩增产物和PET‑32a质粒再连接构建重组载体，导入感受态DH5α细胞，筛选阳性克隆重组体并转入BL21细胞，涂布含Amp的LB固体培养基中37℃倒置过夜培养，挑取白色单菌落于含Amp的LB培养基中过夜培养，加入IPTG诱导表达，并优化诱导条件，纯化chIRF3蛋白后免疫大白兔，制备多克隆抗体，多克隆抗体经过Western‑Blot检测鉴定。
结果扩增得到chIRF3片段长度为1488bp，重组质粒chIRF3‑PET长度为7388bp，重组质粒双酶切结果的两条带分别是5900bp和1488bp，由此可得chIRF3‑PET重组成功。
重组质粒原核表达的蛋白分子量为83kDa，诱导表达最佳诱导时间为4h，IPTG诱导最佳浓度为0.08mmol/L，利用chIRF3蛋白制备的多克隆抗体对chIRF3蛋白具有明显特异性。
申请人：广西民族大学
地址：广西壮族自治区南宁市大学东路188号
国籍：CN
代理机构：北京科家知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：陈娟
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