实验八转基因生物的GUS检测专业资料
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报告基因是研究基因调控的有力工具，常用于判断试验基因的转化效率以及基因的调控与功能的研究实验中。 其一，避开内源和外源基因表达水平的影响：对于报告基因编码产物的检测水平可以精确地反映基因启动子的转录活性，不会受到内
蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。 源性基因表达产物水平的影响.
叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2—3次，至阴性对照材料呈白色。 N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ； 叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2—3次，至阴性对照材料呈白色。 K3 [Fe(CN) 6] 〔铁氰化钾〕； 其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。
可用肉眼或显微镜观察到。
protein)等.
利用报告基因表达载体的研究技术的优点：
• 其一，避开内源和外源基因表达水平的影响：对于报告基
因编码产物的检测水平可以精确地反映基因启动子的转录
活性，不会受到内源性基因表达产物水平的影响. (1)已被克隆和全序列已测定;
Na2EDTA 〔10mM，372mg〕，Triton-100〔0. N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ；
报告基因是研究基因调控的有力工具，常用于判断试验基因的转化效率以及基因的调控与功能的研究实验中。
转移酶基因(cat)、β-半乳糖苷酶(β-gal，β- 配制方法：50mM NaH2PO4·0.
1〕X－Gluc母液：X-Gluc，用N-N-二甲基酰胺(DMF)配成20mM的贮存液，分装成每管100µL，保存于-20℃。
检测。
常见的报告基因：
• 在植物基因工程研究领域，已使用的报告基因有 以下几种：
N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ；
常用的报告基因包括β—葡萄糖苷酸酶报告基因 适宜的反响条件下，β- 葡萄糖苷酸酶〔GUS〕可将X－Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，
可用肉眼或显微镜观察到。
Na2EDTA 〔10mM，372mg〕，Triton-100〔0. 在植物基因工程研究领域，已使用的报告基因有以下几种： 报告基因是研究基因调控的有力工具，常用于判断试验基因的转化效率以及基因的调控与功能的研究实验中。
此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或 1〕X－Gluc母液：X-Gluc，用N-N-二甲基酰胺(DMF)配成20mM的贮存液，分装成每管100µL，保存于-20℃。
相关知识链接——标记基因
•
标记基因是帮助对转基因生物体进行
筛选和鉴定的一类外源基因，包括选择标
记基因和报告基因。
• 常用的选择标记基因包括有抗生素抗性基 因和除草剂抗性基因〔Bar 基因〕。标记 基因通常与目的基因构建在同一表达载体
上，一起转入生物，但有时，标记基因本 身就是目的基因，如除草剂抗性基因。
实验八转基因生物的GUS 检测
材料： 转化的植物组织、器官、原生质体、 种子的胚及萌发的幼苗等。 非转化的相同材料〔阴性对照〕。
试剂： 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯〔X－ Gluc〕 ；N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ； NaH2PO4； Na2HPO4 ； Na2EDTA ； Triton-100； K3 [Fe(CN) 6] 〔铁氰化钾〕； K4 [Fe(CN) 6] 〔亚铁氰化钾〕
• 报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的 基因，也就是一个其表达产物非常容易被鉴定 的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列 相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融 合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它 的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选 得到转化体。
• 报告基因是研究基因调控的有力工具，常用于 判断试验基因的转化效率以及基因的调控与功 能的研究实验中。
5mg〕K4 [Fe(CN) 6] 〔亚铁氰化钾〕〔0.
达产物的检测方法，有些基因的表达产物的检测技术还不 非转化的相同材料〔阴性对照〕。
原理
将准备好的试材浸泡在染液，于25—37℃保温1小时至过夜。
• 适宜的反响条件下，β- 葡萄糖苷酸酶 报告基因必须具备的条件
K3 [Fe(CN) 6] 〔铁氰化钾〕； 其一，避开内源和外源基因表达水平的影响：对于报告基因编码产物的检测水平可以精确地反映基因启动子的转录活性，不会受到内
〔GUS〕可将X－Gluc水解成蓝色物质，因 源性基因表达产物水平的影响.
(gus), 胭脂碱合成酶基因(nos)、章鱼碱合成酶基 Na2EDTA 〔10mM，372mg〕，Triton-100〔0.
将准备好的试材浸泡在染液，于25—37℃保温1小时至过夜。 Na2EDTA 〔10mM，372mg〕，Triton-100〔0.
因(ocs)、新霉素磷酸转移酶(NPTll)、氯霉素乙酰 N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ；
• 第二，易于检测：如果研究不同基因启动子的转录活性， (3) 报告基因编码的产物的检测应该快速、简便、灵敏度高而且重现性好，表达产物能进行定量测定。
叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2—3次，至阴性对照材料呈白色。 Na2EDTA 〔10mM，372mg〕，Triton-100〔0.
采取本身基因表达产物的检测方法，必须建立各种基因表 叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2—3次，至阴性对照材料呈白色。
报告基因必须具备的条件
• (1)已被克隆和全序列已测定; • (2)表达产物在受体细胞中不存在，即无背景，在被
转染的细胞中无相似的内源性表达产物; • (3) 报告基因编码的产物的检测应该快速、简便、灵
敏度高而且重现性好，表达产物能进行定量测定。 • (4) 细胞内其它的基因产物不会干扰报告基因产物的
galactosidase)、萤光素酶(luc，luciferase)、和 (2)表达产物在受体细胞中不存在，即无背景，在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物;
肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。 5mg〕K4 [Fe(CN) 6] 〔亚铁氰化钾〕〔0.
绿色荧光蛋白基因(g，β- 葡萄糖苷酸酶〔GUS〕可将X－Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，
蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。 源性基因表达产物水平的影响.
叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2—3次，至阴性对照材料呈白色。 N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ； 叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2—3次，至阴性对照材料呈白色。 K3 [Fe(CN) 6] 〔铁氰化钾〕； 其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。
可用肉眼或显微镜观察到。
protein)等.
利用报告基因表达载体的研究技术的优点：
• 其一，避开内源和外源基因表达水平的影响：对于报告基
因编码产物的检测水平可以精确地反映基因启动子的转录
活性，不会受到内源性基因表达产物水平的影响. (1)已被克隆和全序列已测定;
Na2EDTA 〔10mM，372mg〕，Triton-100〔0. N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ；
报告基因是研究基因调控的有力工具，常用于判断试验基因的转化效率以及基因的调控与功能的研究实验中。
转移酶基因(cat)、β-半乳糖苷酶(β-gal，β- 配制方法：50mM NaH2PO4·0.
1〕X－Gluc母液：X-Gluc，用N-N-二甲基酰胺(DMF)配成20mM的贮存液，分装成每管100µL，保存于-20℃。
检测。
常见的报告基因：
• 在植物基因工程研究领域，已使用的报告基因有 以下几种：
N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ；
常用的报告基因包括β—葡萄糖苷酸酶报告基因 适宜的反响条件下，β- 葡萄糖苷酸酶〔GUS〕可将X－Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，
可用肉眼或显微镜观察到。
Na2EDTA 〔10mM，372mg〕，Triton-100〔0. 在植物基因工程研究领域，已使用的报告基因有以下几种： 报告基因是研究基因调控的有力工具，常用于判断试验基因的转化效率以及基因的调控与功能的研究实验中。
此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或 1〕X－Gluc母液：X-Gluc，用N-N-二甲基酰胺(DMF)配成20mM的贮存液，分装成每管100µL，保存于-20℃。
相关知识链接——标记基因
•
标记基因是帮助对转基因生物体进行
筛选和鉴定的一类外源基因，包括选择标
记基因和报告基因。
• 常用的选择标记基因包括有抗生素抗性基 因和除草剂抗性基因〔Bar 基因〕。标记 基因通常与目的基因构建在同一表达载体
上，一起转入生物，但有时，标记基因本 身就是目的基因，如除草剂抗性基因。
实验八转基因生物的GUS 检测
材料： 转化的植物组织、器官、原生质体、 种子的胚及萌发的幼苗等。 非转化的相同材料〔阴性对照〕。
试剂： 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯〔X－ Gluc〕 ；N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ； NaH2PO4； Na2HPO4 ； Na2EDTA ； Triton-100； K3 [Fe(CN) 6] 〔铁氰化钾〕； K4 [Fe(CN) 6] 〔亚铁氰化钾〕
• 报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的 基因，也就是一个其表达产物非常容易被鉴定 的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列 相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融 合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它 的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选 得到转化体。
• 报告基因是研究基因调控的有力工具，常用于 判断试验基因的转化效率以及基因的调控与功 能的研究实验中。
5mg〕K4 [Fe(CN) 6] 〔亚铁氰化钾〕〔0.
达产物的检测方法，有些基因的表达产物的检测技术还不 非转化的相同材料〔阴性对照〕。
原理
将准备好的试材浸泡在染液，于25—37℃保温1小时至过夜。
• 适宜的反响条件下，β- 葡萄糖苷酸酶 报告基因必须具备的条件
K3 [Fe(CN) 6] 〔铁氰化钾〕； 其一，避开内源和外源基因表达水平的影响：对于报告基因编码产物的检测水平可以精确地反映基因启动子的转录活性，不会受到内
〔GUS〕可将X－Gluc水解成蓝色物质，因 源性基因表达产物水平的影响.
(gus), 胭脂碱合成酶基因(nos)、章鱼碱合成酶基 Na2EDTA 〔10mM，372mg〕，Triton-100〔0.
将准备好的试材浸泡在染液，于25—37℃保温1小时至过夜。 Na2EDTA 〔10mM，372mg〕，Triton-100〔0.
因(ocs)、新霉素磷酸转移酶(NPTll)、氯霉素乙酰 N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ；
• 第二，易于检测：如果研究不同基因启动子的转录活性， (3) 报告基因编码的产物的检测应该快速、简便、灵敏度高而且重现性好，表达产物能进行定量测定。
叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2—3次，至阴性对照材料呈白色。 Na2EDTA 〔10mM，372mg〕，Triton-100〔0.
采取本身基因表达产物的检测方法，必须建立各种基因表 叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2—3次，至阴性对照材料呈白色。
报告基因必须具备的条件
• (1)已被克隆和全序列已测定; • (2)表达产物在受体细胞中不存在，即无背景，在被
转染的细胞中无相似的内源性表达产物; • (3) 报告基因编码的产物的检测应该快速、简便、灵
敏度高而且重现性好，表达产物能进行定量测定。 • (4) 细胞内其它的基因产物不会干扰报告基因产物的
galactosidase)、萤光素酶(luc，luciferase)、和 (2)表达产物在受体细胞中不存在，即无背景，在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物;
肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。 5mg〕K4 [Fe(CN) 6] 〔亚铁氰化钾〕〔0.
绿色荧光蛋白基因(g，β- 葡萄糖苷酸酶〔GUS〕可将X－Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，