植物器官的培养

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叶片离体培养发育方式（成苗途径）
叶原基
茎和根
愈
试
叶鞘
伤
管
组
苗
叶片
织
子叶
叶柄
不定芽
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1. 材料选择及灭菌
取植物的幼嫩叶片，切割成适当大小（2—3cm），在流水 中冲洗干净。再用70％酒精浸泡约10s →→饱和漂白粉 液中浸3-15min，或在0.1％升汞中浸3-5min →→无菌水 冲洗数次→→无菌的干滤纸上吸干水分→→接种。
途径二：诱导形成大量不定芽。
优点：产生变异。
继代增殖过程注意选用培养基和生长调节剂
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（4）生根培养
目的：使再生的大量试管苗形成根系，获得完整的植株。 培养基选择：1/2，1/3或1/4的MS，B5培养基或White培养基 附加生长素（浓度NAA0.1-1.0mg/L，IBA和IAA可稍高）而降低或 除去细胞分裂素。
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一、花器官的培养（花蕾）
1. 定义： 花器官培养指整个 花器及其组成部分 如花托、花瓣、花 丝、花柄、子房、 花药等的无菌培养 。
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2、意义：
通过离体花芽培养可了解整体植物和内源激素在花芽性别决定中所 起的作用 可以了解花器各部分对果实和种子发育的作用 内、外源激素在果实种子发育过程中的调控作用 生产上也可用于珍贵品种的扩大繁殖。
暗光和温度25-27℃。
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根无性繁殖系
根无性繁殖系的建立
接后1周
无菌种子
1.2cm
侧根 反复转接
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4.植株再生培养
根段的离体培养也可以用来再生植株。 第一步诱导形成愈伤组织。 第二步在再分化培养基上诱导芽的分化、在愈伤组织上分化成小 植株。
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植物 器官 培养
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营养器 官培养
生殖器 官培养
根培养 茎培养（ 包括茎尖、茎段） 叶培养（包括叶原基、叶柄、
叶 鞘、叶片、子叶 ）
花培养 （包括花托、花瓣、花丝、 花柄、子房、花药）
种子培养（包括成熟与未成熟） 胚胎培养（包括幼胚、成熟胚、 胚珠 、
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（2）消毒与接种：
将材料切割成2-3cm长短→→无菌条件下用75％酒精灭 菌30-60s →无菌水冲洗→→0.1％升汞浸泡3-8min（饱 和漂白粉浸泡10-20min ） →→无菌水冲洗数次→切割成 0.5cm→以备接种。
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注：细嫩与成熟叶片消毒时间不同
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Байду номын сангаас
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2.接种
外植体大小：0.5cm2 薄片（叶柄、子叶）
上表皮朝上接种培养基。最好带叶脉，注意极性
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3.培养
（1）培养基： MS、B5、White 、N6；蔗糖3%； 2.4－D利于愈伤组织形成，NAA抑制芽形成，利于根发生，KT、6BA利于芽形成。 愈伤组织诱导：BA 1-3mg/L,NAA 0.25-1mg/L； 分化培养：CTK 2 mg/L；
生根培养：NAA 0.5－1.0 mg/L
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(2)培养过程：
培养约2周至4周→→形成愈伤组织→→再分化培养基上（附加6-BA 2mg／L ）进行分化培养→→约10d左右，愈伤组织开始转绿出现 绿色芽点→→发育成无根苗→→生根培养基（附加 NAA0.5-l mg/L ） →→发育形成完整植株。
继代培养可用MS培养基。
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（4） 诱导生根
采用1／2MS培养基 加入一定的生长素类调节物质，如NAA、IBA等。 新梢基部浸入50或100mg/l的IBA溶液处理4-8h， 然后转移到无激素的生根培养基中。
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子房、胚乳培养 ）
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第二节 营养器官的培养
一、离体根的培养
二、茎尖的培养 三、茎段的培养
四、离体叶的培养
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一、离体根的培养
（一） 意义： ①生理代谢研究的优良实验体系 ②研究器官分化形态建成的良好体系 ③建立快速生长的根无性系
④进行诱变育种
（一）定义：
离体叶培养指包括叶原基、 叶柄、叶鞘、叶片、子叶在内 的叶组织的无菌培养。 它大多经脱分化形成愈伤组织 ，再由愈伤组织分化出茎和根 。 其中叶片培养是一个典型的代 表。
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（二）意义：
1. 是繁殖稀有名贵品种的有效手段；
2. 可用于研究形态建成、光合作用、叶 绿素形成等理论问题。
菌培养。茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为： 2.微茎尖培养: 带有1-2个叶原基的生长锥, 其长度不超过 0.5mm 。
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3.普通茎尖培养：较大的茎尖(如几mm到几十mm)、芽尖及侧芽。
这里主要讲普通茎尖培养。这种培养技术简单，操作方便，茎尖 容易成活，成苗所需时间短 。
离 脱分化培养基 体 根
愈 再分化培养基 分
伤
化
组
芽
织
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再 生 植 株
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二、茎尖的培养
（一）茎尖培养概念及类型 （二）茎尖培养方法及步骤
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(一)茎尖培养概念及类型
1.茎尖培养：切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，进行无
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2. 培养
(1)培养基的选择：
MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+激素 （促进腋芽增殖6-BA﹥Kt和Ze ） (2)培养条件： 保持25℃左右，给予充分的光照和光期
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(3)继代培养：
途径一：促进腋芽的快速生长
优点：不会产生变异，方法简便，每年从一个芽 可增殖10万株以上
植物器官的培养
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第一节 概述
一、器官培养的种类
包括离体的根、茎、叶、花器和果实的培养 。以器官作为外植体进行离体培养，是植物组织 培养中最主要的一个方面，进行的植物种类最多 ，应用的范围也最广。
2022/1/2
制作者：吴翠云
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二、器官培养的意义：
1. 器官培养是研究器官生长、营养代谢、生理生化 、组织分化和形态建成的最好材料和方法；
最好添加0.3％活性炭，以促进生根
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3.移植
移植是一个由异养转变为自养的过程。
试管苗→→炼苗→→取苗→→洗净琼脂→→小心移 栽→→苗期管理（初期湿度要大，基质通气湿润， 保湿保温）
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四、离体叶的培养
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（2）初代培养条件 每天 光照16h，
光强度1500-30001x，
温度25±2℃
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（3） 继代培养
茎尖长成的新梢→→切成小段→→增殖培养基中→→ 1个月左右 →→新梢又可切成小段→→再转入新培养基→→建立和维持了 茎尖无性系。 （即微型扦插）
或侧芽）。 ②从试管苗获取。
取1-2㎝顶梢
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2、材料处理及消毒
将采集到的茎尖切成0.5-1.0cm长→→去叶（休眠芽预先剥除
鳞片） →→流水冲洗2-4h →→ 75％的酒精中处理30s →→稀 释20倍的次氯酸钠中浸5-8min(取自老枝条上的可适当延长 时间） →→用无菌水冲洗数次，准备接种。
2.器官培养在生产实践上具有重要的应用价值.
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如利用茎、叶和花器培养建立的试管苗，可在短期内提高
繁殖速率，进行名贵品种的快速繁殖； 利用茎尖培养可得到脱毒试管苗，解决品种的退化问题，
提高产量和质量；
将植物器官作诱变处理，用器官培养可得到突变株，进行细胞突 变育种。
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（二） 培养方法
1. 培养基选择
White培养基；2/3或1/2 MS 和 B5培养基
注：离体根生长要求
提供全部必需元素，蔗糖、硝态氮效果好，加入B1、B6最重要， 生长素对离体根影响不一致。培养温度25－27℃，暗光培养。
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(3)培养条件：
温度：25±2℃ 光照时间：10-12h，
光照强度：1500-3000 Lx 。
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叶的培养比胚，茎尖和茎段培养难度大。
首先要选用易培养成功的叶组织，如幼叶比成熟叶易培养，子叶 比叶片易培养。
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茎尖生长状态
生长太慢：茎尖不增大→→变绿→→细胞逐渐老化→→休眠 原因: 生长素浓度太低；温度过低或过高；
生长太快：茎尖迅速增大→→愈伤组织→→丧失成苗能力 原因: 生长素浓度过高；光照太弱或温度太高；
生长正常：茎尖基部稍增大并形成少量愈伤组织，茎尖颜色 逐渐变绿，并伸长，叶原基发育成可见的小叶， 进而形成小苗。
4.茎尖培养的意义： 普通茎尖培养技术简单，操作方便，易成活，成苗
时间短，加快繁殖。 微茎尖培养可获得脱毒苗；
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培养 接种
取材
（二）茎尖培养方法及步骤
及材 消料 毒处
理
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驯 化 移 栽
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1、 取材
①直接取材：在生长旺盛、枝条 健壮、无病的母株上选生长不 久、杂菌污染少的顶梢（1－ 2cm）（取前可喷杀菌药，可顶芽
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2. 无性繁殖系的建立
种子消毒 →→ 接种→→待根伸长后从根尖一端切取长1.2cm
的根尖→→接种于培养基→→发育出侧根→→待侧根生长约1周后切取 侧根的根尖进行扩大培养→→又迅速生长并长出侧根→→切下进行培 养，如此反复→→得到从单个根尖衍生而来的离体根的无性系。
3. 培养条件
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（三）叶片的离体培养方法
发育方式：叶片培养再生成完整植株有两种方式：
①
是直接诱导形成芽和根→→完整植株；
② 是先诱导形成愈伤组织，再经愈伤组织分化形成芽和根
→→完整植株。
其中，以第二种方式最为常见。
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其次要添加适当的生长素和细胞分裂素，保证利于叶组织 的脱分化和再分化。
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第二节 生殖器官的培养
一、花器官的培养
二、种子的培养 三、胚胎的培养
四、胚珠培养 五、子房培养
六、胚乳培养
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一、花器官的培养
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（二）意义 ：
快速繁殖； 探讨茎细胞的生理特点
进行育种上的筛选突变体的过程
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（三）培养步骤
1.材料的选择和处理 （1） 取材：当年生嫩枝→→去
叶→→剪成5cm的小段→→自来水 冲洗1-3h
注：生长期取芽，外植体取枝条 顶部或中部茎段。
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(5) 驯化移栽入土
在生根培养1个月左右→→生长健壮而发达 的根系→→炼苗→→移栽 →→管理（温、 光、湿、气）
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三、茎段培养 （一）定义： 指不带芽和带一个以上定芽或不定芽（包括块茎、球
茎在内）的幼茎切段的无菌培养。
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3、接种
接种前再剥掉一些叶片，使茎尖0.5cm →→接种
要求：随切随接，动作迅速。 亦可将切 下 茎尖材 料在1－5% VC液中浸一下。
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4、培养的方法和程序
（1）培养基 ① 基本培养基 MS、White、 B5、 Heller培养基。 ② 蔗糖作碳源效果好，浓度2－3%。 ③ 激素（ 2，4-D，IAA， NAA ）和有机添加 物有明显影响。但激素浓度以0.1mg/L为宜， 不要太高。