病毒载体吴小兵培训课件

被包装的DNA/RNA中不含任何病毒编码基因，只保留其复制和 包装所必需的顺式作用元件。获得的重组病毒颗粒具有野生型病 毒的外壳/外膜和感染性，但不表达病毒蛋白。
腺伴随病毒载体：
ITR
反转录病毒载体：
ITR
gene
pA
LTR
gene
LTR
腺病毒载体：
ITR
ITR
gene
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病毒载体p吴A小兵
HRE
MVM P4 B19 promoter HBV JCV EBV
P1 P1
tetOp
MDR1 1/28/2021
ESTRADIOL
病毒载体吴小兵
合成的转录因子
tTA tTA tTA
GAL4 ER VP16
RXR
tetOp gene tetOp gene
tetOp gene
10
EcR VP16
RU486
2、靶向性
细胞毒性 染色体毒性 免疫毒性
转导靶向性 转录靶向性
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3、有效性
转导效率 靶向性
基因表达水平和持续时间
表达的可调控性
病毒载体吴小兵
2
常用的病毒载体的特点：
病毒载体
反转录病毒载体 单 链 RNA 病 毒 8~10kb
腺病毒载体 双 链 DNA 病 毒 36kb
A AV 病 毒 载 体 单 链 DNA 病 毒 ~5kb
双因素系统
Helper virus +helper plasmid
Host cell +vector DNA
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病毒载体吴小兵
6
rep cap
Recombinant helper virus (rHSV-repcap)
proviral cell
图4 双因素系统生产重组AAV病毒示意图
无病毒基因的病毒载体
病毒载体吴小兵
cre
8
293-cre
Adenovirus with packaging signal flanked by loxP
图6 mini-adnovirus无辅毒包装系统
靶向性病毒载体
转导靶向性
改造病毒外壳/外膜
连接靶向性结合分子
Modified adenovirus
cell
转录靶向性（特异性）
7
单纯疱疹病毒载体：
gene
gene
gene
pac
ori
gene
gene
无辅助病毒包装系统
adenovirus
Helper plasmid: E2a E4orf6 VA
aav vector plasmid
ITR
ITR
gene
E1a,b
293细胞
图5 重组AAV无辅毒包装系统
ITR
ITR
gene
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293 cell
E1a,b
5
293 cell
JM17
图2 腺病毒包装系统示意图
多因素生产系统 (multi-component system)
Helper virus
rep cap Helper plasmid
host cell
Vector plasmid
多因素系统
图3 腺病毒伴随病毒包装系统示意图
组
肿
织
瘤
特 选 1/28/2021
异
择
性
性
启
启
动
动
子
子
细
肿
胞
瘤
周病毒载体吴小兵血
期
管
调
内
控
皮
启
导
动
向
子
启
动
子
双
病
特
毒
异
9增
性
殖
启
的
动
特
子
异
性
转
录
调
控
可调控表达的病毒载体
细胞的调控元件 病毒的调控元件 人工合成的调控元件
细胞特异性转录
四环素调控
细胞启动子 病毒启动子
albumin Tyrosinase or TRP-1 PSA MBP MCK GFAP NSE KDR/flt-1 AFP CEA erbB2
HSV 病 毒 载 体 双 链 DNA 病 毒 152kb
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生物学特性
适用范围
可感染分裂细胞； 整合到染色体中； 表达时间较长； 有致癌的危险； 可感染分裂和非分裂细胞； 不整合到染色体中； 外源基因表达水平高； 表达时间较短； 免疫原性强； 可感染分裂和非分裂细胞； 整合到染色体中； 无致病性；免疫原性弱； 可长期表达外源基因； 在骨骼肌、心肌、肝脏、视 网膜等组织中表达较高；
GAL4 PR VP16
Diphenol indene
GAL4 ER p65
muristerone
ZFHD-1 FKB12
FRAP P65
rapamycin
自 我 扩 增 型 载 体 （ s e lf-a m p lify in g v e c to r ）：
这 类 载 体 是 以 正 链 R N A 病 毒 S in d b is 病 毒 和 S em lik i F o rest 病 毒 为
神经系统疾病的基 因治疗； 肿瘤的基因治疗。
3
病毒载体研究方向
1、病毒包装系统 2、无病毒基因的病毒载体
3、靶向性病毒载体
4、可调控表达的病毒载体 5、嵌合型病毒载体
6、自我扩增型病毒载体
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病毒载体吴小7、兵 条件增殖型病毒载4 体
8、新病毒载体
病毒载体包装系统
组成：1、宿主细胞
E x v iv o 基 因 治 疗 ； 肿瘤基因治疗。
In v iv o 基 因 治 疗 ； 肿瘤基因治疗； 疫苗。
In v iv o 基 因 治 疗； E x v iv o 基 因 治 疗 ； 遗传病基因治疗； 获得性慢性疾病的 基因治疗。
具有嗜神经性；可逆轴突传 递； 可潜伏感染； 容 量 大病；毒载体吴小兵 可感染分裂和非分裂细胞；
2、辅助元件（辅助质粒、辅助病毒）
3、被包装的DNA/RNA
包含顺式作用元件
单因素生产系统（one-component system)
Fra Baidu bibliotekgag pol env
LTR
LTR
图1 反转录病毒包装系统示意图
双因素生产系统 (two-component system)
Ad Shuttle
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E1a,b 病毒载体吴小兵
病毒载体概述（1）
要求：1、携带外源基因并能包装成感染性病毒颗粒
2、介导外源基因转移和表达 3、对机体不致病
容量：自身基因组大小的105%~110%
类型：1、重组型病毒载体
可复制型 复制缺陷型
2、无病毒基因的病毒载体 复制缺陷型
组成：1、病毒复制和包装元件
2、病毒基因 3、插入的外源基因或元件 4、病毒外壳/外膜
基 础 的 。用 目 的 基 因 代 替 病 毒 的 外 壳 蛋 白 编 码 序 列 ，导 入 靶 细 胞 中 ，
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病毒载体吴小兵
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用途：基因转移和表达
1、基因治疗 2、疫苗 3、器官移植 4、组织工程 5、转基因动物 6、基因功能研究
病毒载体概述（2）
优点：1、利用病毒天然的感染性进入细胞，转导效率高；
2、复杂的装配过程由细胞完成； 3、不同的病毒载体具有不同的表达特点。
存在的问题：1、安全性