全血胆碱酯酶活性的测定

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6,胆碱酯酶活性测定

实习三有机磷经皮染毒对全血胆碱酯酶活性的影响（一）目的和意义1、学习经皮染毒技术，掌握急性经皮毒性试验的方法。

2、观察有机磷经皮肤吸收后对机体的急性毒性作用。

3、掌握全血胆碱酯酶活性的测定方法及原理。

（二）仪器1．解剖剪刀、弯剪、镊子、灌胃针。

2．恒温水箱(37±0.5℃)。

3．离心机。

4．分光光度计，10mm比色皿。

5．血红蛋白吸管（20μl）；刻度吸管（5.0ml，2.0ml，1.0ml）；离心管（10ml）；容量瓶（10ml，100ml）；试管（10ml）、烧杯等。

（三）试剂1．受试物：有机磷（由指导教师自定）；溶剂，根据受试物的理化性质选定。

2．磷酸盐缓冲液(1/15m mol/L，pH7.40)：称取9.07g无水磷酸二氢钾(KH2PO4)，用水溶解并稀释至1000mL(甲液)；称取23.87g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)，用水溶解并稀释至1000mL(乙液)。

取甲液19.2mL与乙液80.8mL混合即得。

3．生理盐水：氯化钠8.5g/L。

4．硫代乙酰胆碱(ASCh)：称取72.3mg ASCh(生物试剂)溶于生理盐水中，并稀释到10mL；置冰箱中保存，临用时以生理盐水稀释10倍。

5．5，5′－联硫代－双－2－硝基苯甲酸(DTNB)溶液：称取19.8mg DTNB，滴加磷酸盐缓冲液(4.2)，搅拌，直至完全溶解，溶液透明(大约加2mL)，再用生理盐水(4.3)稀释至10mL，置冰箱中保存，临用时以生理盐水稀释10倍。

出现黄色即弃用。

6．抑制剂毒扁豆碱：取1mg左右柳酸毒扁豆碱，溶于0.5mL生理盐水(4.3)，临用时配制，严防污染其他试剂及器材。

7．1m mol/L谷胱甘肽标准溶液：精确称取3.07mg还原型谷胱甘肽用水溶解，移入10mL容量瓶中，稀释至刻度。

此液1mL相当于1μmol谷胱甘肽。

因其易被氧化，应于用时配制，水必须先经煮沸去氧冷却后使用。

（四）实验步骤1．实验动物的选择实验动物可选择健康豚鼠或家兔，也可用大鼠。

全血胆碱脂酶测定

0
0.8
1.6
2.4
3.2
4.0
（2）各管加碱性羟胺4ml，立即振摇3min
（3）各管加1∶2盐酸溶液2ml，振摇1min
（4）各管加10%三氯化铁溶液2ml，摇匀，过滤
（5）测吸光度：λ——520nm，参比管——第1管
（6）绘制标准曲线
2.样品测定
0.98ml磷缓 20ul血 0.98ml磷缓 20ul血
意义
有机磷农药中毒的重要诊断指标中毒者治疗后的效果观察指标接触有机磷农药人员健康状况的动态观察指标
方法
Asch-DTNB比色法（GBZ52）三氯化铁比色法溴麝香草酚蓝（B· T· B）比色法纸片法 Biocheck法（便携式分析仪）
三氯化铁比色法
[原理]
乙酰胆碱
碱性羟胺胆碱酯酶
1. 乙酰胆碱标准曲线的绘制 2. 样品测定
1.乙酰胆碱标准曲线的绘制
（1）取六只具塞试管，配制乙酰胆碱标准色列
管号乙酰胆碱标准应用液（ml） 1 0 2 0.2 3 0.4 4 0.6 5 0.8 6 1.0
水（ml）
磷酸盐缓冲液（ml）1110.81
0.6
1
0.4
1
0.2
1
0
乙酰胆碱含量（μmol）
诊断
《职业急性有机磷杀虫剂中毒诊断标准》(GBZ-2002) 职业史现场职业卫生调查临床症状体征实验室检查——全血胆碱酯酶（ChE）活性
诊断分级标准
全血ChE活性范围
急性轻度中毒---50%-70%
急性中度中毒---30%-50%
急性重度中毒---30%以下
实验目的
加深对有机磷农药中毒机制的认识掌握全血ChE活性测定的意义掌握全血ChE活性测定原理、方法

全血胆碱酯酶活性测定

注意事项
• 本法检测限为2.4μmol/L，线性范围为2.4～ 1000.0μmol/L。水冲洗干净后，再用蒸馏水洗三次，干燥后备用。 • 取血时不应过度挤压耳垂，如果采血时过度挤压耳垂，采得的血液中血清和组织液所占比例过多，会使结果偏低。 • 加碱性羟胺和盐酸(1＋2)时，必须严格掌握振摇时间，使其充分反应，否则会影响结果。
• 按式(2)计算酶活性的相对值：Y= Xs/ Xc
• 式中：Y—酶活性的相对值，%；
• Xs—被测血样中酶活性的绝对值， μmol(0.02mL·37℃· 30min)；
• Xc—正常人血中酶活性绝对值， μmol(0.02mL·37℃· 30min)。 Xc=1.60μmol(0.02mL·37℃· 30min)
四、采样、运输和保存
• 用血色素吸管，取耳垂血20μL，注入比色管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立即进行测定。 • 如不能立即测定，可静脉取血0.5mL，注入玻璃管中(含肝素或草酸钾抗凝剂)，混匀。于保温瓶中加冰运送，置于4℃冰箱中可保存一周。
五、分析步骤
管号乙酰胆碱标准应用液(ml) 磷酸盐缓冲液乙酰胆碱含量 (umol) 0 0 1.0 0 1 0.1 0.9 0.35 2 0.2 0.8 0.7 3 0.3 0.7 1.05 4 0.4 0.6 1.4 5 0.5 0.5 1.75 样品 A 血 0.02 ml 0.98ml 对照 B 血 0.02 ml 0.98ml
水浴 37℃ 5 分钟乙酰胆碱 0.5ml 37℃30 分钟羟胺 2 ml 羟胺 2ml 振摇 3 分钟乙酰胆碱 0.5 ml 37℃30 分钟
碱性羟胺 1：2 HCl 100g/L FeCl3
2 ml

全血胆碱酯酶活力值校正实验研究

中图分类号：１９．Ｒ３＋３文献标识码：Ａ
ＥｐｒｎａｕｙＯｘｅｉｔｓｄＩｔｄｕｔｔｏｈｌｏｈ￣ｓａｅａｔｉｍｅｌｔ１ｈｍｅｅｉｙ
ＨＡＮｉｆｎ，ＳＨｕ —ｅＨＥＮＧｎｈａ，ＩＸｉ — ｕＩＵｅ一ｕｎ，ｅｌＦｙａｔａ
维普资讯
中国职业医学
２ＯＯ２年６月第２卷第３９期
ＣｉｅｕｅＪｎ，Ｏ２Ｖ１２，ｏ３ｈｎＯｅｐＭｄ，ｕｅ２Ｏ，ｏ．９Ｎ．
・２・５
文章编号：００—６８（０２０ —０２１０４６２０）３０５—０２
ａｄｗｍａ，ａｄｒｄｃｈｉｃｅａｃｆｍｅｓｌ￣ｖｌｅｉｅｔｒｎｎｏｎｎｅｕｅｔｅｄｓｒｐｙｏａｉｃａｕｎｔｏｇ．ｎｒｈｈＫｅｒｓｙｗｏｄ：Ｂｌｏ — ｈｌｎｓｒｓ；Ｅｙｈｏｙｅ－ｈｈｅｔｒｓ；Ｒｄｂｏｄｃｌｖｌｅｏｄｃｏｅｔａｅｒｔｒｃｔｓｃｏｎｓｅａｅｉｅｅｌｅａｕ；Ｈｅｔｙａｕｔｏｌｌａｈｄｌｓ
Ｃｈ，ＩＥｙＣｈｗｅｅＥｒｍｅｓｒｄｃｏｄｉｇｔｅｎａｏａｓａａｄＧＢ７９８ｒｃｌｒｍｎｅｏｍｅｒｃｎｌｓｓｍｅｏａｕｅａｃｒｎｏｔｔｎｈｉｌｔｎｄｒ７４－７ｔｉｈｏｉ＿ｒｔｉａａｙｉｔｄ．Ｒｅｌｔｏｌｈｓｆｓｌ｝ｉ｛ｌｐｒｌｅｅａｉｎｈｐｒｈｗｎｂｔｅｈ — Ｅｎｈｂ— Ｅ，ｒ＝０．６３，Ｐ＜０．０１．Ｔｈ￣ａａｌｌｒｌｔｏｉｓｗｅｅｓｏｅｗｅｎｔｅｅＣｈａｄｔｅｌＣｈｓ９００ｅ￣Ｃｈａｃｕｔｏ４．６％Ｅｃｏｎｓｆｒ８０

全血胆碱酯酶活性的测定

全⾎胆碱酯酶活性的测定全⾎胆碱酯酶活性的测定――羟胺三氯化铁法实验⽬的1. 掌握三氯化铁⽐⾊法的实验原理、分析步骤及酶测定的临床意义。

2. 了解常见全⾎胆碱酯酶活性测定⽅法的优缺点、注意事项。

3. 学会末梢⾎的采集。

实验原理⾎液胆碱酯酶使⼄酰胆碱分解为胆碱和⼄酸。

未被胆碱酯酶⽔解⽽剩余的⼄酰胆碱和碱性羟胺反应，形成红⾊羌酸铁络合物。

颜⾊深度与剩余⼄酰胆碱的量成正⽐。

在波长520nm ⽐⾊定量，由⽔解的⼄酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。

试剂和材料采样、运输和保存⽤⾎⾊素吸管，取指⾎20⼙L ,注⼊⽐⾊管中（事先加⼊0.98mL 磷酸盐缓冲液）, ⽴即进⾏测定。

实验步骤A 样品管+0.98mL 磷酸盐缓冲液+0.02mL 全⾎ ------- 却37C ⽔浴 5min ——> +1.0mL ⼄酰胆碱应⽤液 —— 37C ⽔浴30minB 对照管0.98mL 磷酸盐缓冲液+0.02mL 全⾎ +1.0mL ⽔ ----- > 37C ⽔浴 30minC 标准管1.0mL 磷酸盐缓冲液------ -> 37C ⽔浴5min ----------- > + 1.0mL ⼄酰胆碱应⽤液 ----- > 37C ⽔浴30minD 空⽩管1.0mL 磷酸盐缓冲液 ------- 37C ⽔浴 30min蒸馏⽔盐酸溶液（1 + 2）碱性羟胺溶液磷酸盐缓冲液（PH= 7.20）三氯化铁溶液分光光度计 10mL ⽐⾊管漏⽃恒温⽔浴箱，控温⼟ 05C 采⾎针头⾎⾊素吸管37C ⽔浴5min ——>37 C ⽔浴 5min ⼿+1.0mL ⽔⽔浴之后对A、B、C、D四个试管分别进⾏以下操作:1. 加⼊4.0mL碱性羟胺溶液，充分振摇2min；2. 加⼊2.0mL盐酸溶液，充分振摇2min ；3. 加⼊2.0mL三氯化铁溶液，充分振摇；4. 滤纸过滤，520nm⽐⾊。

实验结果表1-1 520nm波长下样品的吸光度样品编号A B C D吸光度0.2990.0030.5380.000结果计算①计算酶活性的绝对值3.149Y= 100=1971.60Y—酶活性的相对值，%;Xs—被测⾎样中酶活性的绝对值，⼙mol(0.02mL ? 37C?30min);Xc —正常⼈⾎中酶活性绝对值，⼙mol(0.02mL ? 37 C ? 30min)。

胆碱酯酶(CHE)测定操作规程

胆碱酯酶（CHE）测定操作规程一、用途本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中胆碱脂酶（CHE）的活性。

二、临床意义（一）概述胆碱脂酶可以分为乙酰胆碱酯酶和假性胆碱酯酶，前类亦称真性胆碱酯酶，主要存在于胆碱神经末梢突触间隙。

乙酰胆碱酯酶可以在神经末梢、效应器接头或突触间隙等部位终止乙酰胆碱作用。

（二）临床意义1. 病理性升高：肾病综合征，甲状腺功能亢进，糖尿病，脂肪肝，原发性家族性高CHE血症，血清CHE变异，原发性肝癌等。

2. 病理性降低：重症肝炎，慢性肝炎活动型，肝硬化，肝脓肿，各种癌，低蛋白血症(营养不良，贫血，感染，皮肌炎，急性心肌梗死)，遗传性血清CHE异常症，有机磷中毒(轻度中毒降低30%，中度中毒降低50%，重度中毒降低70%)，溃疡性结肠炎，肾功能不全，天疱疮，烧伤等。

（三）检验原理胆碱酯酶催化S-碘化丁酰基硫代胆碱水解，生成丁酸与硫代胆碱，硫代胆碱与黄色的铁氰化钾[Fe(CN)6]3-反应后形成无色的[Fe(CN)6]4-，在405nm吸光度下降的速率与标本中胆碱酯酶活性成正比。

四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。

样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。

CHE测定样品为不溶血的血清、血浆（肝素抗凝）。

样品应在低温条件下运输并及时测定。

不能使用EDTA抗凝剂的标本。

五、试剂（一）试剂组成不同批号试剂中各组份不能互换。

（二）试剂准备R1和R2试剂为即用型液体试剂，开瓶装载即可使用，用后应及时冷藏保存。

（三）试剂的保存及稳定性1. 不能冰冻试剂。

2. 未开瓶的R1和R2试剂应在2～8℃密闭避光贮存，稳定期为瓶签标示的有效期。

全血胆碱酯酶活性的测定讲课讲稿

试剂和材料
蒸馏水
盐酸溶液(1＋2)
碱性羟胺溶液
磷酸盐缓冲液(PH＝7.20)
三氯化铁溶液
氯化乙酰胆碱标准液
分光光度计
10mL比色管
漏斗
恒温水浴箱，控温±0.5℃
采血针头
血色素吸管
采样、运输和保存
用血色素吸管，取指血20μL，注入比色管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立即进行测定。
实验步骤
A样品管+0.98mL磷酸盐缓冲液+0.02mL全血37℃水浴5min
C：以试剂空白为参比的在波长520nm处标准管的吸光度值。
②计算酶活性的相对值
Y= =197
Y—酶活性的相对值，%；
Xs—被测血样中酶活性的绝对值，μmol(0.02mL·37℃·30min)；
Xc—正常人血中酶活性绝对值，μmol(0.02mL·37℃·30min)。Xc=1.60μmol(0.02mL·37℃·30min)
吸光度0.299 0.003 0.538 0.000
结果计算
①计算酶活性的绝对值
带入得：Xs= =3.149μmol
Xs：水解乙酰胆碱的浓度，μmol(0.02mL·37℃·30min)；
A：以试剂空白为参比的在波长520nm处样品管的吸光度值；
B：以试剂空白为参比的在波长520nm Nhomakorabea对照管的吸光度值；
讨论
1.由于未在网上查到北京市居民胆碱酯酶活性的参考标准，遂以课件上浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值作为参考。即：女：3.19±0.398μmol；因3.149μmol在3.19±0.398μmol的区间内，故该样本的胆碱酯酶活性属正常范围。
2.各组所测数值偏差较大，可能与操作差异如采血时间、振摇是否充分、加热时间等导致胆碱酯酶活性变化有关。

胆碱酯酶活性测定方法

胆碱酯酶活性测定方法
胆碱酯酶（acetylcholinesterase, AChE）活性测定方法主要有以下几种常用的方法：
1. 利用酶促反应产生的色素变化测定：
(1) 比色法：将胆碱酯酶底物乙酰胆碱与碱性溴化镉等试剂反应，生成黄色产物，利用比色计或分光光度计测定产物的吸光度，间接测定胆碱酯酶活性。

(2) 荧光法：将胆碱酯酶底物与荧光染料反应，使底物和产物之间发生荧光变化，利用荧光光谱仪测定荧光强度，间接测定胆碱酯酶活性。

2. 利用电化学方法测定：常用的是反应器中使用碳电极或银电极，利用底物和产物之间的电位差变化测定胆碱酯酶活性。

3. 利用放射性同位素标记测定：将底物或产物标记上放射性同位素，通过测定放射性同位素的放射性强度，间接测定胆碱酯酶活性。

4. 利用质谱法测定：将底物和产物分离并通过质谱仪测定其质荷比，间接测定胆碱酯酶活性。

需要注意的是，不同的测定方法适用于不同的实验目的和样本类型，具体的选择应根据实验需求和设备条件来确定。

三氯化铁分光光度法测定全血胆碱酯酶活性王小鹏

三氯化铁分光光度法测定全血胆碱酯酶原理：在血液胆碱酯酶作用下，乙酰胆碱发生水解；剩余的乙酰胆碱与碱性羟胺反应生成乙酰羟胺，后者在酸性条件下，与三氯化铁反应生成红棕色羟肟酸铁配合物，呈色强度与剩余乙酰胆碱的量成正比，在５２０ｎｍ波长处比色，间接测定血中胆碱酯酶活性。

此法最低检测浓度２.４μmol/L（20μl血样），测定范围2.4~1000.0μmol/L。

步骤：1、标准的配制：取6支比色管，分别加入0.0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml，7μmol/ml的氯化乙酰胆碱标准溶液，加标准缓冲液（PBS）至1.0ml，各加1.0ml水，配制成乙酰胆碱含量为：0.0、1.4、2.8、4.2、5.6、7.0μmol标准溶液系列。

向各管中加入4.0ml 碱性羟胺，振摇2min。

加2.0ml盐酸溶液，振摇2min。

加2.0ml三氯化铁溶液，振摇。

溶液与520nm处，以第一管为参比，测定吸光度值。

以乙酰胆碱含量（μmol）对相应的吸光度值绘制标准曲线。

2、样品的处理：取4支比色管，分别为1（A,B）和2（A,B），向各管加入0.98mlPBS，20μl血样。

置于37℃水浴中预热5min。

向1和2的A管加入1.0ml乙酰胆碱标准溶液。

自加入乙酰胆碱开始计时，在37℃左右（正负0.5℃）准确反应30min，每间隔10min振摇1次，同时，向1和2的B管加入1.0ml乙酰胆碱标准溶液，充分振摇。

取出比色管，各管立即加入4.0ml碱性羟胺溶液，充分振摇2min。

然后，A和B管各加2.0ml盐酸溶液，振摇2min。

加2.0ml三氯化铁溶液，振摇后样品离心。

滤液与520nm处，以标准第一管为参比，测定吸光度。

分别用各管吸光度值计算其中乙酰胆碱剩余量，从而得出1,2号管胆碱酯酶活性。

实验数据及结果：标准曲线吸光度值如下表表1标准曲线吸光度值0 1.4 2.8 4.2 5.6 7.0胆碱酯酶溶液体积吸光度值0.004 0.139 0.260 0.395 0.475 0.600可得标准曲线为：y=0.081x+0.028 拟合方程为R2=0.994样品吸光度如下表表2样品吸光度1号2号A管0.576 0.555B管0.643 0.6561A中含有乙酰胆碱的量是6.7654 1B中含有7.5926 消耗乙酰胆碱为0.8272μmol2A中含有乙酰胆碱的量为6.5061 2B中含有7.7531 消耗乙酰胆碱量为1.247μmol由此数据可知2号管中乙酰胆碱消耗量大，估1号内乙酰胆碱酶活性被抑制为注射有有机磷农药的小鼠血样。

全血胆碱脂酶测定

注意事项
采血前先准备好试管，加入磷缓；采血时严格消毒，用过的棉球、刺针集中放置；准确控制水浴温度和放置时间；加三氯化铁显色后，在20min内比色；参比管的溶液留用到最后。
实验报告要求
[实验目的] [实验原理] [实验步骤] [实验结果] [分析与讨论]
三氯化铁比色法
[原理]
乙酰胆碱
胆碱酯酶
胆碱 +
乙酸
碱性羟胺
乙酰羟胺
FeCl3Leabharlann HCl羟肟酸铁(棕红色络合物)
[器材] 刺针一次性自控式微量吸管（20μl）分光光度计恒温水浴箱（37℃±0.5 ℃ ）
[试剂] 磷酸盐缓冲液（PH=7.20）碱性羟胺溶液 1∶2盐酸溶液三氯化铁溶液氯化乙酰胆碱标准应用液（1ml含7μmol）
实验目的
加深对有机磷农药中毒机制的认识掌握全血ChE活性测定的意义掌握全血ChE活性测定原理、方法
意义
有机磷农药中毒的重要诊断指标中毒者治疗后的效果观察指标接触有机磷农药人员健康状况的动态观察指标
方法
Asch-DTNB比色法（GBZ52）羟胺三氯化铁比色法溴麝香草酚蓝（B·T·B）比色法纸片法 Biocheck法（便携式分析仪）
健康人胆碱酯酶活性绝对值（0.02ml . 37 ℃ . 30min）男：4.43 μmol 女：3.99 μmol
河南健康人胆碱酯酶活性绝对值（0.02ml . 37 ℃ . 30min）全血：3.83±0.55μmol 血浆：0.76±0.18 μmol 红细胞: 3.07±0.45μmol
浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值男：3.22 ±0.336 μmol 女：3.19 ±0.398 μmol

实验5-全血胆碱脂酶测定-20121115

全血胆碱酯酶活性的测定有机磷农药organophosphorous pesticide接触机会生产施肥食物误服、自杀抑制体内胆碱酯酶（ChE）活性使体内乙酰胆碱大量积聚，引发神经系统功能紊乱胆碱酯酶有机磷农药诊断《职业急性有机磷杀虫剂中毒诊断标准》(GBZ-2002)职业史现场职业卫生调查临床症状体征实验室检查——全血胆碱酯酶（ChE）活性诊断分级标准全血ChE活性范围及临床症状体征急性轻度中毒---50%-70%头晕、头痛、胸闷、恶心等急性中度中毒---30%-50%流口水、腹痛、腹泻急性重度中毒---30%以下脑水肿、肺水肿、昏迷、呼吸麻痹等本次实验目的加深对有机磷农药中毒机制的认识掌握全血ChE活性测定的意义掌握全血ChE活性测定原理、方法意义有机磷农药中毒的重要诊断指标中毒者治疗后的效果观察指标接触有机磷农药人员健康状况的动态观察指标方法Asch-DTNB（硫代乙酰胆碱-联硫代双硝基苯甲酸）比色法（GBZ52）三氯化铁比色法溴麝香草酚蓝（B·T·B）比色法纸片法Biocheck法（便携式分析仪）[实验原理乙酰胆碱碱性羟胺乙酰羟胺实验原理血液胆碱酯酶使乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸。

未被胆碱酯酶水解而剩余的乙酰胆碱与碱性羟胺反应，生成乙酰羟胺，然后，与三氯化铁在酸性溶液中反应，形成红棕色羟肟酸铁络合物。

颜色深度与剩余乙酰胆碱的量成正比。

在波长520nm比色定量，由水解的乙酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。

操作步骤待测样本的制备：轻轻颠倒肝素抗凝全血使之均匀后取0.1ml ，再加入0.4ml 冷双蒸水，充分混匀1分钟，静置15分钟，制备的5倍溶血液对光观察澄清透亮待测。

全血0.10.1待测样本（ml ）0.350.358umol/ml全血中取样量（对照值对照×1ml ODThanks!。

全血胆碱脂酶测定精讲

实验器材
一次性注射器(1ml) 12个，采血用；微量移液器（20μl）；分光光度计；玻璃比色杯(每组至少3个)；擦镜纸；恒温水浴箱（37℃±0.5 ℃ ）移液管(0.2ml，1ml，5ml)；试管；漏斗；容量瓶
试剂
试剂均为分析纯，水为蒸镏水或去离子水。 1．磷酸盐缓冲溶液，pH=7.2 准确称取磷酸氢二钠(Na2HP04· 12H2O)16.72g和磷酸二氢钾 (KH2PO4)2.72g，用水溶解并稀释到1000ml，置4℃冰箱中保存。 2．碱性羟胺溶液临用时将139 g/L的盐酸羟胺溶液与140 g/L的氢氧化钠溶液等体积混合。 3．盐酸溶液1+2 浓盐酸l份加水2份混合。
A管（样品管）
37℃水浴 30min（准确计时）碱性羟胺4ml,振3min 1∶2盐酸溶液2ml, 摇1min 10%三氯化铁溶液2ml
摇匀、过滤、比色
计算
1.被水解的乙酰胆碱吸光度=
对照管吸光度（B管）－样品管吸光度（A管）
2.对照标准曲线，得出被水解的乙酰胆碱( μmol )
---即0.02ml血经37 ℃，30min反应条件下的
准确控制水浴温度和放置时间
加三氯化铁显色后，在20min内比色
参比管的溶液留用到最后
实验报告要求
[实验目的] [实验原理] [实验步骤] [实验结果]
[分析与讨论]
胆碱酯酶活性绝对值C
3.胆碱酯酶活性相对值（%）
样品胆碱酯酶活性绝对值 100 健康人碱酯酶活性绝对值
浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值
男：3.22 ±0.336 μmol
女：3.19 ±0.398 μmol
注意事项
采血前先准备好试管，加入磷缓采血时严格消毒，用过的棉球、刺针集中放置

全血胆碱酯酶活性测定

四、采样、运输和保存
• 用血色素吸管，取耳垂血20µL，注入比色管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立即进行测定。 • 如不能立即测定，可静脉取血0.5mL，注入玻璃管中(含肝素或草酸钾抗凝剂)，混匀。于保温瓶中加冰运送，置于4℃冰箱中可保存一周。
五、分析步骤
管号乙酰胆碱标准应用液(ml) 磷酸盐缓冲液乙酰胆碱含量 (umol) 0 0 1.0 0 1 0.1 0.9 0.35 2 0.2 0.8 0.7 3 0.3 0.7 1.05 4 0.4 0.6 1.4 5 0.5 0.5 1.75 样品 A 血 0.02 ml 0.98ml 对照 B 血 0.02 ml 0.98ml
• 按式(2)计算酶活性的相对值：Y= Xs/ Xc • 式中：Y—酶活性的相对值，%； • Xs—被测血样中酶活性的绝对值， µmol(0.02mL·37℃·30min)； • Xc—正常人血中酶活性绝对值， µmol(0.02mL·37℃·30min)。 Xc=1.60µmol(0.02mL·37℃·30min)
二、仪器
• • • • • • 分光光度计； 10mL比色管；漏斗；恒温水浴箱，控温±0.5℃；采血针头；血色素吸管。
三、试剂
• 本标准所用试剂均为分析纯试剂 1、实验用水，蒸馏水或具同等纯度的去离子水 2、盐酸溶液(1＋2) 3、碱性羟胺溶液，临用前将139g/L盐酸羟胺溶液和140g/L氢氧化钠溶液等体积混合 4、磷酸盐缓冲液(PH＝7.20)，准确称取磷酸氢二钠 (Na2HPO4·12H2O)8.36g和磷酸二氢钾(KH2PO4)1.36g，用水溶解并稀释到500mL，保存在冰箱内 5、三氯化铁溶液，称取10g三氯化铁(FeCl3·6H2O)，加 0.84mL盐酸(4.2)，然后加水100mL。贮存于棕色瓶中 6、氯化乙酰胆碱标准液：贮备液70µmol/mL乙酰胆碱；临用前，取此溶液用磷酸盐缓冲液稀释10倍为应用液， 7µmol/mL乙酰胆碱

全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法羟胺三氯化铁法

全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法羟胺三氯化铁法Blood—Determinatoin of cholinesterase activity—Spectrophotometricmethod—Hydroxylamine-ferric chloride method1 主题内容与适用范围本标准规定了血中胆碱酯酶活性的分光光度测定方法——羟胺三氯化铁法。

本法最低检测浓度为2.4μmol/L。

本标准适用于正常人和接触有机磷农药人员血中胆碱酯酶活性的测定。

2 原理血液胆碱酯酶使乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸。

未被胆碱酯酶水解而剩余的乙酰胆碱与碱性羟胺反应，生成乙酰羟胺，然后，与三氯化铁在酸性溶液中反应，形成红色羟肟酸铁络合物。

颜色深度与剩余乙酰胆碱的量成正比。

在波长520 nm比色定量，由水解的乙酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。

3 仪器3.1分光光度计，10mm比色杯。

3.2比色管，10 mL。

3.3普通漏斗，40mm。

3.4恒温水浴箱，控温士0.5℃。

3.5采血针头。

3.6血色素吸管，有20μL刻度。

4试剂本标准所用试剂均为分析纯试剂。

4.1 实验用水，蒸馏水或具同等纯度的去离子水。

4.2 盐酸，=1.19 g/mL。

4.3 盐酸溶液(1+2)。

4.4 碱性羟胺溶液，临用前将139 g/L盐酸羟胺溶液和140 g/L氢氧化钠溶液等体积混合。

4.5 磷酸盐缓冲液(pH=7.20)，准确称取磷酸氢二钠()8.36g和磷酸二氢钾()1.36g，用水溶解并稀释到500mL，保存在冰箱内。

4.6 三氯化铁溶液，称取10 g三氯化铁()，加0.84 mL盐酸(4.2)，然后加水100mL。

贮存于棕色瓶中。

4.7 氯化乙酰胆碱标准液，精确称取乙酰胆碱1.2716g，用磷酸盐缓冲液(4.5)溶解，并稀释到100 mL，此溶液1mL相当于70μmol乙酰胆碱，为贮备液。

临用前，取此溶液用磷酸盐缓冲液(4.5)稀释10倍，此溶液1 mL相当于7μmol乙酰胆碱，为应用液。

全血胆碱酯酶活性测定

实验五全血胆碱酯酶活性测定全血胆碱脂酶活性分光光度测定方法WS/T67—1996[原理]胆碱脂酶水解硫代乙酰胆碱（ASCH，acetyl-thilcholine）,生成硫代乙酰胆碱和乙酸。

硫代胆碱与硫基现色几剂，5,5-联硫代双-2-硝基苯甲酸[DTNB，dithio-bis-(nitribenzoic acid)]反应，形成黄色化合物5-巯基-2-硝基苯甲酸（TNB）。

在412nm长下比色定量。

[仪器]分光光度计，5mm比色杯；恒温水浴；离心机；血红蛋白吸管，20ul；刻度吸管，5.0ml, 2.0 ml；试管10ml；容量瓶，10ml。

[试剂]1．1/15mol/L磷酸盐缓冲液（PH 7.4）；生理盐水：氯化钠0.85/100ml；硫代乙酰胆碱（ASCh）溶液：称取ASCh 72.3mg，溶于生理盐水中并稀释成10ml。

置冰箱中保存。

临用时，以生理盐水稀释10倍；5,5-联硫代双-2-硝基苯甲酸（DTNB）溶液：称取DTMB19.8mg，滴加硫酸缓冲液并搅拌至完全溶解，溶液透明（约2ml）。

再用生理盐水稀释至10ml ，置冰箱中保存。

临用时，用生理盐水稀释10倍；出现黄色即弃取；毒扁豆碱溶液（抑制剂）：取毒扁豆碱约1mg，溶于1ml生理盐水中。

临用时配制。

严防污染其他试剂和器材。

2．巯基标准溶液：准确称取还原型谷胱甘肽3.07mg，用水（经煮沸并冷却的水）溶解并移入10ml容量瓶中，稀释至刻度。

此溶液1ml相当于1μmol谷胱甘肽。

因谷胱甘肽易氧化，故溶液应临用时配制。

[采样、运输和保存]取10ul末梢血滴入置有肝素钠或3ml磷酸缓冲液的小试管中，混匀，加塞。

置冰瓶中运送，于4℃冰箱内保存，尽快分析。

[分析步骤]1．标准曲线的绘制：取5支试管，按实习10—6配制标准。

以水为参比测定吸光度。

从各标准管的吸光度减去0管，以酶活性为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

2．样品测定实习表10—6 标准管的配制管号0 1 2 3 4巯基标准溶液，ml 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4水，ml 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1缓冲溶液，ml 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 DTNB溶液，ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5胆碱酯酶活性，μmol/ml 0.0 20 40 60 801．将样品从冰箱中取出，使恢复到室温，混匀待用。

全血、血浆、红细胞胆碱酯酶速率测定法

全血、血浆、红细胞胆碱酯酶速率测定法
顾华强;陈再射;游全程;蒋良述;杨跃林
【期刊名称】《现代预防医学》
【年(卷),期】1992(19)2
【摘要】本文介绍用乙酰硫代胆碱作底物、DTNB作显色剂在405nm处连续监测,建立了全血、血浆、红细胞胆碱酯酶活性的速率测定法。

线性范围全血为600-9000U/L血浆为200-8000U/L,红细胞批内CV2.6-4.3%,批间CV3.4-5.6%,平均回收率96.3%。

与羟胺法比较r=0.92(P<0.001)。

本法灵敏、精确度与线性较满意,操作简易,适于科研、临床应用。

【总页数】4页(P96-99)
【关键词】胆碱酯酶;红细胞;速率法
【作者】顾华强;陈再射;游全程;蒋良述;杨跃林
【作者单位】华西医大职业病防治医院
【正文语种】中文
【中图分类】R446.112
【相关文献】
1.全血、血浆、红细胞胆碱酯酶正常值的探讨 [J], 阿拉塔;张建余;刘彦慧
2.全血、血浆、红细胞胆碱酯酶活性在急性有机磷农药中毒病程中的变化及意义[J], 张在其;梁仁;黄韬;杨华喜;彭巍;陈涤民;尹芙蓉;易高;周玉淑
3.微量动态监测有机磷中毒者全血、血浆、红细胞胆碱酯酶活性的临床研究 [J],
张在其;梁仁;黄韬;杨华喜;彭巍;陈涤民;尹芙蓉;易高;王承志;周玉淑
4.血液胆碱酯酶活力测定方法的进一步研究Ⅰ．红细胞／全血胆碱酯酶活力比例及红细胞计数校正酶活力值的研究 [J], 孙东红;赵丽红;周宏东;薛寿征
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