实验 细胞骨架的显示及观察
细胞骨架的染色与观察实验报告
细胞骨架的染色与观察实验报告一、实验背景细胞骨架是指细胞内由蛋白质构成的一种网状结构，可以支撑细胞的形态、维持细胞的内部有序、参与细胞的运动和分裂等生命活动。
细胞骨架的主要成分包括微丝、中间丝和微管，这三种蛋白质纤维在细胞内的分布和作用有所不同。
本实验旨在通过细胞骨架的染色与观察，了解细胞骨架的结构和特点。
二、实验材料和方法1. 材料：小鼠肝脏组织样本、PBS缓冲液、甲醛、甲醛酸化钠、丙酮、甲醛氧化物、溴化乙酰、荧光素鸟嘌呤、荧光偶氮染料等试剂。
2. 方法：（1）将小鼠肝脏组织取出，加入PBS缓冲液冲洗去血液和其他保留物，然后用甲醛固定细胞构象。
（2）将甲醛酸化钠液加入细胞中，使细胞膜通透性增加，便于荧光偶氮染料和溴化乙酰进入细胞。
（3）加入荧光偶氮染料和溴化乙酰，使细胞骨架染色。
（4）用溶液冲洗染色的细胞样本，使细胞骨架显色。
（5）观察染色后的细胞骨架结构，并记录观察结果。
三、实验结果经过实验操作和观察，我们可以发现小鼠肝脏细胞中微丝和微管的分布是在细胞膜内外，其网状结构是有规律的。
中间丝则是位于细胞的核周以及胞质中，主要作用是支撑和维持细胞形态。
在荧光显微镜下观察，细胞骨架结构清晰，可见荧光偶氮染料和溴化乙酰显色的微丝、中间丝和微管纤维。
四、实验结论通过本实验，我们知道细胞骨架是由微丝、中间丝和微管等纤维蛋白质组成的一种网状结构，主要作用是支撑细胞的形态，参与细胞的运动和分裂等生命活动。
通过细胞骨架的染色与观察，可以了解细胞骨架的结构和特点。
实验结果显示，细胞骨架结构清晰，可见微丝、中间丝和微管纤维的荧光显色。
观察细胞骨架实验报告
观察细胞骨架实验报告观察细胞骨架实验报告细胞是构成生物体的基本单位，而细胞骨架则是维持细胞形态和功能的重要组成部分。
通过观察细胞骨架实验，我们可以深入了解细胞骨架的结构和功能，进而探索细胞内部的奥秘。
实验过程中，我们选取了小鼠肺组织中的细胞进行观察。
首先，我们将细胞固定在载玻片上，并用甲醛进行固定处理。
接下来，我们使用荧光染料标记细胞骨架的主要成分，如微丝、中间丝和微管。
通过荧光显微镜观察，我们可以清晰地看到细胞骨架在细胞内的分布情况。
在实验中，我们发现细胞骨架呈现出丰富的结构。
微丝是由肌动蛋白蛋白质组成的细丝状结构，主要分布在细胞的边缘和质膜下。
中间丝是由多种细胞骨架蛋白组成的纤维状结构，主要分布在细胞核周围和细胞质中。
微管是由α-和β-微管蛋白组成的管状结构，主要分布在细胞质中，并参与细胞分裂和细胞器运输等重要生物学过程。
通过观察细胞骨架的实验，我们还发现细胞骨架在细胞内的功能十分重要。
微丝可以通过收缩和伸长调控细胞的形态变化和运动。
中间丝可以提供细胞的结构支持，维持细胞的形态稳定。
微管则可以作为细胞器运输的轨道，将细胞器从一个位置运输到另一个位置。
此外，我们还观察到细胞骨架与其他细胞结构之间的相互作用。
例如，细胞骨架与细胞质基质之间通过细胞外基质蛋白相互连接，形成细胞外基质-细胞骨架-细胞膜的结构。
这种结构可以提供细胞的支持和稳定，并参与细胞的信号传导和细胞外基质的合成。
通过观察细胞骨架的实验，我们不仅可以深入了解细胞骨架的结构和功能，还可以进一步研究细胞骨架与细胞生理过程的关系。
例如，我们可以通过干扰细胞骨架的形成和功能，来研究其对细胞分裂、细胞运动和细胞信号传导等过程的影响。
这些研究将有助于我们更好地理解细胞生物学的基本原理，为疾病的治疗和细胞工程的应用提供理论基础。
总之，通过观察细胞骨架的实验，我们可以深入了解细胞骨架的结构和功能，进一步探索细胞内部的奥秘。
细胞骨架在维持细胞形态和功能方面起着重要作用，与其他细胞结构之间存在着相互作用。
细胞骨架实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解细胞骨架的基本概念及其在细胞生物学中的重要性。
2. 掌握使用荧光显微镜观察细胞骨架的方法和技巧。
3. 认识细胞骨架的主要组成成分，包括微丝、微管和中间纤维。
4. 分析细胞骨架在不同细胞类型和生理状态下的形态和分布。
二、实验原理细胞骨架是真核细胞内由微丝、微管和中间纤维组成的网状结构，负责维持细胞形态、细胞运动、物质运输、信号传导等重要功能。
微丝主要由肌动蛋白组成，微管主要由α-和β-微管蛋白组成，而中间纤维则由多种蛋白质组成。
细胞骨架的结构和动态变化对细胞的正常生理功能至关重要。
三、实验材料与仪器材料：1. 植物细胞样本（如洋葱鳞片叶表皮细胞）2. 动物细胞样本（如小鼠成纤维细胞）3. 荧光标记的细胞骨架蛋白抗体4. 抗荧光标记的抗体5. 胶体金标记的抗体6. 封片剂仪器：1. 荧光显微镜2. 激光共聚焦显微镜3. 冷冻切片机4. 液氮5. 恒温培养箱6. 电子显微镜四、实验步骤1. 样本制备：- 植物细胞样本：取洋葱鳞片叶表皮细胞，用2%的戊二醛固定，进行冷冻切片。
- 动物细胞样本：培养小鼠成纤维细胞，用2%的戊二醛固定，进行冷冻切片。
2. 荧光标记：- 将切片置于含有荧光标记的细胞骨架蛋白抗体的溶液中，室温孵育一段时间。
- 洗涤切片，去除未结合的抗体。
3. 抗荧光标记抗体：- 将切片置于含有抗荧光标记抗体的溶液中，室温孵育一段时间。
- 洗涤切片，去除未结合的抗体。
4. 胶体金标记抗体：- 将切片置于含有胶体金标记抗体的溶液中，室温孵育一段时间。
- 洗涤切片，去除未结合的抗体。
5. 封片：- 将切片置于封片剂中，覆盖玻片，封片。
6. 显微镜观察：- 使用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察细胞骨架的形态和分布。
五、实验结果与分析1. 洋葱鳞片叶表皮细胞：- 在荧光显微镜下观察到洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架主要由微丝和微管组成。
- 微丝呈网状分布，主要位于细胞质膜内侧。
- 微管呈束状分布，主要位于细胞核周围。
细胞骨架实验报告分析
细胞骨架实验报告分析
实验目的：分析细胞骨架的结构和功能。
实验方案：
1. 从培养皿中取出细胞样本。
2. 用PBS缓冲液洗涤样本，去除杂质。
3. 采用适当的方法对细胞样本进行固定，如使用甲醛或冷冻固定法。
4. 进行细胞透明化处理，如使用醋酸正己酯或醋酸乙腈进行处理。
5. 使用荧光染料标记细胞骨架，如荧光标记的抗体。
6. 进行显微观察，使用显微镜观察细胞骨架的形态和结构，并记录观察结果。
7. 分析细胞骨架的组成和功能。
实验结果：
观察细胞骨架后，我们发现细胞骨架主要由微观结构组成，包括微丝、微管和中间丝。
微观结构在细胞内起着维持细胞形态、细胞运动和细胞分裂等重要功能。
微丝由细胞骨架蛋白聚合体组成，主要存在于细胞质中。
微丝的直径约为7纳米，长度可变。
微丝在细胞运动、肌肉收缩等方面起到重要作用。
微管由微管蛋白聚合物组成，是一种管状结构。
微管的直径约为25纳米。
微管在细胞分裂、细胞内物质运输等过程中起到
重要作用。
中间丝是由中间丝蛋白聚合物组成的，直径约为10纳米。
中间丝在细胞内提供机械支持，使细胞具有较强的抗压性。
实验结论：
细胞骨架是细胞内的重要组成部分，对维持细胞形态、细胞运动和细胞分裂等过程起着重要作用。
细胞骨架的主要组成包括微丝、微管和中间丝，它们通过不同的机制实现细胞的各种功能。
对于进一步研究细胞活动、细胞生物学和生物医学领域的研究具有重要意义。
实验九、细胞骨架的显示和观察『目的要求』1、掌握细胞骨
二、实验操作的注意事项
• M缓冲液使细胞骨架保持稳定。
• 咪唑：稳定PH值，缓冲作用。 KCL：提供离
子，对骨架起聚合作用。 MgCL2:提供离子， 对骨架起聚合作用。 EGTA：螯合Ca离子 Ca离子对聚合不利。 EDTA：螯合Ca离子 Ca离子对聚合不利。 巯基乙醇：起还原作 用，稳定骨架结构。
• 配方：
试剂 相对分子质量 所需浓度 每升加量 备注 咪唑 68.08 50mmol/L 3.40g KCL 74.55 50mmol/L 3.73g MgCl2。6H2O 203.30 0.5mmol/L 0.1g EGTA 380.40 1.0mmol/L 0.38g EDTA。2H2O 372.24 0.1mmol/L 0.04g B-巯基乙醇 78.13 1.0 mmol/L 70ul 甘油 92.09 4.0mmol/L 294.8ml 加水定容至1L，PH调至7.2
错的纤维网络结构，按组成和形态结构的不同分为微 管（microtubule，MT）、微丝（microfilament， MF）、中间纤维（intermediatefilament，IF）。它 们对细胞的形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、 分化和物质的运输等起重要作用。观察和研究细胞骨 架可用光镜、电镜、间接免疫荧光技术、细胞化学技 术等方法。对光镜下细胞骨架的形态学观察多用1%的 TritonX-100（聚乙二醇辛基苯醚）处理细胞，使95% 以上的可溶性蛋白质以及全部脂质被抽提，再以蛋白 质染料考马斯亮蓝R250染色，使细胞内细胞骨架得以 清晰显现。
实验九、 细胞骨架的显示和观察
『目的要求』 1、掌握细胞骨架显示的原理。 2、熟悉细胞骨架显示的方法。
细胞实验课件植物细胞骨架的显示与观察
根据细胞骨架成份的蛋白质性质及其抗去垢 剂抽提的特点，用戊二醛在室温下固定细胞后， 经非离子型去垢剂TritonX-100处理除去膜结构 和可溶性蛋白质，留下抗抽提的细胞骨架成份， 用考马斯亮兰R250染色显示。
植物细胞骨架的显示与观察
实验目的 １．加深了解细胞骨架成份的化学性质、形态
分布与功能。 ２．掌握用考马斯亮兰显示细胞骨架系统的原
理与方法。
植物细胞骨架的显示与观察
１．仪器、用具 显微镜、载玻片、盖玻片、剪刀、镊子
２．材料 新鲜的洋葱鳞茎பைடு நூலகம்表皮
３．试剂 （１）3%戊二醛固定液 （２）1%TritonX-100抽提剂 （３）0.2%考马斯亮兰R250染色液
植物细胞骨架的显示与观察
植物细胞骨架的显示与观察
１．洋葱鳞茎内表皮要选取新鲜的。 ２．材料在载玻片上要确保展平，并且
是单层细胞。 ３．要保证材料充分和药品接触。
植物细胞骨架的显示与观察
作业：实验报告，观察到的图像要画图。
植物细胞骨架的显示与观察
观察时，先用低倍镜观察，可以看见细胞的核 区及细胞质中的细胞骨架成份被染成兰色，成束 的细胞骨架成份从核周围呈现放射状地向细胞质 中延伸，找到典型的图像后，转用油镜细心观察 ，注意调节显微镜的工作状态，尽可能达到最佳 分辨效果和清晰度，并仔细地调节细调旋钮，在 立体细胞的不同水平面进行观察。这时候，可以 看到细胞骨架结构的立体情况，并在细胞膜下见 到由很细的纤维构成的网格结构，此外，还可以 明显观察到横穿细胞壁的胞间连丝存在的部位。
1 取材：新鲜内表皮。 2 固定：3%戊二醛固定液，15min。水洗干净，
吸干水分。 3 抽提：1%TritonX-100抽提剂，20min。水洗
细胞骨架的观察实验报告
细胞骨架的观察实验报告细胞骨架的观察实验报告细胞是生命的基本单位，它们构成了人体和其他生物体的组织和器官。
细胞内存在着许多重要的结构，其中之一就是细胞骨架。
细胞骨架是由微观的蛋白质纤维组成的网络结构，它在细胞内起着支撑和维持细胞形态、运动和分裂等重要功能。
为了更好地理解细胞骨架的结构和功能，我们进行了一系列的观察实验。
实验一：荧光染色观察细胞骨架我们首先使用了一种叫做荧光染色的技术来观察细胞骨架。
在实验中，我们选取了一种叫做荧光素的染料，它能够与细胞骨架中的蛋白质结合，并发出荧光信号。
我们将这种染料加入到培养皿中的细胞培养液中，让其与细胞骨架结合。
然后，我们使用荧光显微镜观察细胞，并通过摄像机将观察到的图像记录下来。
在观察的过程中，我们发现细胞骨架呈现出一种网状结构。
这个结构覆盖了整个细胞，并且与细胞膜相连。
通过进一步的观察，我们发现细胞骨架在不同类型的细胞中有所差异。
在肌肉细胞中，细胞骨架形成了一种有序的纤维排列，这种排列有助于肌肉的收缩和运动。
而在神经细胞中，细胞骨架则呈现出一种分支状结构，这种结构有助于神经细胞的延伸和传导。
实验二：细胞骨架的动态观察为了更深入地了解细胞骨架的功能，我们进行了细胞骨架的动态观察实验。
在这个实验中，我们使用了一种叫做活细胞荧光显微镜的仪器，它能够实时观察细胞骨架的运动和变化。
通过实验，我们发现细胞骨架是一个动态的结构，它可以根据细胞的需要进行重组和重塑。
当细胞需要移动或分裂时，细胞骨架会重新组织，形成一个新的结构，以支撑和维持细胞的活动。
而当细胞需要改变形态或进行细胞内物质的运输时，细胞骨架会发生变化，以适应细胞的需求。
此外，我们还观察到细胞骨架在细胞运动中的重要作用。
通过实验，我们发现细胞骨架能够通过与细胞膜的相互作用，推动细胞的移动。
当细胞需要移动时，细胞骨架会向前伸展，并与细胞膜相连，通过收缩和伸展的运动，推动细胞的移动。
细胞骨架在细胞分裂中也起着重要的作用。
细胞骨架观察实验报告
细胞骨架观察实验报告细胞骨架观察实验报告细胞骨架是细胞内的一种重要结构，由微丝、中间丝和微管组成。
它们在维持细胞形态、细胞运动以及细胞内物质的运输等方面起着重要的作用。
为了更好地了解细胞骨架的结构和功能，我们进行了一系列的观察实验。
实验一：细胞骨架的染色观察我们首先使用荧光染色技术对细胞骨架进行观察。
通过使用荧光标记的抗体，我们能够将细胞骨架上的蛋白质特异性地染色，从而使其在显微镜下呈现出荧光信号。
在实验中，我们选择了小鼠肺细胞作为观察对象。
将细胞固定在载玻片上后，使用抗体与荧光标记结合，然后进行显微镜观察。
结果显示，细胞骨架呈现出网状结构，覆盖在整个细胞内。
微丝呈现为细而长的纤维，中间丝则呈现为较粗的纤维，微管则呈现为管状结构。
通过荧光染色技术，我们能够清晰地观察到细胞骨架的分布和形态。
实验二：细胞骨架的动态观察为了观察细胞骨架的动态变化，我们进行了实时显微镜观察。
在实验中，我们使用了活体细胞显微镜，能够对细胞进行连续观察并记录下来。
通过观察，我们发现细胞骨架在细胞运动过程中发挥着重要作用。
例如，在细胞的伸展和收缩过程中，微丝会发生变化，从而影响细胞的形态。
此外，细胞骨架还参与了细胞内物质的运输。
微管作为细胞内物质运输的通道，能够将物质从细胞核运输到细胞的其他部位。
实验三：细胞骨架与细胞功能的关系细胞骨架不仅仅是维持细胞形态的重要结构，还与细胞的功能密切相关。
为了探究细胞骨架与细胞功能之间的关系，我们进行了一系列的功能实验。
在实验中，我们选择了细胞的迁移能力作为研究对象。
通过抑制细胞骨架的形成，我们发现细胞的迁移能力明显受到抑制。
这表明细胞骨架对细胞的迁移过程起到了重要的调控作用。
此外，我们还观察到细胞骨架与细胞分裂之间的关系。
在细胞分裂过程中，细胞骨架会发生动态重组，从而参与细胞的分裂。
通过抑制细胞骨架的形成，我们发现细胞的分裂过程受到了明显的干扰。
综上所述，细胞骨架是细胞内的一种重要结构，对细胞的形态、运动以及功能都起着重要的作用。
观察细胞骨架实验报告
一、实验目的1. 了解细胞骨架的基本组成和功能。
2. 掌握观察细胞骨架的方法和技巧。
3. 培养学生的实验操作能力和观察能力。
二、实验原理细胞骨架是真核细胞中由蛋白质纤维组成的非膜结构系统，主要由微管、微丝和中间纤维组成。
细胞骨架在维持细胞形态、细胞运动、物质运输、信号传导和细胞分裂等方面发挥着重要作用。
本实验采用洋葱鳞片叶表皮细胞作为实验材料，利用Triton X-100处理细胞，破坏细胞膜和细胞质中的蛋白质，使细胞骨架系统的蛋白质得以保存。
通过考马斯亮蓝R250染色，在光学显微镜下观察细胞骨架的形态和结构。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱鳞片叶表皮细胞、PBS缓冲液、Triton X-100、M-缓冲液、考马斯亮蓝R250染液、蒸馏水。
2. 实验仪器：光学显微镜、解剖刀、镊子、小培养皿、吸水纸、纱布、胶头滴管。
四、实验步骤1. 取洋葱鳞片叶表皮细胞，用解剖刀将其撕成小块，放入盛有PBS缓冲液的小培养皿中，静置5分钟。
2. 吸去PBS缓冲液，向小培养皿中加入1.5ml Triton X-100（1%），浸没细胞20分钟。
3. 吸去Triton X-100，向小培养皿中加入2ml M-缓冲液，浸没细胞，置于摇床上5分钟，重复两次。
4. 向小培养皿中加入考马斯亮蓝R250染液，染色5分钟。
5. 吸去染液，用蒸馏水冲洗细胞，去除多余的染液。
6. 将处理好的细胞涂片，放在光学显微镜下观察。
五、实验结果与分析在光学显微镜下观察，可见洋葱鳞片叶表皮细胞内呈现出一种以微丝为主的网状结构，即细胞骨架。
细胞骨架在细胞内呈放射状分布，与细胞膜相连。
细胞骨架在细胞分裂、细胞运动、物质运输等过程中发挥着重要作用。
六、实验讨论1. 细胞骨架的组成和功能：细胞骨架由微管、微丝和中间纤维组成，它们在维持细胞形态、细胞运动、物质运输、信号传导和细胞分裂等方面发挥着重要作用。
2. 观察细胞骨架的方法：本实验采用Triton X-100处理细胞，破坏细胞膜和细胞质中的蛋白质，使细胞骨架系统的蛋白质得以保存。
细胞生物学实验-细胞骨架的观察
细胞生物学实验-细胞骨架的观察实验目的：观察细胞骨架的存在及结构特征。
实验原理：细胞骨架主要由微小管、微丝和中间丝三种成分组成。
微小管是细胞内最重要的结构，直径约为25nm，长度具有较大的变化范围，是由α-β二聚体组成的多肽链聚集而成。
微丝是位于微小管之外的细胞骨架成分，直径约为7nm，由肌动蛋白filament组成。
中间丝直径约为中等，是由keratin和axonin组成的。
细胞骨架的主要作用包括支持和维持细胞形态、控制细胞的生命周期、支持和维持细胞内各种分子的定位及转运、以及参与细胞的运动和分裂等。
实验材料：荧光标记的微管蛋白、肌动蛋白实验方法：1. 吸附载玻片：准备好的载玻片放在乙醇中浸泡3小时，用吹气干燥后在荧光素溶液中吸附2-3小时。
2. 细胞染色：加入荧光标记的微管蛋白、肌动蛋白后，在黑暗条件下孵育1小时，然后将其冲洗干净。
3. 检测和照相：用显微镜在荧光显微镜下检测并拍照。
实验结果：1.观察荧光显微镜下的细胞：细胞显示出强光。
2.观察微管蛋白：可见微管呈无规则的网状结构，在一个点向外呈放射状散开，形成微管。
3.观察肌动蛋白：可见肌动蛋白形成菜状结构，形状呈现如波浪一样的起伏。
实验不足：此次实验只观察到细胞骨架染色后的低倍镜，需要进一步地深入探索观察细胞骨架在高倍镜下的三维结构和运动状态。
参考文献：1. 纪洪宇，卢国红. 细胞生物学[M]. 高等教育出版社, 2008.2. 段誉瑾，臧建义. 细胞生物学实验指导[M]. 科学出版社, 2009.3. Kornberg T B, Royou A. Centrosomes and microtubule organization in the Drosophila embryo[J]. Cellular and molecular life sciences, 2014, 71(23): 4301-4316.。
细胞生物学实验 细胞骨架的观察【精选】
2）室温下用1%TritonX-100处理20-30 min。 3）用M-缓冲液轻轻洗细胞3次。 4）略晾干后，用3.0%戊二醛固定细胞10 min。 5）用PBS洗数次，滤纸吸干。 6）用0.2%考马斯亮蓝R250染片子30 min。蒸馏水冲洗，在空气中自然
晾干。 7）在光学显微镜下先用10×物镜再用40×物镜观察。
细胞（特别是真核细胞）中的骨架系统，不仅仅是活细胞的支撑 结构，决定细胞的形状，而且与细胞运动、物质运输、能量转换、信 息传递、细胞分裂、基因表达、细胞分化、极性生长等生命活动密切 相关。
细胞骨架的观察
仪器、材料与试剂
仪器：光学显微镜，温箱，细胞培养来自备材料：平皿，烧杯，载玻片（为区别细胞的正反 面，剪
细胞骨架的观察
实验报告及思考题
1 画出所观察到的微丝图像。 2 说明在实验中1%TritonX-100处理细胞的作用是什么？ 3 说明M-缓冲液的作用是什么？ 4考马斯R250和G250的区别是什么？ 5 考马斯R250和鬼笔环肽对细胞骨架的染色有什么区别，各有什么
优缺点？ 6 简述微丝动态平衡过程中各种条件及作用。 7 ATP在微丝动态平衡中所起的作用是什么？
实验四 细胞骨架的观察
细胞生物学实验
细胞骨架的观察
• 实验目的 • 实验原理 • 仪器、材料与试剂 • 实验步骤 • 实验报告及思考题
实验目 的
掌握用考马斯亮蓝R250染色观 察动物和植物细胞微丝的方法。
细胞骨架的观察
实 验原理
细胞骨架（cytoskeleton）是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。 广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外 基质。狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括微丝（microfilament， MF）、微管（microtubule，MT）、中间纤维（intermediated filament，IF）。
细胞骨架观察实验报告
细胞骨架观察实验报告实验目的：通过显微镜观察细胞骨架的结构和功能，深入了解生命科学中的重要概念。
实验材料和方法：植物细胞片、动物细胞片、荧光显微镜、细胞稀释液、甲醛、异丙醇、甲基绿、甲醛溶液、异丙醇溶液、PBS缓冲液、枪形笔、离心机、显微镜、涂片机、湿度调节器。
将前一天收集好的细胞培养物放入50mL离心管中。
将细胞培养物进行离心，速度为3000转/分钟，时间为5分钟。
将上清液弃去，留取细胞沉淀。
添加1mL PBS缓冲液并混匀。
在取出的细胞沉淀中加入3mL甲醛异丙醇溶液进行固定，固定时间为15-30分钟。
取出后在涂片机上进行铺片。
在铺好的玻璃片上滴加甲基绿溶液，静置15分钟，然后漂洗去荧光剂。
用PBS缓冲液洗涤3次，每次洗涤1分钟以上。
将玻璃片覆盖在玻璃载玻片上，放在调节好的荧光显微镜上进行观察。
实验结果：观察到了细胞骨架的结构。
细胞骨架是细胞内的一组基质蛋白，由微丝、中间纤维和微管三个部分组成。
在荧光显微镜下，我们可以看到其中的微丝会在不同时期产生不同的表现。
当细胞钙离子的浓度较高时，会细胞骨架的所有部分都产生显著的变形。
微管是细胞内比较长的蛋白纤维，是细胞分裂过程中必不可少的分子机制之一。
中间纤维是一种静止的形态，主要作用是连接细胞内的各个细胞结构，是维持细胞形态和结构的重要因素之一。
结论：通过本次实验，我们可以清楚地了解到细胞骨架作为生命科学领域内的重要概念，在细胞分裂和细胞形态维持方面起到了非常重要的作用。
通过深入观察细胞骨架的结构和功能，我们可以更好地了解生命科学的基本理念，同时也可以推动生命科学的进一步研究和发展。
观察细胞骨架实验报告
观察细胞骨架实验报告观察细胞骨架实验报告篇一：洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架观察实验报告洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架观察实验报告吴若自然科学大类单周四 119 XX/11/17一、实验目的:1. 掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法。
2. 认识细胞骨架的形态，联系细胞骨架的功能。
二、实验原理：细胞骨架是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。
广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。
根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中间纤维。
细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。
本试验采用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250 染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。
三、操作步骤：1. 取洋葱内皮表层膜1cm2(可多取两片)左右置于含2mlPBS液的小皿中湿润5min后，吸去PBS2. 向小皿中加入1.5mlTritonX-100(1%)，浸没20min后，吸走TritonX-1003. 向小皿中加入2mlMbuffer浸没置于摇床上5min，重复两次后，吸走Mbuffer4. 向小皿中加入105ml戊二醛（3%），浸没30min后，吸走戊二醛5. 向小皿中加入2mlPBS，浸没置于摇床上5min，重复两次6. 取出表皮平铺于载玻片上，滴加100微升，静置100min后吸取染料7. 向表面滴加蒸馏水洗涤后用纸巾洗去液体，重复两次8. 盖上盖玻片，擦去残余液体，用光学显微镜观察并拍照记录四、实验结果：如图所示，洋葱内表皮细胞轮廓清晰可见，细胞壁及其分界明显可见。
可观察到线性纤维交织而成的网状结构，同一细胞内各处骨架密集度不均匀，细胞核区域纤维较密集，蓝色较重。
调节显微镜焦距可观察到细胞不同横切面的网络结构的变化，表明细胞骨架以三维立体结构的形式分布在整个细胞内。
实验三细胞骨架的显示和观察
细胞内由微丝、微管、中间纤维等交织 形成一个十分复杂的立体网络结构。它 们对于细胞形状的保持、细胞内物质运 输、细胞运动、细胞内各结构相对位置 的固定，故而称为细胞骨架；
对生长、分裂、分化，物质运输、能量 转换、信息传递、基因表达都有重要作 用。
实验目的 ： 1.了解细胞骨架的结构特征 2.掌握光镜标本的细胞骨架的制作方法。
实验仪器：显微镜、盖玻片、载冲液、1%TritonX-100、M-缓冲 液、0.2%考马斯亮蓝R250染液、3%戊二醛
标本：玉葱鳞叶
实验原理
细胞骨架在通常固定条件下不稳定，如低温、 高压、酸处理等。
当采用适当的手段，如当洋葱表皮细胞用适当 浓度的Tritonx——100(聚乙二醇辛基醚，是一 种非离子去垢剂)处理，能溶解质膜结构中及 细胞内许多蛋白质，细胞骨架系统的蛋白质却 不被破坏，
3、与抗原、抗体的结合方式简便，
不影响抗原或抗体的效价；
4、荧光明亮、不易淬灭； 5、性质比较稳定，易溶水。
荧光免疫染色类型： 直接、间接和补体介导
用抗α-tubulin抗体染色显示微管(绿色); 细胞核: 红色, DAPI染色(激光共聚焦显微镜照片)
思考题
1. 细胞分裂时细胞骨架发生哪些改变？ 可以采取哪些研究方法进行检测？
实验结果
细胞内有蓝色、粗细不均的纤维网状结 构，即为细胞骨架。
细胞生物学实验技术简介
免疫荧光染色显示细胞骨架
免疫荧光染色（Fluorescence immuno-staining）是利 用抗原－抗体特异性结合的原理，用经荧光染料标记的抗体 对细胞或组织内的蛋白质进行定性或定量研究的方法。该技 术与荧光显微镜观察相结合，可对特定的蛋白质进行细胞或 组织内的精确定位。近年来随着各种新基因和新蛋白的发现， 免疫荧光染色技术也得到越来越广泛的应用，免疫荧光技术 本身也不断得到改进。
细胞骨架的观察实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞骨架的观察方法及原理。
2. 了解细胞骨架的基本结构、组成和功能。
3. 通过观察细胞骨架，了解其在细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等过程中的重要作用。
二、实验原理细胞骨架是真核细胞内由蛋白质纤维组成的非膜结构系统，包括微管、微丝和中间纤维。
它们对维持细胞形态、细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等过程具有重要作用。
1. 微管：直径约25nm，由α、β-微管蛋白亚基组成，具有形成细胞分裂时纺锤体的功能。
2. 微丝：直径约7nm，主要由肌动蛋白组成，参与细胞收缩、细胞运动和细胞骨架的组装。
3. 中间纤维：直径约10nm，主要由角蛋白、核纤层蛋白等组成，维持细胞形态和稳定性。
实验中，利用去垢剂Triton X-100处理细胞，破坏细胞膜和细胞内的蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白质被保护完好。
经戊二醛固定，蛋白质的特异性染料考马斯亮蓝R250染色后，用光学显微镜观察，可以见到细胞内一种以微丝为主的网状结构，即细胞骨架。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱鳞茎内表皮细胞、PBS缓冲液、M-缓冲液、1% Triton X-100、3%戊二醛、0.2%考马斯亮蓝R250染液、蒸馏水。
2. 实验仪器：普通光学显微镜、水浴锅、解剖刀、镊子、小培养皿、吸水纸、纱布、胶头滴管。
四、实验步骤1. 取洋葱鳞茎内表皮细胞，用解剖刀将其内表皮划成0.5cm×0.5cm的小格，用镊子撕取多片内表皮，浸入到盛有PBS缓冲液的培养皿中，静置5min。
2. 吸去PBS，加入1% Triton X-100处理20-25min，吸去Triton X-100。
3. 向培养皿中加入2ml M-缓冲液，浸没置于摇床上5min，重复两次。
4. 吸去M-缓冲液，加入0.2%考马斯亮蓝R250染液，染色10min。
5. 吸去染液，用蒸馏水冲洗3次。
6. 用中性树胶封片，置于显微镜下观察。
五、实验结果与分析1. 观察到洋葱鳞茎内表皮细胞细胞质中出现网状结构，即细胞骨架。
实验6细胞骨架的观察【精选】
质的固定效果好，且不破坏细胞骨架的结构。
0.2% 考马斯亮蓝R250染液： 考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白质染料，可以使细胞
内各种蛋白质染色。本实验中，有些骨架纤维(微管，2025nm)不稳定；有些纤维(中间纤维，8-11nm)太细，在光学 显微镜下无法分辨。 所以，我们观察到的主要是微丝束， 由许多微丝（5-7nm）结合在一起，直径约在40nm左右，考 马斯亮蓝R250染色对微丝束的显示起了夸大的作用。
8. 观察：光镜下观察可见表皮细胞的轮廓，细胞内存在 着被染成蓝色、粗细不等的纤维网络结构，便是细胞 骨架。转高倍镜下观察，转动微调可见细胞骨架的立 体结构。
五、注意事项：
1. 撕取洋葱鳞茎内表皮不可带茎肉，样本要展开铺平。 2. 去垢处理要掌握好时间和温度。 3. 染色时间需掌握好，必要时可分不同时间进行染色。 4. 观察时选择平展、染色适中的部位观察。
溶液配制：
M-缓冲液 咪唑 3.40 g，氯化钾 3.70g，氯化镁(MgCl2.6H2O) 101.65 mg，EGTA （乙二醇双醚四乙酸）330.35mg，EDTA（乙二胺四乙酸）29.22mg， 巯基乙醇 0.07ml，甘油 292 ml，蒸留水加至 1000 ml。
1%Triton X-100溶液 Triton X-100 1ml + M-缓冲液 99 ml 。
四、实验方法与步骤：
1. 取材：撕取洋葱鳞茎近中轴内表皮，浸入装有5ml PBS 溶液的小烧杯中 ，使其下沉，处理3次，每次3min。
2. 抽提：吸去 PBS溶液，加 3ml 1 % Triton X-100 入小烧 杯，置 37 ℃恒温箱处理20min。
3. 冲洗：吸去 TritonX-100 ，用 3ml M缓冲液轻轻洗 3 次， 每次 3min。
骨架的观察实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握利用光学显微镜观察细胞骨架的基本原理和方法。
2. 了解细胞骨架的组成、结构及其在细胞功能中的作用。
3. 培养实验操作技能和科学思维能力。
二、实验原理细胞骨架是真核细胞内的一种蛋白纤维网架体系，由微丝、微管和中间纤维组成。
它对于维持细胞的形态结构、细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等生理过程具有重要作用。
本实验采用去垢剂TritonX-100处理细胞，使细胞膜和大部分蛋白质溶解，而细胞骨架蛋白得以保留，随后使用考马斯亮蓝R250染色，以便在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱鳞片叶表皮细胞、TritonX-100、考马斯亮蓝R250、PBS缓冲液、Mbuffer、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、显微镜等。
2. 实验仪器：光学显微镜、离心机、冰箱、恒温培养箱等。
四、实验步骤1. 取洋葱鳞片叶表皮细胞，用镊子轻轻撕取约1cm²大小的组织，置于含有2ml PBS液的小皿中，湿润5分钟。
2. 吸去PBS液，向小皿中加入1.5ml 1%的TritonX-100，浸没细胞20分钟。
3. 吸去TritonX-100，向小皿中加入2ml Mbuffer，浸没细胞，置于摇床上5分钟，重复两次。
4. 将处理后的细胞滴于载玻片上，用盖玻片封片。
5. 将载玻片置于显微镜下观察，使用考马斯亮蓝R250染液染色，观察细胞骨架的网状结构。
6. 记录观察结果，并分析细胞骨架的形态、分布和功能。
五、实验结果与分析1. 观察到洋葱鳞片叶表皮细胞中存在明显的细胞骨架结构，呈网状分布。
2. 细胞骨架主要由微丝、微管和中间纤维组成，微丝呈细长的纤维状，微管呈管状结构，中间纤维呈较粗的纤维状。
3. 细胞骨架在细胞中分布均匀，覆盖整个细胞表面，与细胞膜紧密相连。
4. 细胞骨架在细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等生理过程中发挥重要作用。
六、实验结论通过本次实验，我们成功观察到了洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架结构，了解了细胞骨架的组成、结构及其在细胞功能中的作用。
细胞骨架的显示和观察
• 配方：
试剂 相对分子质量 所需浓度 每升加量 备注 咪唑 68.08 50mmol/L 3.40g KCL 74.55 50mmol/L 3.73g MgCl2。6H2O 203.30 0.5mmol/L 0.1g EGTA 380.40 1.0mmol/L 0.38g EDTA。2H2O 372.24 0.1mmol/L 0.04g B-巯基乙醇 78.13 1.0 mmol/L 70ul 甘油 92.09 4.0mmol/L 294.8ml 加水定容至1L，PH调至7.2
『实验内容和方法』
1、取材：撕取小块洋葱鳞茎内皮(约1cm2大小若干片) ，浸于6 mmol/L PBS中，使其下沉，处理5-10min。
2、抽提：吸去PBS，加2 ml 1%的TritonX-100，于37℃水浴处理 30min。
3、冲洗： 吸去TritonX-100，用M缓冲液轻轻洗3次，每次5min。 4、固定：3%戊二醛固定20min。 5、冲洗：弃戊二醛，用6mmol/L PBS液洗3次，每次5min。 6、染色：吸去PBS，用0.2%考马斯亮蓝R250染色10min。 7、制片：倒掉染液，用水洗2-3次，在载玻片上铺展开，加盖玻
错的纤维网络结构，按组成和形态结构的不同分为微 管（microtubule，MT）、微丝（microfilament， MF）、中间纤维（intermediatefilament，IF）。它 们对细胞的形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、 分化和物质的运输等起重要作用。观察和研究细胞骨 架可用光镜、电镜、间接免疫荧光技术、细胞化学技 术等方法。对光镜下细胞骨架的形态学观察多用1%的 TritonX-100（聚乙二醇辛基苯醚）处理细胞，使95% 以上的可溶性蛋白质以及全部脂质被抽提，再以蛋白 质染料考马斯亮蓝R250染色，使细胞内细胞骨架得以 清晰显现。
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实验4 细胞骨架的显示及观察
姓名：李思露
学号：131140040
一、实验目的
1.掌握用考马斯亮蓝R250染色观察动物和植物细胞骨架的原理和方法。
2.了解免疫荧光法检测细胞成分的原理和方法。
二、实验原理
1.细胞骨架：指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。
广义的细胞骨架包括细胞核骨架、
细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。
狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括微
管（microtubule，MT）、微丝（microfilament，MF）、中间纤维（intermediated
filament，IF）。
2.微管微管是细胞内由微管蛋白形成的直径约
呈放射状向胞质四周扩散，主要确定膜性细
胞器的位置和作为膜泡运输的导管。
微管蛋
白有α和β两种。
αβ异二聚体沿纵向聚
合成丝，原丝成环状排列形成微管的壁。
微管
不稳定，对低温（冷冻）、高压等物理因素及
秋水仙素（微管断裂剂）等化学因素敏感。
紫
杉醇可以和微管蛋白多聚体结合，抑制微管解
聚。
3.微丝：真核细胞内是主要由肌动蛋白（actin）组
成的直径为5～7nm的骨架纤丝。
主要分布在细胞
质膜的内侧，作用是确定细胞表面特征、并与细胞
运动、收缩、内吞等功能有关。
脊椎动物肌动蛋白
分为α、β和γ三种类型，不同种类细胞中肌动蛋
白组成不同。
肌动蛋白单体为球形，依次连接成链，
两串肌动蛋白链互相缠绕扭曲成一股微丝。
细胞松
弛素B为微丝断裂剂。
4.中间纤维：直径介于微丝和微管之间（7~11nm）、由多种不同蛋白组成的细胞骨架
（1）了解细胞骨架与细胞各种功能行使之间的关系。
（2）了解理化因素是否通过影响细胞骨架对细胞功能产生影响，以便趋利避害。
（3）鉴定发育中的细胞及肿瘤的来源。
6. 显示细胞骨架的常用方法：考马氏亮蓝染色法、免疫荧光染色法、鬼笔环肽标记法。
（1）考马斯亮蓝染色法原理及特点
原理：用去垢剂Triton X-100处理细胞适宜
时间，可以溶解膜脂，并与大部分非骨架蛋白疏水区结合而将其溶解，剩下的纤维状细胞骨架蛋白比较稳定而不被溶解，然后用蛋白染料
考马斯亮蓝染色即可显示其结构。
特点：非特异蛋白染色，不能区分微管、微丝、中间纤维
（2）免疫荧光染色法原理及特点 原理：用TritonX-100处理固定处理过
的细胞，可增加细胞膜通透性，使抗体 能够进入细胞内与细胞骨架蛋白结合。
接 着用荧光素标记的抗骨架蛋白抗体便可通 过直接免疫荧光法或间接免疫荧光法显示 骨架。
特点：特异显示各种骨架蛋白 （3）鬼笔环肽标记法原理及特点
原理：鬼笔环肽可特异性地结合肌动蛋白，因此，用荧光素标记的鬼笔环肽可以显示微丝。
特点：灵敏，能特异显示微丝。
三、 实验材料、试剂及用品
（一） 材料： 洋葱 （二） 试剂
（1）M-缓冲液。
（2）6mM 磷酸盐缓冲液（pH6.8）。
（3）含1%TritonX-100的M-缓冲液。
（4）用M-缓冲液配制的3.0%戊二醛。
（5）0.2%考马斯亮蓝R250染液。
（6）0.9%氯化钠生理盐水。
（三）用品
普通光学显微镜、荧光显微镜、水浴箱（ 37 ℃）
小剪刀、镊子、5mL一次性塑料注射器、胶头吸管、1.5mLEP管、1.5mL试管架四、实验操作
考马斯亮蓝染色法显示洋葱鳞茎内表皮细胞骨架
（1）材料准备：撕取洋葱鳞茎内表皮，裁成大小0.5cm×０.５ｃｍ的小片。
（2）PBS平衡：放入盛有1mL 6mmol/L磷酸盐缓冲液（pH6.8）的EP管中，静置使材料下沉（完全浸透）；然后用胶头滴管吸弃液体。
（3）TritonX-100处理：加1mL 1% TritonX-100溶液处理20min，然后用胶头滴管吸弃液体。
（4）洗涤：用M-缓冲液洗涤3次，每次加1.5mL溶液浸泡5min，然后用胶头滴管吸弃液体。
（5）固定：加1mL 3.0%戊二醛固定30min,然后用胶头滴管吸弃液体。
（6）洗涤：用PBS洗涤3次，每次浸泡5min,然后用胶头滴管吸弃液体。
（7）染色：用0.5~1.0mL 0.2%考马斯蓝R250染液染色10min。
（8）洗涤：用蒸馏水洗涤数遍。
（9）制备装片：给载玻片中央加1滴水，用镊子夹取样品在其中展开，然后加盖玻片。
（10）显微观察：在普通光学显微镜下，洋葱细胞骨架为布满细胞的蓝色网状结构。
（11）对照样品：①省去步骤（3），不用TritonX-100处理；②省去步骤（4）,用TritonX-100处理后不用M-缓冲液洗涤。
五、实验结果及结论
1.实验样品
图1洋葱鳞茎内表皮细胞骨架（400倍）
实验样品的细胞骨架分布细密均匀，视野中只剩下细胞骨架的蛋白质，被考马斯亮蓝染成蓝色。
在视野的上半部分，细胞的背景呈现蓝紫色，是由于最后洗涤不彻底所致。
2.对照样品①：不用TritonX-100处理
图2不用TritonX-100处理的洋葱鳞茎内表皮细胞骨架（400倍）不用TritonX-100处理的对照样品①的细胞中除了细胞骨架还有很多膜泡结构，细胞中还有蓝色的细胞核。
不用TritonX-100处理，使得视野中有很多非骨架蛋白，这些非骨架蛋白被考马斯亮蓝染成蓝色，影响对细胞骨架的观察。
3.对照样品②：用TritonX-100处理后不用M-缓冲液洗涤
图3用TritonX-100处理后不用M-缓冲液洗涤的洋葱鳞茎内表皮细胞骨架（400倍）图3和图2的情况类似，视野中没有均匀细密的细胞骨架，这是由于M-缓冲液使细胞骨架中的微丝保持稳定。
在M缓冲液中，其中咪唑是缓冲剂，EGTA 和EDTA螯合钙离子，溶液并提供镁离子，在低钙条件下，骨架纤维保持聚合状态并且较为舒张，便于观察。
用TritonX-100处理后虽然可以溶解膜脂和非细胞骨架蛋白，但是保留下来的骨架蛋白在没有M-缓冲液的作用下，其结构仍无法保持稳定，影响观察结果。
六、作业与思考题
1.比较用与不用1%TritonX-100处理的实验结果。
答：见五、实验结果与结论部分1、2。
2．查阅资料说明M-缓冲液中咪唑、MgCl2、EGTA、EDTA、巯基乙醇或二硫苏糖醇（DTT）在稳定细胞骨架中的作用。
答：在M-缓冲液中，咪唑是缓冲剂，MgCl2提供Mg2+,EGTA 和EDTA螯合Ca2+，在低钙条件下，骨架纤维保持聚合状态并且较为舒张，便于观察；巯基乙醇或二硫苏糖醇（DTT）可以在二硫键被打开后使蛋白质的四级或三级结构被破坏，由于巯基乙醇能够打开蛋白质的结构，它常常被用于蛋白质分析，且巯基乙醇也常常被用于保护蛋白质
中自由的半胱氨酸巯基之间不会错误形成二硫键。
3.设计检测微丝的间接免疫荧光法实验流程。
（1）用未标记的微丝抗体加到微丝抗原标本上，使抗原抗体充分结合，然后洗涤，除去未结合的抗体。
（2）加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体，标记的抗球蛋白抗体和已结合抗原的抗体进一步结合。
（3）立即用荧光显微镜观察。
观察标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示：（-）无荧光；（±）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清楚可见；（++）
荧光明亮；（+++ --++++）荧光闪亮。
待检标本特异性荧光染色强度达“++”
以上，而各种对照显示为（±）或（-），即可判定为阳性
七、反思与改进
1. 防止洋葱鳞茎内表皮卷曲、折叠，若卷曲折叠可以在洗涤的过程中慢慢展开，没还
展开，在制片时用镊子小心的将内表皮展开。
2．TritonX-100处理时间应足够，处理完洗涤应充分，否则胞内会存在膜泡状结构及其它杂蛋白，干扰骨架染色及观察，尽量保证各组各步处理的时间和方法一致。
3. TritonX-100处理后各步操作应轻柔，避免容器剧烈震荡及吸管吹打过猛引起骨架
蛋白束断裂。
有人追求时，内心的一份矜持是必要的，即使心里很爱，也需要给追求者时间和难度，这样两人走到一起才会珍惜感情、地久天长。