高效液相法测人参皂苷

以测Re、Rg1为例

1 色谱条件的选择

1.1采用C18（4.6mm×250mm，5um）

1.2流动相乙腈(A) - 水(B)，20:80

1.3流速1.0mL/min

1.4波长的选择（203nm）

以人参皂苷对照溶液在200 ~ 300nm 范围进行光谱扫描测定, 结果人参皂苷在nm 波长处有最大特征吸收, 选择nm作为人参皂苷的测定波长。

1.5温度30

1.6进样量10ul

2 溶液制备

2.1对照品溶液的制备精密称取干燥的人参皂苷Re对照品5.790mg 人参皂苷Rg1对照品6.325mg，置于50mL的容量瓶中，加入甲醇进行溶解并稀释至刻度，摇匀，后静置，即得对照品溶液( 其中含有人参皂苷Rg10.1235mg/mL，人参皂苷Re0.1028mg/mL)。

2.2 供试品溶液的制备取样品2g，至于具塞锥形瓶中，加甲醇5ml,超声10min,离心15min，转速为2500r/min，取上清液过滤，甲醇定容至5ml。加5ml水饱和正丁醇萃取两次，合并正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇定容至5ml。

2.3 阴性样品溶液的制备取缺少人参的其他药材，制成缺

少人参的阴性样品，再按照2.2项下的步骤制成阴性样品溶液。

3 系统适应性试验

取对照品溶液供试品溶液阴性对照品溶液按照1项下的色谱条件，分别将3种溶液以

10ul进样，测定分离度,均应≥1.5，色谱峰对称性，理论塔板数，说明空白对照样品的测定无干扰性。

4 线性关系考察分别精密取2.2项下的供试品溶液1、2、4、6、8、10、12 uL，按照1项下的色谱条件进样测定，以峰面积( Y) 对浓度( X) 进行线性回归，回归方程分别为( r=) 结果表明人参皂苷在g范围内线性关系良好。

5 精密度考察取2.1项下方法制备的对照品溶液10.0u L，在1色谱条件下依法重复进样6次，记录其峰面积，结果表明峰面积的RSD为%，表明其精密度良好。

6 稳定性考察取同一批供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24、36、48h，精密吸取溶液10 uL，注入高效液相色谱仪中，按照1项下进行测定，记录色谱峰面积结果峰面积的RSD为%，表明样品溶液在48h内基本稳定。

7 重复性考察取同一批号的样品溶液，按照上述2.2项下方法得供试品溶液5份，按照含量测定法，分别精密吸取10u L，按照1色谱条件，测定峰面积，结果峰面积的RSD为%，表明该含量测定方法重复性良好。

8 回收率试验精密吸取5份已知含量的样品20mL置于50mL的容量瓶中，各瓶中分别精密加入标准混合的储备液5.0、5.0 、7.0 、7.0 、9.0、9.0mL，加流动相稀释至刻度照1项下的色谱条件进行测定，平均加样回收率为%，RSD 为%。

9 样品含量测定取3批样品，按照2.2项下方法配制成供试品溶液，精密吸取10u L溶液，按照1色谱条件进行测定，同时按照外标一点法进行计算3批供试品的含量测定。

组分色谱柱流动相流速温度

1 Rb1Rb2Rc

RdReRg1

F1 F2

Rg3Rh1

Rh2C-K

PPD 250mm*4.6m

m，5um

水（A）—乙氰（B）

0(77%）→13(77%）→ 33(56%）

→38(32%）→45(32%）→55(0%）

60(0%）→ 63(77%）

1.0ml/m

in

25

2 Rg1 Re 250mm*4.6m

m，5um 二元梯度洗脱，需两个高压泵

0.1mol/LKH2PO4（A），为乙腈∶

水=75∶25，PH=3.5（B）

1.0ml/m

in

38

3 Rg1 200mm*4.6m

m，5um 乙腈- 水 ( 20 : 80 ) 1.0ml/m

in

室温

4 Rg1 、Re 、

R f、Rg 2 、

Rb1 、Rc、

Rb2、Rb3、

Rd 150mm*4.6m

m，5um

乙腈( A) - 水(B)

0(18% )→ 24(22%)→ 26(26%)

→30(32%)→50(33.5%)→

55(38%)

1.0ml/m

in

35

5 Rg1 Rb1 250mm*4.6m

m，5um 乙腈( A) - 水(B)

10(81% )→35(81-71%)→

50(71%)

1.2ml/m

in

30

6 Rg1 150mm*4.6m

m，5um 乙腈- 水 ( 25 : 75 ) 1.0ml/m

in

30

7 Rg1 Rb1 250mm*4.6m

m，5um 乙腈- 0.05%磷酸水溶液(18：82) 1.0ml/m

in

30

8 Rg1

Re Rb1 150mm*4.6m

m，5um

乙腈( A) - 水(B)

0(19% )→35(19-28%)→

50(28%)→60(28—29%)→

75(29%)

0.7ml/m

in

25

9 Re 乙腈 - 0.05 m o l /L 磷酸二氢

钾溶液( 19.5 : 80.5 ) 1.0ml/m

in

25

10 Rb1 250mm*4.6m

m，5um 乙腈-0.015%磷酸溶液（31∶69） 1.0ml/m

in

组分对

照

品

制

备

供试品制备

线性

关系

1 Re

10ul Re

0.3

mg/m

l

取1.5g ,水饱和正丁醇100ml ,称定重量, 加热回流

1小时,补足减失的重量, 滤过, 弃去初滤液, 取续滤

液5 0 ml用正丁醇饱和的氨试液洗涤4次( 50 , 5

0 , 40 , 30m l ) , 弃去氨液, 正丁醇液用正丁醇饱和

的水洗涤2 次( 50 , 40m l ) , 弃去水洗液, 正丁

醇液置水浴上蒸干,甲醇定容至10ml用微孔滤膜

( 0.4 5 mm ) 滤过

R e对照

品溶液

4 、8 、

1 2 、

16 、

20ul

2 Rb1

10ul Rb10.

4mg/

ml

0.9 g，甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，用

甲醇补足减少的重量，过滤，取续滤液20 ml，65 ℃

水浴蒸干，残余物用40 ml水饱和正丁醇分次溶解，

用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20 ml，保留正丁

醇液；合并二次水液，用水饱和的正丁醇萃取2次，

分别为20 ml、15 ml，弃去水液；合并前后的正丁

醇液，65 ℃减压浓缩至干。残余物加甲醇10 ml定

容用0.45 mm微孔滤膜滤过。

Rb1对

照品溶

液10、

20、50 ul

稀释10

倍10、

20 ul

3 Rg1

10ul Rg10.

22

5mg/

ml

20 g , 甲醇100 mL , 回流1 h ,滤过, 用甲醇洗残渣

3 次, 合并滤液, 蒸干。残渣加水40 mL溶解, 乙醚

萃取 2 次, 每次40 mL , 水饱和正丁醇萃取2次,

每次40 mL , 合并正丁醇层, 氨试液洗 2 次, 每次

40 mL , 正丁醇层蒸干溶剂,残渣加水10 mL 溶解

移至D 101 大孔吸附树脂柱(内径1 . 5 c m, 长

12 c m, 经

2 , 4 , 6 ,

8, 10 ,

12 ,14ul